A ■-' ^■\ / i;- »^ V i /-"^ni. w^ «^^. •^ . hL -N^ > / ZEITSCHRIFT FÜR WISSENSCHAFTLICHE MIKROSKOPIE UND FÜR MIKROSKOPISCHE TECHNIK Unter besonderer Mitwirkung von Prof. Dr. Leoj). Dippel in Dannstadt Prof. Dr. P. Schiefferdecker Prof. Dr. R. Brauns in Bonn in Giessen herausgegeben von Dr. WILH. JUL. BEHRENS in Göttingen Bmid XVII (Jahrgang 1900) Mit 2 Lichte! rucktafeln und 39 Holzschnitten LEIPZIG Verlag von S. H i r z e 1 1900 Alle Rechte vorbehalten. 57 ^^ I n h a 1 1 s y e r z e i c h 11 i s s. I. Abhandlungen. Seite Albrecht, H., Eine neue Construction eines Mikrotoms mit schiefer Ebene und ununterbrochen wirkender Mikrometerschraube von der Firma C. Reichert in Wien 159 Bethe, A., Das Molybdänverfahren zur Darstellung der Neurofibrillen und Golginetze im Centramerverisj'stem 13 Dipi)el, L., Einrichtung des gewöhnlichen Arbeitsmikroskopes zur Beobachtung der Achsenbilder doppeltbrechender Krystalle . 145 Drüner, L. , Ueber Mikrostereoskopie und eine neue vergrössernde Stereoskopcamera 281 Grosser, O., Mikroskopische Injectionen mit Eiweisstusche .... 178 Hanfland, F., Brütschrank mit elektrischer Heizung und Regulirung 440 Hartwich, C, Ueber ein neues Mikrometerocular 15G — , — , Ueber ein neues Mikrometerocular für Mikroskope mit fest- stehendem Objecttisch 432 Hellendall, H., Ein neuer Färbetrog für Serienschnitte 299 Heonlngs, C, Die Mikrotom-Technik des Chitins 311 — , — , Einige Bemerkungen zur Entpigmentirung von Arthropoden- Augen 32G Hoflfmaun, R. W., Ueber das Orientiren und Schneiden mikroskopisch kleiner, undurchsichtiger und dotterreicher Objecte .... 443 Jordan, H. , Ueber die Anwendung von Celloidin in Mischung mit Cedernholzöl 191 Kolster, R., Bequeme Dialysatoren für histologische Zwecke . . . 294 — , — , Eine einfache Vorrichtung zum gleichzeitigen Auswaschen mehrerer Präparate 9 JV Inhaltsverzeichniss. Seite Lavdüwsky, 31., Ueber eine Chromsubiimatverbindung und ihre histo- logische Anwendung, unter anderem aucli zur Restauration älterer Objecte 301 Lewinson, J., Zur Methode der Fettfiirbung 321 Mayer, P., Ein einfacher Objectschieber 7 Müller, F., Eine Drehscheibe als Diapositivträger für Projections- apparate 162 Neuberger, J., Ein einfaches Schulmikrotoiu 1 Schietferdecker, P., Ueber gläserne Farbtröge 107 Starlinger, J., Das neue Reichert'sche Schlittenmikrotom zum Schnei- den unter Wasser 435 Stepanow, E. M., Eine neue Einbettungsmethode in Celloidin . . . 185 — , — , Ueber die Anfertigung feiner Celloidinschnitte vermittels Anethols 181 Strehl, K., Studien an Mikroskopobjectiven 425 Tschernischeff , S., Ueber die Anfertigung mikroskopischer Präpa- rate des Nervensystems nach Dr. E. M. Stepanow .... 449 Wilson, F. T., A new System of obtaining directing-marks in micro- scopical sections for purposes of reconstruction by wax-plate modelling , 169 Zollikofer, R., Kammerfärbung der Leukocyten 313 II. Referate. Alexander , G. , Zur Kenntniss des Ganglion vestibuläre der Säuge- thiero 385 Argutinsky, P., Eine einfache und zuverlässige Methode, Celloi'din- serien mit Wasser und Eiweiss aufzukleben 37 Arnold, J. , Die Demonstration der Nervenendausbreitung in den Papulae fungiformes der lebenden Froschzunge 507 — , — , Siderofere Zellen und die „Granulalehre" . . . • 336 — , — , Ueber Granulafärbung lebender und überlebender Leukocyten 80 — , — , Ueber vitale Granulafärbung in den Knorpelzellen, Muskel- fasern und Ganglienzellen 482 — , — , Weitere Beobachtungen über „vitale" Granulafärbung ... 78 Ascoli , M. , Ueber das Vorkommen kernhaltiger Erythrocyten im normalen Blute 77 Atheston, L., The epidermis of Tubifex rivulorura Lamarck with espceial reference to its nervous structures 56 Bach, L., Experiuicntelle Untersuchungen und Studien über den Ver- lauf der Pupillen- und Sehfasern nebst Erörterung über die Physiologie und Pathologie der Pupillarbewegung .... 498 Inhaltsverzeichniss. V Seite Ballowitz , E. , lieber das Epithel der Membrana elastica posterior des Auges, seine Kerne und eine merkwürdige Structur seiner grossen Zellsphären 372 Baucroft, F. W. , Ovogenesis in Distaplia occidentalis Kitter, with remarks on other species 474 Baum, J., Beiträge zur Kenntniss der Muskelspindeln 358 Behrens, H., Mikrochemische Technik 525 Beck, M., u. Rabiuowitsch, L., Ueber den Werth der Courmont- schen Serumreaction für die Frühdiagnose der Tuberculose . 392 Becke, F., Der Hypersthen-Andesit der Insel Alboran 126 — , — . Die Orientirung der optischen Achse A in Anorthit .... 128 — , — , Ueber Alboranit und Santorinit und die Grenzen der Andesit- familie 128 Benda, C, Eine makro- und mikrochemische Reaction der Fett- gewebsnekrose 459 — . — , Erfahrungen über Neurogliafärbungen und eine neue Färbungs- methode 499 — , — , Paula Günther's neues Lupenstativ 199 ^, — , lieber den normalen Bau und einige pathologische Ver- änderungen der menschlichen Hypophysis cerebri 383 — , — , Weitere Beobachtungen über die Mitochondria und ihr Yer- hältniss zu Secretgranulationen nebst kritischen Bemerkungen 225 Benecke, AV., Ueber farblose Diatomeen der Kieler Föhrde .... 517 Bergh, R. S., Beiträge zur vergleichenden Histologie. II. Ueber den Bau der Getasse bei den Anneliden. 1. Abtheilung .... 4(36 Bethe, A., Ueber die Neurofibrillen in den Ganghenzellen von Wirbel- thieren und ihre Beziehungen zu den Golginetzen .... 506 Bircli- Hirschfeld, A., Beitrag zur Kenntniss der Netzhautganglien- zellen unter physiologischen und pathologischen Verhält- nissen 386 Bochenek, Drogi nerwowe przedniözdza salamandry plamitej . . . 236 Boks, D. B., Die Technik der Stauung am Kaninchenohr .... 255 Bolau, H., Glandula thyreoi'dea und Glandula thymus der Amphibien 67 Bonne, C, Note sur le developpement des cellules ependymaires. . 87 Boubier, A. M., Contributions ä l'etude du pyrenoi'de 257 Benin, P., Atresie des foUicules de de Graaf et formation des faux Corps jaunes. [Note preliminaire.] 212 Branca, A., Recherches sur la cicatrisation epitheliale (epitheliums cylindriques stratifies). La trachee et sa cicatrisation ... 74 Brauns, R., Beobachtungen über die Krystallisation des Schwefels aus seinem Schmelzfluss 129 — , — , Ueber den feineren Bau der Glandula bulbourethralis [Cow- PER'sche Drüse des Menschen] 370 Bristol, Ch. L., The metamerism of Nephelis. A contribution to the morphology of the nervous System, with a description of Ne- phelis lateralis 57 Brode, H. S., A contribution to the morphology of Dero vaga . . 56 VI . Inhaltsverzeichniss. Seite Bi'oman , J. , üeber Bau und Entwicklung der Spermien bei Bombi- nator igneus 209 Browicz, T., Das mikroskopische Bild der Leberzelle nach intra- venöser Hämoglobininjection 70 — , — , Intussusception der Erythrocyten durch die Leberzelle und die daraus möglichen Bilder der Leberzelle 70 — , — , Ueber intravasculäre Zellen in den Blutcapillaren der Leber- acini 12 — , — , Ueber Krystallisationsphänomene der Leberzellen 69 — , — , Zur Frage der Herkunft des Pigments in mclanotischen Neu- bildungen. Künstliche Krystallisation des Hämatoidins in der Zelle des Melanosarkoms 70 Bütschli, O. , Untersuchungen über Mikrostructuren des erstarrten Schwefels nebst Bemerkungen über Sublimation , Ueber- schmelzung und Uebcrsiittigung des Schwefels und einiger anderer Körper 400 Bulloch, W. , A simple apparatus for obtaining plate cultures er surface growths of obligate anaerobes 94 Byrnes, E. F., Experimental studies on the development of limb- muscles in Amphibia 75 — , — , The maturation and fertilization of the egg of Limax agrestis [Linne] 471 Calkins, C. N. , Mitosis in Noctiluca miliaris and its bearing on the nuclear relations of the Protozoa and Metazoa 462 Carlier, W., Changes that occur in some cells of the newt's stomach during digestion 216 — , — , Note on the presence of ciliated cells in the human adult kidney 365 Caruoy, J. B., et Lebriin, H., La cytodierese de l'oeuf. La vesicule germinative et les globules polaires chez les batraciens. . . 479 Certes, A., Colorabilite elective des filaments sporiferes du Spiro- bacillus gigas vivant par le bleu de methylene 394 Cesaris-Demel, A., Ueber das verschiedene Verhalten einiger Mikro- organismen in einem gefärbten Nährmittel 96 Chalon, J. , Liquides conservateurs pour echantillons botaniques en bocaux 256 — , — , Notes de botanique experimentale 452 — , — , Nouvelle serie d'experiences sur les colorations micro-chimi- ques des parois cellulaires 121 Chüd, eil. M., The early development of Arenicola and Sternaspis 205 Claudius, M., Ueber die Anwendung einiger gewöhnlicher Pflanzen- farbstoffe in der mikroskopischen Färbungstechnik .... 52 Clautriau, G,, Les reserves hydrocarbonees des Thallophytes ... 259 Claypole, A. M., The embryology and oögenesis of Anurida mari- tima [Guer.] 4Y0 Cloetta, 31., Kann das medicamentöse Eisen nur im Duodenum re- sorbirt werden? 494 Inhaltsverzeichniss. VII Seite Conkliu, G. G., The embryology of Crepidula, a contribution to tho cell lineage and early development of some marine Gastropods 65 Corning, H. K., Ueber die Färbung des „Neurokeratinnetzes" in den markhaltigen Fasern der peripheren Nerven 377 — , — , Ueber die Metliode von P. Kronthal zur Färbung des Ner- vensystems 85 Crampton, H. E., Studies upon the early liistory of the Ascidian egg 474 Curschmann , H. , Zur Untersuchung der Roseolen auf Typhus- bacillen ^. . . 108 Czapek, F., Zur Chemie der Zellmembranen bei den Laub- und Leber- moosen 119 Dale, H. H. , On some numerical comparisons of the centripetal and centrifugal meduUated nerve-fibres arising in the spinal ganglia of the mammals 240 Dangeard, P. A., Structure et Communications protoplasmiques dans le Bactridium flavum 260 Davis, B. M., The fertilization of Albugo Candida 521 Diercks, F., Etüde comparee des glandes pygidiennes chez les Cara- bides et les Dytiscides avec quelques remarques sur le classe- ment des Carabides 207 Dreyer, G,, Bacterienfärbung in gleichzeitig nach van Gieson's Me- thode behandelten Schnitten 392 Drummond, \V. B., On the structure and functions of ha^molymph glands 363 Duboscq, O., Recherches sur les Chilopodes 62 Eigner , A. , Ueber Trugbilder von Poren in den Wänden normaler Lungenalveolen 68 Eisen, G. , On the blood-plates of the human blood, with notes on the erythr(jcytes of Amphiuma and Necturus 488 — , — , The spermatogenesis of Batrachoseps 478 Emmert, J., Beiträge zur Entwicklungsgeschichte der Selachier, ins- besondere nach Untersuchungen an jüngeren Embryonen von Torpedo marmorata 477 Ernst, A. , Beiträge zur Kenntniss der Entwicklung des Embryo- sackes und des Embryo (Polyembryonie) von Tulipa Gesne- riana L .... 521 — , — , Ueber Pseudo-Hermaphroditisnius und andere Missbildungen der Oogonien bei Nitella syncarpa [Thuil.] Kütz 519 Faussek, V., Untersuchungen über die Entwicklung der Cephalo- poden 350 FedoroAA', E. v., Mikroskopische Bestimmung des Periklingesetzes . 530 — , — , Pseudoabsorption 406 Feinberg, H,, Erwiderung auf vorstehenden Artikel 246 — , — , Ueber das Wachstbum der Bacterien 243 — , — , Ueber den Bau der Bacterien 241 Fellenberg, E. v. , u. Schmidt, C. , Neuere Untersucliungen über . den sogenannten Stamm im Gneisse von Guttannen .... 125 yni Inhaltsverzeichniss. Seite Fischel, A., Ueber die Regeneration der Linse 371 Fischer, A., Fixirung, Färbung und Bau des Protoplasmas. Kritische Untersuchungen über Technik und Theorie in der neueren Zellforschung 40 Fischer, M., Beiträge zur Kenntniss der Nasenhöhle und des Thränen- nasenganges der Amphisbaeniden 66 Fitting, H., Bau- und Entwicklungsgeschichte der Makrosporen von Isoetes und Selaginella und ihre Bedeutung für die Kenntniss des Wachsthums pflanzlicher Zellmembranen 520 Flexner, S. , The regeneration of the nervous System of Planaria torva and the anatomy of the nervous System of double- headed forms 58 Foä, C, Ueber die feinere Structur der geschichteten Pflasterepithelien 74 Folsom, F. W., The anatomy and physiology of the mouthparts of the Collembolan, Orchesella cincta L 349 Foot, K., Yolk-nucleus and polar rings 64 — , — , The cocons and eggs of Allolobophora foetida 64 Foote, H. W., Ueber die phj^sikalisch-chemischen Beziehungen zwischen Aragonit und Calcit 528 Francotte, P. , Recherches sur la maturation, la fecondation et la segmentation chez les Polyclades 59 Fürst, C. M., Ringförmige Bildungen in Kopf- und Spinalganglien- zellen bei Lachsembryonen 385 Fütterer, G. , Die intracellulären Wurzeln des Gallengangsystems durch natürliche Injection sichtbar gemacht und die icterische Nekrose der Leberzellen 497 Fumagalli, A., Ueber die feinere Anatomie des dritten Augenlides . 373 Galloway, T. W., Observations on non-sexual reproduction in Dero vaga 347 Garnier, Ch., Contribution ä l'etude de la structur e et du fonction- nement des cellules glandulaires sereuses. Du role de l'ergasto- plasme dans la secretion 213 Gast, R., Beiträge zur Kenntniss von Apsilus vorax (Leidy) . . . 352 Gaullery, M. , et Mesnil, F., Sur un mode particulier de division nucleaire chez les Gregarines 205 Gehauer, E., Ueber die bacteriologischen Hülfsmittel zur Sicherung der Typhus -Diagnose. Mit besonderer Berücksichtigung des PiORKOWSKi'schen Plattenverfahrens 254 Georgewitsch , P. 31. , Zur Entwicklungsgeschichte von Aplysia de- pilans L 473 Glaessner, P., Ueber die Verwerthbarkeit einiger neuer Eiweiss- präparate zu Culturzwecken (I. Allgemeine Eignung mit be- sonderer Berücksichtigung der Diphtherie) 509 Godlewski, E., rozmnazanin jader w niesniach prazkowanych zwierzat krqgowych 357 Goleukiu, M., Algologische Mittheilungen [Ueber die Befruchtung bei Sphaeroplea annulina und über die Structur der Zellkerne bei einigen grünen Algen] 259 Inhaltsverzeichniss. IX Seite Gratziauüw, V., Ueber die sogenannte Kauplatte der Cyprinoideu . 477 Greeff, K., Anleitung zur mikroskopiscben Untersuchung des Auges 84 Gregoire, Y., Les cineses polliniques chez les Liliacees 2G4 Grifflii, B. B., Studies on the maturation, fertilization, and cleavage of Thalassema and Zirphaea 467 Guerrini, G., e Martinelli, A., Contributo alla conoscenza dell'ana- tomia rainuta dell'imene 371 Gulland, L. G., On the fixing and staining of blood-films .... 220 Gur witsch, A., Die Histogenese der ScHWAXN'sclien Scheide . . . 237 Hacker, V,, Praxis und Theorie der Zellbefruchtungslehre .... 47 Hammar, J. A., Ist die Verbindung zwischen den Blastomeren wirk- lich protoplasmatisch und primär? 54 Hardesty, J., The number and arrangement of the fibers forming the spinal nerves of the frog (ßana virescens) 88 Harris, A. F., Histology and microchemic reaction of some cells to anilin dyes. — Identity of the plasma-cell and Osteoblast. — Fibrous tissue a secretion of the plasma- cells. — Mast -cell elaborates mucin of connective tissues 455 Hauck, L., Untersuchungen zur normalen und pathologischen Histo- logie der quergestreiften Musculatur 48G Hein, W., Untersuchungen über die Entwicklung von Aurelia aurita 4(35 Hendrickson, AV. F., On the musculature and the duodenal portion of the common bile duct and of the sphincter 218 Henneberg, Das Bindegewebe in der glatten Musculatur und die so- genannten Intercellularbrücken 219 Henneberg, B., Die erste Entwicklung der Mammarorgane bei der Ratte 67 Henry, Etüde histologique de la fonction secretoire de l'epididyme chez les vertebres superieurs 363 Hesse, W., Ein neuer Culturgläserverschluss 391 Hobbs, W. H., Suggestions regarding the Classification of the igneous rocks 403 Hofmann, Die Rolle des Eisens bei der Blutbildung. Zugleich ein Beitrag zur Kenntniss des Wesens der Chlorose 491 Holmes, S. J., The early development of Planorbis 472 Holmgren, E., Noch weitere Mittheilungen über den Bau der Nerven- zellen verschiedener Thiere 91 — , — , Von den Ovocyten der Katze 482 — , — , AVeitere Mittheilungen über den Bau der Nervenzellen ... 90 — , — , Weitere Mittheilungen über die Öaftkanälchen der Nerven- zellen 506 Homberger, E., Zur Gonokokkenfärbung 394 Huber, C. G., A study of the operative treatement for loss of nerve substance in peripheral nerves 93 Hiiber, G. M,, A contribution on the minute anatornj- of the sympa- tlietic ganglia of vertebrates 505 Hultgreu, E. O., u. Andersson, O. A., Studien über die Physiologie und Anatomie der Nebennieren 215 X luhaltsverzeichniss. Seite Janni, R., Die feinen Veränderungen der Venenhäute bei Varicen . 358 Jolly, 31. J., Recherches sur la division indirecte des cellules lym- phaticiues granuleuscs de la moelle des os 360 Joseph, H., Beiträge zur Histologie des Amphioxus 475 Kazzander, G., Sul significato dei vasi nel processo della ossifica- zione endocondrale 485 Kelly, A., Ueber Conchit, eine neue Modification des kohlensauren Kalkes 529 Kemlitschka, Fr., Ueber die Aufnahme fester Theilchen durch die Kragenzellen von Sycandra 463 Kizer, E. J., Forraalin as a reagent in blood studies 359 Klein, A., Eine neue mikroskopische Zählungsmethode der Bacterion 509 Klein, C, Das Krystallpolymeter, ein Instrument für krystallogra- phisch- optische Untersuchungen 398 Klemm, G. , Ueber die Entstehung der Parallelstructur im Quarz- porphyr von Thal in Thüringen 530 Klett, Ad., Zur Kenntniss der reducirenden Eigenschaften der Ba- cterien 249 Klöcker , A. , Die Gährungsorganismen in der Theorie und Praxis der Alkoholgährungsgewerbe 453 Knower, H. M., The embryology of a termite [Eutermes] .... 470 Koenigsberger, J., Ueber die färbende Substanz im Rauchquarz . 406 Koernicke, M., Ueber die spiraligen Verdickungsleisten in den Wasser- leitungsbahnen der Pflanzen 258 Kohl, J. G., Dimorphismus der Plasmaverbindungen 520 Kolin, A., Ueber den Bau und die Entwicklung der sogenannten Carotisdrüse 365 Kolkwitz , R. , Beiträge zur Biologie der Florideen (Assimilation, Stärkeumsatz und Athmung) 263 Kolster, R., Studien über das Centralnervensystem. II. Zur Kennt- niss der Nervenzellen von Petromyzon fluviatilis 374 ^, — , Ueber das Vorkommen von Centralkörpern in den Nerven- zellen von Cottus scorpius. Vorläufige Mittheilung .... 236 Kopsch, Chabry's Apparat verändert durch den Verfasser .... 328 Kiilila, F., Die Plasmaverbindungen bei Viscum album , mit Berück- sichtigung des Siebröhrensystems von Cucurbita Pepo . . . 397 Ladewig, F., Ueber die Knospung der ektoprokten Bryozoen . . . 347 Lagerheim, G., Ueber ein neues Vorkommen von ^'ibriolden in der Pflanzenzelle 116 Land, W. J. G., Double fertihzation in Composita? 522 Laugenbeck. C, Formation of the germ-layers in the Amphipod Microdentopus gryllotalpa Costa 60 Laurent, 31., Ueber eine neue Färbemethode mit neutraler Eosin- Methylenblaumischung, anwendbar auch auf andere neutrale Farbgemische 201 Laveran, A., Au sujet de l'hematozoaire endoglobulaire de Padda oryzivora 341 Inhaltsverzeichniss. XI Seite Laveran, A., Sur un procede de coloration dos noyaux dos hemato- zoaires ondoglobulaires des oiseaux 340 Lefevre, G., Budding in Perophora (J4 Lelimauii, O., lieber Structur, System und magnetisches Verhalten Üüssiger Kiystalle 526 — , ^, Ueber flüssige Krj'stalle 52G — , — , Structur , System und magnetisches Verhalten flüssiger Kry- stalle und deren Mischbarkeit mit festen 52G Lemberg, J., Zur mil^rochemischen Untersucliung einiger Mineralien 527 Lensseu, J. , Systeme digestif et Systeme genital de la Neritina fluviatilis 208 Lidforss, B., Ueber den Chemotropismus der Pollenschläuche . . . 122 Linie, F. R. , On tho smallest parts of Stentor capable of regenera- tion; a contribution on the limits of divisibility of living matter 54 Linser, P., Ueber den Bau und die Entwicklung des elastischen Ge- webes in der Lunge 364 Livingston, B. E., On the nature of the Stimulus which causes the change of form in Polymorphie green alga3 518 Loewinson- Lessing, F., Kritische Beiträge zur Systematik der . Eruptivgesteine II 127 — , — , Kritische Beiträge zur Systematik der Eruptivgesteine III . . 404 — , -T, Studien über die Eruptivgesteine 125 Loisel, G., Etudes sur la Spermatogenese chez le moineau domestique 368 Loyez, M., Sur la Constitution du foUicule Ovarien des Reptiles . . 212 Maas, O., Die Weiterentwicklung der Syconen nach der Metamor- phose . 346 Macallum, A. B., On the cytology of non-nucleated organisms . . 516 MacCallum, J. B., On the muscular architecture and growth of the ventricles of the heart 485 Magnus , W. , Studien an der endotrophen Mykorrhiza von Neottia Nidus avis, L 395 Maugin, L., Observations sur la membrane des Mucorinees .... 262 Mankowski, A., Ein neues Nährsubstrat zur Isolirung von Typhus- bacillen und des Bacterium coli communis. Ein Beitrag zur Differentialdiagnose des Bacterium coli und des Bacillus typhi abdominalis 110 — , — , Ein Verfahren zum schnellen und leichten Unterscheiden von Culturen des Typhusbacillus vom Bacterium coli 109 Marcus, Ueber Nervenzellenveränderungen 380 Markl, Einige Rathschläge für die Einrichtung und den Betrieb der Pestlaboratorien 388 Martinotti et Tirelli, La microphotographie appliquee ä l'etude des collulos nerveuses des ganglions spinaux 504 Matliews, A., The changes in structure of the pancreas cell . . . 496 3Iatruchot, L., Sur une structure particuliere du protoplasma chez une Mucorinee et sur une propriete generale des pigments bacteriens et fongiques 263 XII Inhaltsverzeicbniss. Seite McFarlaud, F. M., Histo.logical fixation by injcction 39 Mc Gregor, J. H,, The spermatogenesis of Amphiuma 477 Mc3Iurrich, J. O., The epithelium of the so-called midgut of the ter- restrial Isopods *jl Mead, A. D., The early development of marine Annelids .... 55 — . — , The origin of the egg centrosomes 56 Mensch, C, Stolonization in Autolytus varians 467 Blerk, L., Experimentelles zur Biologie der menschlichen Haut. 1. Mit- theilung: Beziehungen der Hornschicht zum Gewebesafte . . 73 Merrell, W. D., A contribution to the life-history of Silphium . . 522 Meyer, A., Ueber Geissein, Reservestoffe, Kerne und Sporenbildung der Bacterien 251 Miller, W. S., Das Lungenläppchen, seine Blut- und Lymphgefässe 489 Mingazzini, P. , Cambiamenti morfologici dell'epitelio intestinale durante l'assorbimento delle sostanze alimentari 354 Möbius, M., Das Anthophäin, der braune Blütenfarbstoff .... 521 Moeli, Das Excenter-Rotationsmikrotom „Herzberge" 329 Moll, A., Zur Histochemie des Knorpels 356 Montgomery, Th. H., Comparative cytological studies, with especial regard to the morphology of the nucleolus 457 — , — , Studies on the Clements of the central nervous System of the Heteronemertini 58 Morgan, T. H., a. Hagen, A. P., The gastrulation of Amphioxus . 476 Morrill, A. D. , The Innervation of the auditory epithelium of Mu- stelus Canis, De Kay 83 Mügge, O., Zur graphischen Darstellung der Zusammensetzung der Gesteine 403 Müller, Fr., Ueber das Reductionsvermögen der Bacterien .... 99 Munson, J. P., The ovarian egg of Limulus 469 Nakauishi, H., Beiträge zur Kenntniss der Leukocyten und Bacterien- sporen 252 — , — , Vorläufige Mittheilung über eine neue Färbungsmethode zur Darstellung des feineren Baues der Bacterien 244 Nawaschin, S., Beobachtungen über den feineren Bau und Umwand- lungen von Plasmodiophora Brassicae Woron. im Laufe ihres intraccUularen Lebens 261 Negri, A., Di una fina particolaritä di struttura delle cellule di al- cune gliiandole dei Mammiferi ^^ — , — , Ueber die Persistenz des Kerns in den rothen Blutkörperchen erwachsener Säugethiere ''^ Nemec, B., Neue cytologische Untersuchungen 257 Nestler, A., Die Blasenzellen von Antithamnion Plumula (EUis) Tliur. und Antithamnion cruciatum (Ag.) Näg 118 Neumann, E., Eine Notiz über Trockenpräparate von Spermatozoon 210 Nicholls, J. B., Point in the technique of the Cox-Golgi method . 503 Noesske, H., Eosinoplüle Zellen und Knochenmark, insbesondere bei chirurgischen Infectionskrankheiten und Geschwülsten .... 483 Inhaltsverzeichniss. XIH Seite Niisbauiu , J. , Beitrüge zur Kenntniss der Innervation des Gefäss- systems nebst einigen Bemerkungen über das subepidermale Nervenzellengeflecbt bei den Crustaceen 347 Niittall, G. H. F., Ein Apparat zur Herstelhmg von Rollculturen 390 Oberinüller , K., Untersuchungen über das elastische Gewebe der Scheide [Resurae] 371 Orr, D., Method of staining medullated nerve -fibres en bh)C, and a 'moditiciition of Marchi's method 378 Overton, E., Studien über die Aufnahme der Anilinfarben durch die lebende Zelle 334 Papi)enheini, A., Vergleichende Untersuchungen über die elementare Zusammensetzung des rothen Knochenmarks einiger Säuge- thiere (Nebst Bemerkungen zur Frage des gegenseitigen Ver- hältnisses der verschiedenen Leukocytenformen zu einander) 78 Patten, AV., Variations in the development of Limulus Polyphemus 60 Patten, W., a. Hazen, A. P., The development of the coxal gland. branchial cartilages, and genital ducts of Limulus Polyphemus 468 Patten, AV., a. Eedeubaiich, AA^ A., Studies on Limulus .... 468 Petri , R. J. , Eine einfache Vorrichtung zum Abfüllen der Nähr- gelatine 389 — , — , Neue verbesserte Gelatineschälchen [verbesserte PETRi-Schäl- chen] 508 Petroff, N. , Neue Färbungsmethode für rothe Blutkörperchen in Schnittpräparaten 359 Philiijpe, C, et Gothai'd, E. de, Methode de Nissl et cellule ner- veuse en patbologie humaine 376 Pines, L., Untersuchungen über den Bau der Retina mit Weigert's Neurogliamethode 85 Piorkowski, Beitrag zur Färbung der Diphtheriebacterien .... 515 — , Zur Arbeit: „Der Werth des Harnnährbodens für die Typhus- diagnose" von Dr. Ernst Unger und Dr. Ernst Portner . 106 Plato, J., Ueber Gonokokkenfärbung mit Neutralroth in lebenden Leukocyten 112 Plenge, H., Ueber die Verbindungen zwischen Geissei und Kern bei den Schwärmerzellen der Mycetozoen und bei Flagellaten ; und über die an Metazoen aufgefundenen Beziehungen der Fhmmerapparate zum Protoplasma und Kern 114 Pokrowsski, sadelk kussotschkow tkanei w zelloi'din 331 Pokrowsski, M., Pribor dlja bysstrago obeswodnenija kussotschkow tkanei 38 Pollacci , P. , Intorno alla presenza dell'aldeide formica nei vegetati 121 Prettner, M., Die Zuverlässigkeit der STRAUss'schen Methode . . . 113 Provazek, S., Synedra hyalina, eine apochlorotische Bacillarie . . 260 Randolph, R. L., The regeneration of the crystalline lens .... 499 Ranvier, L., Des clasmatocytes 224 — , — , Histologie de la peau 72 Reich, C, Ueber die Entstehung des Milzpigments 495 XIV liihaltsverzeichniss. Seite Renaut, J., Traite d'histologie pratique 452 Retterer, E., Transformation de la cellule cartilagineuse en tissu con- jonctif reticule ^^^ Richter, O.. Ein neues Maceratiunsiuittel für Pflanzengewebe . . . 123 Ricker ii. Elleubeck, Beiträge zur Kenntniss des Muskels nach der Durelisehneidung seines Nerven 't'o Rinne, F., Bemerkung über die Polarisationswirkung von Linsen- riindern . . T 328 — , — , Das Mikroskop im chemischen Laboratorium 523 _^ _^ Ueber den Einfluss des Eisengehaltes auf die Modifications- änderung des Boracits 405 Ritter, W. E., Budding in Compound Ascidians, based on studies on Goodsiria and Perophora <34 Römer, P., Ein Beitrag zur Frage der Wachsthumsgeschwindigkeit des Tuberkelbacillus 393 Röthig, P., Ueber einen neuen Farbstoff Namens „Kresofuchsin" . 454 Rosenberg, O. , Phj-siologisch-cytologische Untersuchungen über Drosera rotundifolia L 122 Roseubusch, H., Studien im Gneissgebirge des Schwarzwaldes . . 124 Rosin, H., Einige weitere Bemerkungen über das Eosin-Methylenblau 333 Rothert, W., Die Krystallzellen der Pontederiaceae 397 Rousseau, E., Quelques mots ä propos de la technique microscopi- que dans l'etude des Spongiaires 462 Sala, Beitrag zur Kenntniss der markhaltigen Nervenfasern. . . . 504 Sand, R., Etüde monographique sur le groupe des Infusoires tenta- culiferes 461 Sauer, A., Granat als authigener Gemengtheil im bunten Keuper. . 407 Schaudinn, F<, Untersuchungen über den Generationswechsel bei Coccidien 341 Scheurlen, Die Verwendung der selenigen und tellurigen Säure in der Bacteriologie 104 Schneider, K. L., Mittheilungen über Siphonophoren. 5. Nesselzellen 464 Schroeder, P., Ueber einige Erfahrungen bei der Herstellung grosser Gehirnschnitte 382 Schutt, F., Centrifugales Dickenwachsthum der Membran und extra- membranöses Plasma . , 117 — , — , Die Erklärung des centrifugalen Dickenwachsthums der Membran 396 Schulze, W., Die Bedeutung der LANGERHANS'schen Inseln im Pankreas 496 Sclnvantke, A., Ueber Krystalle aus Taubenblut 363 Sclavuuos, Ueber Keimzellen in der weissen Substanz des Rücken- marks bei älteren Embryonen und Neugeborenen 93 Scott, B. A., The structure, microchemistry, and development of nerve cells, with especial referenee to their nuclein Compounds 233 Seeliger, O., Einige Bemerkungen über den Bau des Ruderschwanzes der Appendicularien 474 Inlialtsverzeicliniss. XV Seite Seidemnan, 31. O., Gisstologitscheskoe issslednwanie nervnoi sisstemy sossiuiistoi obolotschki glasa 239 Seligmaun, S., Die mikroskopischen Untersuchungsmethoden des Auges 84 Siethotf, E. G. A. ten, Eine einfache Construction des sogenannten Interferenzkreuzes der zweiachsigen Krystalle 525 Sjöbring, N., Ueber das Formol als Fixirungstliissigkeit. Allgemeines über den Bau der lebenden Zellen 337 Smidt, H. , Ueber die Darstellung der Begleit- und Gliazellen im Nervensystem von Helix mit der Golgimethode 65 Sniirnow, A. E., Die weisse Augenhaut (Sklera) als Stelle der sen- sibeln Nervenendigungen 508 — , — , Zur Frage der Art der Endigung der motorischen Nerven in den Herzmuskeln der "Wirbelthiere 38(3 — , — , Zur Kenntniss der Morphologie der sympathischen Ganglien- zellen beim Frosche 385 Smith, B. J., Note on the staining of flagella 514 Smith , S. , Note on the staining of sections while embedded in paraflin 333 Solger, B., Zur Kenntniss und Beurtheilung der Kernreihen im Myokard 486 Spirig, AV., Die Strepthothrix- (Actinomyces-) Natur des Diphtherie- bacillus 113 Stein , St. , Ein Beitrag zur mikroskopischen Technik des Schläfen- beins 355 Stewart, C. B., Apparatus for heating cultures to separate spore bearing micro-organisms 391 Strasburger, E., Einige Bemerkungen zur Frage nach der „doppelten Befruchtung" bei den Angiospermen 396 Studnicka, F. K. , Ueber das Vorkommen von Kanälchen und Al- veolen im Körper der Ganglienzellen und in dem Achsen- cylinder einiger Nervenfasern der Wirbelthiere 88 Suchard, E., Des vaisseaux sanguins et lymphatiques du poumon du triton crete 223 Sukatschotf, B., Ueber den feineren Bau einiger Cuticulae und der Spongienfasern 344 Supino, F., Osservazioni sopra l'anatomia degli Pseudoscorpioni . . 349 Thalniaun, Züchtung der Gonokokken auf einfachen Nährböden . . 511 Theohari, Etüde sur la structure fine de l'epithelium des tubes con- tournes du rein ä l'etat normal et h l'etat pathologique . . 366 — , Etüde sur la structure fine des cellules principales de bordure et pyloriques de l'estomac ä l'etat de repos et ä l'etat d'acti- vite secretoire 217 Toukoff, AV., Die Entwicklung der Milz bei den Amnioten .... 494 Turner, AV. , a. Hunter, M. B., On a form of nerve termination in the central nervous System, demonstrated by methylene blue 92 Uhma, Die Schnellfärbung des NEissER'schen Diplococcus in frischen, nicht fixirten Präparaten ; . . . 111 XVI Inhaltsverzeichniss. Seite Unger, E., u. Portuer, E., Der Werth des Harnnährbudens für die Typhusdiagnose 104 Vosniar, G. C. J. , Eine einfache Modification zur Herstellung von Plattendiagrammen 36 Walte, F. C, The structure and development of the antennal glands in Homarus americanus Milne-Edwards 348 Wallace, L. B., The germ-ring in the egg of the toadtish (Batra- chus tau) 66 Walsem, G. C. van, Versuch einer systematischen Methodik der mikro- skopisch-anatomischen und anthropologischen Untersuchung des Centrainer vensystems 227 Weideureich , F. , Ueber Bau und Verhornung der menschlichen Oberhaut 352 AVeil, K,, a. Frank, R., On the evidence of the Golgimethods for the theory of neuron retraction 237 Weinschenk, E., Natürliche Färbungen der Mineralien 130 — , — , Zur Classification der Meteoriten 404 Welcke, E., Eine neue Methode der Geisseifärbung 100 AVheeler, W. M., A new Peripatus from Mexico 57 Wilson, E. B. , Archoplasm, centrosome and chromatin in the sea- urchin egg 54 — , — , On protoplasmic structure in the eggs öf Echinoderms and some other animals 465 Wisselingh, C. van, Ueber Kerntheilung bei Spirogyra [Dritter Bei- trag zur Kenntniss der Karyokinese] 395 Wltticb, Beiträge zur Frage der Sicherstellung der Typhusdiagnose durch culturellen Nachweis auf Harngelatinenährböden . . . 107' Woltke, W., Beiträge zur Kenntniss des elastischen Gewebes in der Gebärmutter und im Eierstock 370 Wrlglit, J. H. , A simple method for anaerobic cultivation in fluid media 96 Wylie, J. W. van, A simple and rapid method for preparing neu- tral pikro-carmine 200 Yamagiwa, K., Eine neue Färbung der Neuroglia [Zugleich ein kleiner Beitrag zur Kenntniss der Natur von den Gliafasern] 379 Zacliarlas, E., Ueber die Cyanophyceen 260 Zettnow, E., Eomanowsky's Färbung bei Bacterien 246 Zumsteln, H., Zur Morphologie und Physiologie der Euglena gracilis Klebs 116 Verzeichiiiss der Mitarbeiter an Band XVIL Prosector Dr. H. Albrecht in AVien. Dr. W. Behrens in Göttingen. Prof, Dr. A. Bethe in Strassbiirg i. E. Prof. Dr. R. Brauns in Giessen. Dr. E. Czaplewski in Köln. Prof. Dr. L. Dippel in Darmstadt. Stabsarzt Dr. L. Drüner in Mülheim a. Rh. Dr. 0. Grosser in Wien. F. Hanfland in Heidelberg. Prof. Dr. C. Hartwich in Zürich. Dr. H. Hellendall in Strassburg i. E. Dr. C. Hennings in Berlin. Dr. R. W. HofFmann in Göttingeu. H. Jordan in Neapel. Dr. Riid. Kolster in Helsingfors. Dr. E. Küster in Halle a. S. Prof. Dr. M. Lavdowsky in St. Petersburg. Dr. J. Levinson in Dorpat. XVIII Verzeichniss der Mitarbeiter an Band XVII. Prof. Dr. Paul Mayer in Neapel. Dr. F. Müller in Tübingen. Prof. Dr. J. Neuberger in Freiburg i. B. Dr. N. Petroff in St. Petersburg. Prof. Dr. P. Sclüefferdecker in Bonn. Dr. E. Schoebel in Neapel. Dr. J. Starlinger in Wien. Dr. E. M. Stepanow in Moskau. Dr. K. Strelil in Erlangen. Dr. S. Tscberniscbeff in Moskau. Dr. G. C. van Walsem in Meerenberg (Holland). Prof. Dr. J. T. Wilson in Sydney, N. S. W. Dr. R. Zollikofer in Bern. Band XYIL Heft 1. Ein einfaches vScliulmikrotom, Von J. Neiiberger in Freiburg i. B. Hierzu vier Holzschnitte. Mit dem kleinen JiiNG'sclien sogenannten Studentenmikrotom lassen sich wohl Paraffinserien und gefrorene Objecte, nicht aber z. B. frische oder gehärtete pflanzliche Objecte zwischen HoUunder- mark schneiden. Auf diesen Uebelstand, der mir schon vor einigen Jahren aufgefallen war, wurde ich kürzlich durch Herrn Prof. Oltmanns, der ähnUche Erfahrungen wie ich mit dem Instrument gemacht hatte, wieder aufmerksam, und ich bemühte mich, dasselbe durch Anbrin- gung einer besonderen Vorrichtung auch für diesen Zweck tauglich zu machen. Aus den dazu nöthigen Versuchen hat sich im Laufe des vergangenen Jahres eine völlige Neuconstruction entwickelt, die, wie sich auf Anregung des Herrn Prof. Keibel herausstellte , auch zum Celloidinschneiden tauglich ist. Ich möchte dieselbe im Folgenden dem Urtheile der Herren Fachleute unterbreiten. Wenn das Instrument die oben gestellte Aufgabe leisten soll, so muss die Messerführung die Bewegung des Messers beim Schneiden aus freier Hand möglichst getreu nachahmen lassen. Dies ist that- sächlich bei verschiedenen Mikrotomen angestrebt z. B. bei dem Mikrotom mit kreisbogenförmig gekrümmtem Messer von Fromme ^ und dem Mikrotom mit Parallelführung des Messers. ^ ^) Diese Zeitschr. Bd. IX, 1892, p. 168. 2) Diese Zeitschr. Bd. VIII, 1891, p. 298 und Bd. XHI, 1896, p. 1. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 1. 1 Neiiberger: Ein einfaches Schulmikrotum. XVII, 1. Alle diese Instrumente sind aber sehr coniplicirt und daher theuer. Meiner Construction liegt folgende theoretische Ueberlegung zu Grunde : Zwei Kreise (Figur 1), ein grosser mit dem Halbmesser MA (etwa 11 cm lang) und ein kleiner mit dem Halbmesser M^A (etwa 1 cm lang) berühren sich in einem Punkte A von aussen, und es sei die gemeinsame Tangente AB dieses Punktes gezogen. Wenn nun der grosse Kreis sich sammt der Tangente AB um seinen Mittel- punkt M im 8inne des Uhrzeigers gleichförmig dreht, während der kleine fest bleibt, so gleitet AB nach und nach, anfangs langsam, dann rascher, über den kleinen Kreis weg, wo- bei jeder Punkt B der Tangente selbst einen Bogen eines mit M con- centrischen Kreises be- schreibt. Hat ein Punkt B bei der Drehung einen Widerstand , der nach Grösse und Richtung durch die Strecke CB (B senkrecht zu MB) dargestellt sei, zu über- winden , so lässt sich CB in die beiden Com- ponenten DB und EB zerlegen, von denen DB mit der Eichtuug von AB zusammenfällt, wäh- rend die zweite EB senkrecht zu AB ist und die Wirkung des Wider- standes allein darstellt. Es ist aus Figur 1 sofort klar, dass, wenn der Punkt B sich von A bis F bewegt, die auf AB senkrechte Componente wächst von bis zu einem gewissen Maximum, welches unter anderem von der Länge von AF und AM abhängt. Setzen wir an Stelle des Halbmessers des grossen Kreises einen um ]M drehbaren Arm MA, der an seinem Ende ein Messer mit der Schneide AB trägt, während an Stelle des kleinen Kreises ein zu schneidendes Object tritt, so treten die eben ausgeführten Ueber- 1) Diese Zeitschr. Bd. XIV, 1897, p. 324. XVU, 1. N e u b r g e r ; Ein einfaches Sebulmikrotüm. 3 legnngeii in Geltung, nnd es wird das Messer, beginnend mit dem Anfang A der Schneide und mit anfangs sehr geringem, dann aber stetig zunehmendem, vom 01)ject herrührendem Gegendruck durch letzteres hindurch gezogen (Figur 3). Dass diese Ueberlegung richtig ist, zeigen die guten Erfolge, die mit einem so gebauten Instrument in hiesigen Universitäts-Insti- tuten und von mir erzielt worden sind. Die praktische Ausführung ergiebt sich aus Folgendem: Ein horizontaler krahnartiger Arm ruht auf horizontaler Boden- platte, die am Tisch befestigt wird, und kann um eine verticale Achse ^N^Uiii*' 2. zwischen zwei Stahlspitzen, von denen die untere verstellbar und durch Gegenmutter zu befestigen ist, um mehr als 180^ gedreht werden. Der Arm ist in seiner äusseren Hälfte vertical geschlitzt. An ihm kann mittels einer durch Flügelmutter anzuziehenden Schraube, welclie im Schlitze ist, die das Messer tragende WALs'sche Gahel fest- geschraubt werden. Lockert man die Schraube, so kann die Gabel um die Achse der Schraube gedreht werden. Die Gabel ist so aus- geführt, dass die etwa o'5 cm lange Schneide eines links geschliffenen HEXKixG-Messers (von W. Walb in Heidelberg) tiefer liegt als die tiefste Stelle der Gabel. Der Objecthalter besteht, wie z. B. beim 1* Neuberg er: Ein einfaches Schulmikrotom. XVII, 1. JuNG'schen Mikrotom, aus zwei in einander gescliliifenen Messinghülsen, von denen die äussere in einem Schlitz der Bodenplatte verschoben und au jeder Stelle dieses Schlitzes von unten her auf die Platte festgeschraubt werden kann. Die innere Hülse wird mittels Mikro- meterschraube durch Drehung mit der Hand gehoben und zwar mit jedem Zahn des Zahnrades um 5 /t. Sie enthält die eigenthümlich construirte Objectklammer, welche aus zwei durch eine Schraube gegen einander zu pressenden Cjiindersegmenten besteht. Letztere sind aus Holz gefertigt und mit Messingbeschlag und Führung versehen, so dass die einander zugekehr- ten Seiten derselben stets parallel bleiben, wenn nur das Object selbst parallele Flächen besitzt und tief genug (etwa 5 cm) zwischen die Backen hineingeschoben wird. Als Einschnappvorrichtung dient eine Feder mit verticaler Sperrklinke, welche durch Verschiebung eines Stiftes in einfacher Weise in Thätigkeit gesetzt oder ausgelöst wird. Diese Sperrklinke liegt bei gewöhnlichem Gebrauch hinter der Mikrometerschraube (Figur 2); sie kann aber durch Drehung ihres Trägers an die Vorderseite gebracht werden (Figur 3) und dann nach geeigneter Einstellung mittels des Stiftes als Zeiger am Zahnrad benutzt werden, wenn man dickere Schnitte von 20 /^ auf- XVII, 1. Neuberger: Ein einfaches .Scliulmikrotom. wärts anfertigen und Zalinrad und Sperrklinke schonen will. Die Feststellung- der Sperrklinke an der Unterseite der Bodenplatte er- folgt durch dieselbe Schraube gleichzeitig mit dem Objecthalter, mit dem sie sich auch im Schlitz verschieben und drehen lässt. Letztere Bewegungen sind für die richtige Orientirung des Objectes vor dem Messer wichtig. Zum Schneiden von C e 1 1 o i d i n o b j e c t e n unter Alkohol wird ein Blechkasten benutzt (Figur 4) , der auf seiner Unterseite einen aufgelötheten Ansatz von der Form und Grösse der Einsatzhülse trägt und mittels desselben auf die äussere Hülse des Objecthalters gesetzt werden kann. Die Celloidinobjecte werden auf Stabilit- plättehen ^ aufgeklebt, wo sie leicht und sicher haften. Diese Plättcheu werden mittels Paraffin auf dem Boden des Kastens etwa an der der Hülse gegenüber liegenden Stelle befestigt. Zu diesem Zwecke schmilzt man ein etwa erbsengrosses Stück Paraffin auf der an- gegebenen Stelle durch vorsichtiges Erwärmen des Kastens von unten her (Bunsenbrenner) bis zum Zerfliessen, legt dann die Stabilitplatte 6 Neuberger: Ein einfaches Schulmikrotora. XVII, 1. auf, orientirt dieselbe und erwärmt, wenn nöthig, nochmals gelinde. Nach dem Erkalten haftet die Platte fest. Man giesst jetzt Alkohol (TOprocentig) zu und setzt die Messerklammer mit dem Messer ein. Letzteres ist so zu justiren, dass es möglichst wenig geneigt ist und sein dem Stiel zugekehrter Rand mit der Richtung nach der Dreh- achse zusammenfällt, da in diesem Falle die günstigsten Resultate erzielt werden. Paraf finobj ecte (Figur 2) werden in gewöhnlicher Weise auf einem Tischchen befestigt, dessen Stiel zwischen die Backen des Objecthalters eingeklemmt wird. Durch Drehung und Neigung ist Orieutiruug möglich. Zum Schneiden von frischem oder gehärtetem Pflanzen- material zwischen Hollundermark oder Leber (Figur 3) giebt man dem Messer dieselbe Stellung wie sie oben für Celloidinschnitte beschrieben wurde. Das Hollundermark kann noch zur Erhöhung der Festigkeit zwischen zwei Bleclirinnen eingefasst und mit diesen ein- gespannt werden. Das Mikrotom gestattet bei gutem Zustande des Messers Paraflin- serien von 5 ^, Celloidinserien unter Alkohol von 10 fx und HoUunder- markserien von 20 /^ zu schneiden. Die Grösse der Schnitte kann etwa ein Quadratcentimeter betragen, kann jedoch durch Vergrösse- rung des Modells beliebig gesteigert werden. Als Vorzüge des Instrumentes darf ich bezeichnen: 1) Vielseitige Verwendbarkeit wegen der leichten Verstellbarkeit von Messer und Ob- ject sammt Einschnappvorrichtung, 2) kleines Messer mit gerader Schneide, die vollständig ausgenützt und von jedem leicht abgezogen werden kann, .3) geringer Preis. '^ 1) Diese Zeitschr. Bd. XI, 1894, p. 237. -) Die Firma Hellige u. Co. in Freiburg i. B. liefert das Mikrotom in braun gebeiztem Holzkasten mit einem Messer für 30 Mark. Besonders berechnet werden der Blechkasten 4 ^lark und die GctViervorrichtung mit 5 Mark. Weitere Messer kosten 2 Mark das Stück. Freiburg i. B., den 12. Februar 1900. [Eingegangen am 13. Februar 1900.] XVIT, 1. Mayer: Ein einfacher Objectschieber. Ein einfacher Objectschieber. Von Paul Mayer in Neapel. Hierzu zwei Holzschnitte. Seit reichlich zehn Jahren benutze ich bei der Durchsuchung von Dauerpräparaten, um sie auf dem geneigten Tisch des Mikroskops bequem verschieben oder festhalten zu kijnuen, einen ganz einfachen und billigen Apparat, den ich just seiner Einfachheit ::;liJ£liill:;nLli,;li;:i:iil»Jii{;::{ii;iil;i|:ql!;:ii;;tl;;ili:tili!' halber bisher nicht beschreiben mochte. Da er neuerdings aber bei Anderen Anklang gefunden hat, so möchte ich ihn auch weiteren Kreisen zugänglich machen. Er besteht aus einer dünnen Metallplatte (Figur 1, in natürlicher Grösse, für Stativ IIA von Zeiss), die von jedem Mechaniker oder Uhr- macher leicht angefertigt werden kann. Ihre Grösse richtet sich nach dem Mikroskop. Die Platte ist so zugeschnitten, dass ihre Seitenkanten sich ziemlich genau, aber ohne Reibung, zwischen den Basen der ge- wöhnlichen Objectklemmen verschieben lassen (Figur 2). Von der einen Klemme entfernt man am besten den federnden Obertheil: der der anderen dient hingegen zum Andrücken der Platte auf den Tisch, da- mit sie mit etwas Reibung geht, und dieser Druck lässt sich durch Mayer: Ein einfacher Objectschieber. XVII, 1. die Schraube am Obertheil der Klemme in weiten Grenzen reguliren. Die Basen beider Klemmen befestigt man in ihren Löchern, wenn sie nicht schon von selbst fest genug darin sitzen, einfach durch Zugabe einiger Wattefäden oder eines Fetzchens Papier. Die Platte ist ferner da, wo der Objectträger an sie augelegt wird, rechtwinklig nach oben gebogen (Figur 1) , jedoch ist diese Leiste in der Mitte wieder ausgefeilt, damit auch starke Linsen nicht daran stossen. Beim Gebrauch verschiebt man die Platte mit den beiden Daumen, die man an die Flügel a (Figur 1) anlegt, während mau den Objectträger mit den Zeigefingern sanft dagegen drückt. Nach ganz kurzer Hebung ist es ein Leichtes , jede Stelle des Präparates XVII, 1. Kolster: Vorrichtung zum Auswaschen mehrerer Präparate. 9 im Nu unter die Linse im Gesichtsfeld zu bringen; will man aber das Präparat systematisch durchsuchen, so verschiebt man zunächst nur die Platte ein wenig, lässt dann den Objectträger (mit den Zeige- fingern) daran entlang gleiten, verschiebt die Platte wieder um ein Geringes, führt den Objectträger in der entgegengesetzten Richtung daran entlang etc., kurz, ertheilt dem Präparate einen Zickzackkurs. Natürlich sind diese Operationen nicht ganz so exact auszuführen wie mit Zahn und Trieb , dafür ist man aber nicht an deren lang- samen Gang gebunden. Ist der Tisch vierkantig (nicht rund, wie in Figur 2), so kann man die Flügel bis an die Seitenräuder des Tisches verlängern und abwärts biegen, um auch hier noch eine Führung zu haben, aber nötliis: ist das nicht. 'ö Neapel, Zoologische Station, im Januar 1900. [Eingegangen am 20. Januar 1900.] Eine einfache ^Vorrichtung zum gleichzeitigen Auswaschen mehrerer Präparate. Von Dr. med. Rud. Kolster, Docent der pathologischen Anatomie in Helsingfors (Finland). Hierzu zwei Holzschnitte. Die in letzter Zeit zum Studium degenerativer Veränderungen im Rückenmark eingeführte MARCHi-Methode verlaugt, wie Osmium- präparate überhaupt, eine gründliche Entfernung der Osmiumsäure aus allen Präparaten durch Auswaschen, bevor dieselben mit Alkohol behandelt werden dürfen. Bei derselben hat man es aber gewöhn- lich mit einer grossen Anzahl von Präparaten zu thun, die, um eine vorliegende Arbeit nicht ins Stocken zu bringen, gleichzeitig aus- zuwaschen sind. 10 K ölst er: Vorrichtung zum Auswaschen mehrerer Präparate. XVII, 1. Wo über g-enügend Hähne an der Wasserleitung- zu verfügen ist, lässt dieses sich leicht ausführen, in Privatwohnungen aber, wo oft das Arbeitszimmer keinen Anschluss an die Wasserleitung hat, kann der Vortheil, den einem das strömende Wasser hierbei bietet, nur selten und dann oft auch nur mit Schwierigkeiten hierzu be- nutzt werden. In meiner Privatwohmmg und in letzter Zeit auch im Patlio- logischen Institut hierselbst, habe ich seit Jahren, um diesen Schwierig- keiten zu entgehen, eine äusserst einfache Vorrichtung benutzt, die sich mir als äusserst zweckmässig erwiesen hat. Dieselbe besteht aus folgenden Theilen (Figur 1 und 2) : 1. 1) Einer grossen, mehrere Liter haltenden Wasserflasche mit einer Ausflussöffnung am Boden. Dieselbe wird mit einem durchbohrten Kork, welcher ein dünnes Glasrohr trägt , verschlossen. Vermittels eines Gummischlauchstückes wird dieses Glasrohr mit einem anderen verbunden , dessen zweites Ende in eine äusserst feine Spitze aus- gezogen ist. Eine an dem Schlauche angebrachte Klerampincette erlaubt, den Wasserausfluss zu regeln, so dass derselbe stärker oder nur tropfenweise erfolgt. 2) Einer Anzahl grosser Probirröhrchen, wie dieselben zur Wasser- analyse in der Bacteriologie gebraucht werden. Dieselben werden mit doppelt durchbohrten Korken (entweder Gummi oder gewöhnlicher Kork) verschlossen. Durch das eine Loch wird eine winkelig ge- XVII, 1. Kolster: Vorrichtung zum Auswaschen mehrerer Prcäparatc. H bogene Glasröhre gesteckt, welche bis auf den Boden des Pro- birrohres gellt. Das untere Ende derselben habe ich gewöhnlich mit einer trichterförmigen Erweiterung versehen , die ja mit je- dem Spiritusbrenner anzufertigen ist. Nothwendig ist dieselbe aber nicht. Durch das zweite Loch des Korkes wird eine kurze winkelig gebogene Röhre gesteckt, so dass dieselbe oben aus der unteren Seite des Korkes hervortritt. Auf den Boden des Probirrohres kommt eine nicht allzu lockere Lage hydrophiler Baumwolle. Die durch die Pfropfen der so vorbereiteten Probirröhrchen r gehenden Glasrohre werden mittels kurzer Gummischläuche verbunden und zwar so, dass stets ein kurzes mit einem bis zum Boden reichen- den Rohr verbunden wird. 3) Einem Probirröhrchen, welches wie die oben erwähnten aus- gerüstet ist, aber mit dem Unterschiede, dass das auf den Boden herabreicbende Rohr ungefähr die doppelte Länge des Probirröhrchens hat, ungebogen bleibt und mit einem am oberen Ende angeschmolzenen Trichter versehen ist. Das kurze gebogene Glasrohr wird mit dem langen auf den Boden reichenden Rohr, welches bei der sub 2 beschriebenen Ver- bindung des ersten Probirröhrchens frei blieb , mit einem kurzen Schlauchstück verbunden. 12 Kolster: Vorrichtung zum Auswaschen mehrerer Präparate. XYIl, 1. 4) Einem Gefäss, gross genug, um die in der siib 1 beschriebenen Flasche enthaltene Wässermenge aufzunehmen. Um diesen einfachen Apparat zum Auswaschen zu benützen, werden die in einer grösseren Wasserschale kurz abgespülten Prä- parate in die mit Wasser gefüllten Probirröhrchen gebracht, dieselben werden verschlossen und numerirt oder anderweitig bezeichnet. Die Serie Rohre wird darauf auf in die Wand eingeschlagene Nägel gehängt, entweder in waagerechter Reihe, oder falls die Wasser- höhe des Trichterrohres nicht genügt, um ein tropfenförmiges Aus- fliessen aus dem letzten durch das kurze gebogene Rohr hervor- zubringen, in treppenförmiger Anordnung. Die sub 1 erwähnte Flasche wird etwas höher stehend an- gebracht, mit Wasser gefüllt und die Aussflussgeschwindigkeit ver- mittels der Klemmpincette so regulirt, dass dieselbe tropfenweise erfolgt. Ist ein stärkeres Fliessen des Wassers erwünscht, so re- gulirt man die Ausflussgeschwindigkeit nach Wunsch. Ich selbst habe anfangs eine etwas stärkere xVusflussgeschwindigkeit für günstig gefunden, dieselbe aber meistens schon nach kurzer Zeit auf eine tropfenförmige beschränkt. Selbstverständlich wird das ablaufende Wasser in dem sub o erwähnten Gefäss aufgefangen. Wo die Grösse der Probirröhrchen zur Aufnahme der Präparate nicht genügt, können grössere Gefässe eingeschaltet oder allein be- nutzt werden. ^ Der mit dieser Vorrichtung in jedem Probirröhrchen oder Gefäss erzeugte, langsame Strom ist vollkommen genügend um z. B. bei einem Verbrauch von G Liter Wasser 12 Marchi - Präparate von 0'5 cm Dicke vollkommen auszuwaschen. In jeder Beziehung ist derselbe dem Einlegen der Präparate in grössere Wassermeugen oline Strom vorzuziehen. Im Institut habe ich diese Vorrichtung auch im Anschluss an die Wasserleitung als bequem und zweckmässig erprobt. Trotzdem die oben beschriebene Vorrichtung äusserst einfach und nach für andere Zwecke sclion längst bekannten Principien con- struirt ist , vielleicht auch , ohne dass es mir bekannt wurde, schon anderswo im Gebrauch befindlich ist , habe ich es dennoch für an- gebracht gehalten, vorliegende kurze Beschreibung zu veröfl'entlichen. ^) Falls man es vorzieht, kcinnen ebenfalls U-Röhrchen hier Verwen- dung finden. XVII, 1. Bethe: Das Molybdänverfahren. 13 Wir nieln-ercii mir bekannten Anordnungen bietet dieselbe jeden- falls bedeutende Vorzüge. Helsingfors, im December 1899. [Eingegangen am 22. Januar 1899.] [Aus dem Physiologischen Institut der Universität Strassburg i. E.] Das Molybdänverfahren zur Darstellung der Neurofibrillen und Golginetze im Central- nervensystem. Von Albrecht Bethe in Strassburg. Vorbemerkungen. Auf den hier folgenden Seiten veröffentliche ich eine Methode, deren ich mich seit einiger Zeit bediene, um die Neurofibrillen (Pri- mitivfibrillen) in Ganglienzellen und Nervenfasern von Wirbel- thieren und Wirbellosen darzustellen. Gleichzeitig ist man auch im Stande, mit ihrer Hülfe gewisse netzige Structuren, welche bei Wirbel- thieren hauptsächlich um die Ganglienzellen localisirt sind, zu färben. Sie wurden zuerst von Golgi (2) gesehen und nach ihm von Meyer (3), Held (4), Auerbach (5) [?] und Donaggio (6) beschrieben. Ich nenne diese Gebilde im Folgenden nach ihrem Entdecker „Golginetze". Eine ausführliche Beschreibung meiner mit dieser Methode erzielten Resultate gebe ich gleichzeitig mit dieser Arbeit im „Archiv für mikroskopische Anatomie" in Druck, Avo sie bald erscheinen wird. Schon vor zwei Jahren habe ich einige Resultate an wirbellosen Thieren veröffentlicht und bald darauf eine kurze Untersuchung des Fibrillenverlaufs in den Gan- glienzellen von Wirbelthieren gegeben (1); in diesen Arbeiten habe ich nur kurz die der Methode zu Grunde liegende Reaction erwähnt, 14, Betlie: Das Molybdänverfaliren. XVII, 1. sie aber nicht ausführlicli bescbrieben. Das ist mir von verschie- denen Seiten verargt worden. Ich habe dazu Folgendes zu be- merken: Man kann mit einer noch ganz unfertigen Methode sehr wohl häufig gute Resultate erzielen und darf diese publiciren , weil man im Stande ist, jeden AugenbUck die beschriebenen Dinge durch Präparate zu belegen. Eine Methode soll man aber nur dann publi- ciren, wenn sie nach allen Richtungen hin ausgebaut ist und sich in vielen Fällen bewährt hat, wenn alle Bedingungen soweit wie mög- lich erforscht und die Fehlerquellen erkannt sind. Würde dieser Grundsatz hinlänglich beherzigt, so besässen wir nicht in der Histo- logie eine solche Unsumme von Methoden von untergeordneter Brauch- barkeit. Es war nicht wissenschaftlicher Geiz, der mich veranlasste, vor der Hand die Art meines Verfahrens für mich zu behalten, wie mir von verschiedenen Seiten zu verstehen gegeben wurde, sondern die Einsicht, dass die Methode in ihren Anfängen für keinen Anderen als für mich Werth haben konnte. Ich wollte dem Vorwurf ent- gehen, eine Methode gegeben zu haben, die nichts taugt, und wollte verhindern , dass die Literatur mit einer Fluth von noch unbrauch- bareren Modificationen überschwemmt würde. Fertig ist die Methode in der vorliegenden Form nicht , d. h. sie giebt nie sichere und gleichmässige Resultate. Ob sie in diesem Sinne jemals fertig wer- den wird, scheint mir sogar zweifelhaft. Die in Betracht kommen- den Factoren sind so zahlreich, dass ein vollkommenes Durcharbeiten aller Möglichkeiten noch Jahre in Anspruch nelimen würde , die ich zu 0])fern nicht geneigt bin. Vielleicht gelingt es einem Modificator durch eisernen Fleiss — oder, was wahrscheinlicher ist, durch Zu- fall — , die Methode zu einer exacten zu machen. Wenn sie nun auch allen Anforderungen noch nicht genügen kann, vor allem für patho- logische Zwecke nicht verwendbar ist, so gestattet sie doch bei einiger Uebung oft sehr schöne Bilder zu erzielen, so dass ich sie getrost jetzt dem allgemeinen Gebrauch übergeben kann. Aerger wird sie Jedem bereiten, der mit ihr arbeitet — das will ich gleich voraus- sagen — aber sie vermag bei geeigneter Anwendung nach verschie- denen Richtungen hin neue Einblicke in den Aufbau des Nerven- systems zu geben und, wenn, wie ich hoffe, mit ihrer Hülfe bald die in der oben augekündigten Publication niedergelegten Resultate weit überflügelt sind, so ist der viele Aerger, den ich selber mit ihr während dreier Jahre gehabt habe, nicht vergeblich gewesen. Lange Erfahrung ist bei ihr die Hauptsache , weil man fast in jedem Fall etwas anders verfahren muss ; aber selbst die grösste Erfahrung lässt XVII, 1. B etile: Das Molybdänverfahren. 15 manchmal hier im Stiche, in zwei Tagen ist ihre Anwendung nicht zu erlernen und ich bitte nur Diejenigen, welche geneigt sind, einige Zeit darauf zu verwenden , sich überhaupt mit ihr zu beschäftigen. Um aber nicht von vorn herein von ihrer Benutzung abzuschrecken, Avill ich erwähnen, dass die drei Herren , die sie bei mir zu lernen versuchten, sie nach einigen Tagen ziemlich beherrschten. Als ich mich an die Ausbildung einer eigenen Methode zur Dar- stellung der Neurofibrillen heranmacLte , ging ich von der Ansicht aus, dass die Substanz der Fibrillen, welche bei dem ApAXHv'schen Verfahren (7) in so hohem Maasse das Goldchlorid aufspeichert, in Alkohol löslicli sei. Ich entnahm dies der ApATHv'schen Angabe, dass Celloidinblöcke , die lange in Alkohol gelegen haben, keine Färbung der Neurofibrillen nach seiner Goldmethode mehr zulassen. Da es nun auf Grund der ApATHY'schen Methoden (7) nicht im- wahrscheinlich erschien, dass diese vorausgesetzte Substanz Doppel- salze mit Sublimat und Goldchlorid bildete , so gründete ich meine Methode darauf, sie an Molybdänsäure , Wolframsäure oder deren complexe Verbindungen mit Phosphorsäure zu binden, welche Säuren Salze von ähnlichen Eigenschaften, wie sie die Doppelsalze des Sublimats und Goldchlorids besitzen, bilden, sie dadurch Alkohol- beständig zu machen und nachher die angelagerte seltene Mineralsäure zur secundären Bindung eines intensiv gefärbten basischen Farbstoffes zu benutzen. Ich nahm dabei an, dass diese Substanz x basischen Charakter habe, und die Fieactionen im Präparat sollten etwa folgen- dermaassen chemisch vor sich gehen : 1) ysaure Substanz x -|~ molybdänsaures Ammonium = molyb- dänsaure Substanz x -\- ysaures Ammonium, 2) molybdänsaure Substanz x -j- salzsaures Toluidinblau ^ mo- lybdänsaures Toluidinblau -f- salzsaure Substanz x. Es würde so zwar nicht die Fibrille selbst gefärbt, sondern nur ihr Ort durch das unlösliche Farbsalz kenntlich gemacht. Da molybdänsaures Ammonium schlecht fixirt, so fixirte ich mit Pikrin- säure (die wie die Molybdänsäure sehr viele Basen wasserunlöslich bindet) und wandelte die gebildeten Pikrate nachträglich durch Be- handlung mit molybdänsaurem Ammonium in stark saurer Lösung in die Molybdate um. Thatsächlich erhielt ich auf diese Weise bei Hirudo meine ersten und durchaus nicht schlecbtesten Fibrilleubilder. Die Resiütate Avaren aber sehr unsicher. Andere Versuclie zeigten mir dann bald, dass die Annahme der Alkohol-Löslichkeit der Sub- stanz nicht begründet sei. Apathy selber hat sich inzwischen, wie ich IQ Bethe: Das Molybdänverfahren. XVII, 1. mündlicher Mittheilung; verdanke, davon überzeugt, dass auch solche Blöcke, die lange in Alkohol gelegen haben, noch färbbar sind; es zeigte sich also die Thatsache, auf die ich meine Annahme begründet hatte, als unrichtig. Dadurch war die Möglichkeit gegeben, andere Fixirungsmittel in Anwendung zu bringen, was insofern von grossem Vortheil ist, als Pikrinsäure nur für wenige Objecte sich günstig erweist. Auch an der chemischen Bindung der Molybdänsäure durch die Fibrillensubstanz sind mir Zweifel aufgestiegen, weniger durch die Arbeit von Fischer (8), welche eine rein mechanische Theorie der Färbung aufstellt (denn es handelt sich ja im vorliegenden Fall nur um eine Wirkung der Molybdänsäure, die der eines Farbstoffes ganz analog ist), als durch die Theorie Spiro's (9), dass wir es bei den histologischen Färbungen mit einer Lösung des Farbstoffs in dem zu färbenden Medium zu thun haben. (Dass die mechanische Ad- sorptionstheorie Fischer's einseitig und unbefriedigend ist, werde ich an anderer Stelle zu zeigen versuchen). Zwar lässt sich für meine Methode die Möglichkeit nicht aus- schliessen, dass wir es doch mit einem chemischen Vorgang zu thun haben, es werden aber alle Thatsachen auch schon durch die Annahme ei'klärt, dass es sich nur um Lösung der Molyb- dänsäure (oder des molybdänsauren Ammoniums) in der Fibrillen- substanz und allen sich sonst noch färbenden Zellbestandtheilen han- delt. Ein rein chemischer Vorgang würde dann bei dieser Methode nur noch die Reaction der Molybdänsäure mit dem basischen Farb- stoff sein. Es muss hier aber besonders hervorgehoben werden, dass bei der Annahme der SpiRo'schen Lösungstheorie das Resultat der Färbung sehr wohl chemische Differenzen der gefärbten Bestandtheile zum Ausdruck bringt, indem eben der Lösungscoefficient einer be- stimmten färbbaren Substanz für einen bestimmten Farbstoff (resp. die Molybdänsäure) von ihrer chemischen Constitution abhängig ist. Mechanische Verhältnisse spielen bei der Färbung eine Rolle — das hat Fischer vollauf bewiesen — , aber von ihnen hängt das Färbungsresultat nicht allein ab. Genauer will ich hier auf die Färbungstheorie und auf die Stellung meiner Methode in ihr nicht eingehen, sondern dies für eine spätere Gelegenheit aufsparen. Für die Praxis der Methode galt es , aus der grossen Anzahl basischer Farbstoffe einen auszuwählen, der bei grosser Färbintensität ein möglichst schwerlösliches Molybdat bildet. Am geeignetsten er- XVII, 1. Betlic: D;is Molybdiinverfahron. 17 wies sich Tolnidinblaii (bezogen von Dr. Grübler in Leipzig). Das Toluidinblanmolybdat ist in Wasser, Xylol, Aetlier und Chloroform ganz unlöslich. In Alkohol löst es sich nur spurenweise und erst beim Erwärmen. Es ist sehr dunkelviolett und übertritFt alle an- deren geprüften Molybdate in dieser Beziehung um ein Beträcht- liches. Gute Resultate lassen sich aber auch mit Methylenblau, Safranin und verschiedenen anderen basischen Farbstoffen erzielen. Basische Farbstoffe färben nun bekanntlich bei der directen Application auf Schnitte von Centralnervensystem (das in Alkohol, Sublimat , Pikrinsäure , Salpetersäure etc. fixirt ist) ausser Kern- bestandtheilen auch die sogenannte färbbare Substanz (Nisslsubstanz, Tigroid) des Ganglienzellleibes. Diese primäre Färbbarkeit mit basischen Farbstoffen bleibt nach dem Molybdäniren unbeschränkt fortbestehen. Da die färbbare Substanz sich aber dunkel tingirt, so macht sie die Zellen sehr undurchsichtig ; anderseits reisst sie den Farbstoff so stark an sich, dass innerhalb der Zellen bei submaximaler Färbung fast gar kein Farbstoff an die Fibrillen gelangt. Eine gute Färbung der Neurofibrillen kann daher, wenn die Färbung der Nisslsubstanz nicht auf andere Weise verhindert wird, nur dort ein- treten, wo keine Nisslsubstanz in der Nachbarschaft vorhanden ist, also in dünneren Protoplasmafortsätzen, in den Achsencylindern und im Neuropil. Um in den Zellen die Fibrillen zur Darstellung zu bringen, muss die primäre Färbbarkeit der Nisslsubstanz aufgehoben werden. Held (4a) ist der Ansicht, dass die Nisslschollen das Product der Fällung einer gleichmässig in den Ganglienzellen gelösten Substanz seien. (Die Beweiskraft seiner Deduction will ich an anderer Stelle dis- cutiren). Diese Fällung soll nur durch saure Fixirungsmittel hervorge- rufen werden, durch alkalische nicht, weil die Nisslsubstanz in Alkalien löslich sei. Ist die Nisslsubstanz aber schon durch saure Fixirungs- mittel, zu denen er auch Alkohol rechnet, gefällt, so soll sie nach- träglich durch Behandlung mit Alkalien gelöst werden können. Da- gegen sollen Säuren , noch in beträchtlichen Concentrationen , nicht im Stande sein , die Nisslschollen aufzulösen. Beides ist nicht un- bedingt richtig. Rückenmark , das mit 6procentiger Salpetersäure bei 20 bis 30^ C. fixirt ist, zeigt bei der Färbung mit basischen Farbstoffen keine oder nur sehr blasse Nisslschollen. Hierbei tritt nun allerdings eine schwache Nitrirung ein , welche Held für den Erfolg verantwortlich machen wird. Man kann aber auch durch Behandlung mit weniger als einprocentiger Salzsäure auf Schnitten denselben Erfolg erzielen. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 1. 2 ' lg B('tlie: Das Molybdiinverfahren. XVII, 1. Sehr viel leicliter gelingt in der Tliat die Unterdrückung- der Färbbarkeit durch Behandlung mit Alkalien, aber es handelt sich eben nur um eine Unter drüc kung- der Färbbarkeit für basische Farbstoffe, n i c h t um eine vollständige Auflösung der NisslschoUen. Es finden sich nach Alkalienbehandlung keine Lücken an Stelle der Nisslschollen des typischen Nisslpräparats, wie Held meint, sondern es sind noch dieselben Schollen vorhanden wie vorher, nur sind sie nicht mehr primär mit basischen Farbstotfen färbbar, und man muss andere Färbungsmethoden anwenden, um sie auch jetzt noch zur Dar- stellung zu bringen. Allerdings glaube auch ich , dass es sich bei der Behandlung mit Alkalien um einen Lösungsprocess handelt (und ich werde an anderen Stellen Beweise dafür vorbringen) , aber es wird nicht die ganze Substanz gelöst, sondern nur ein Bestandtheil aus ihr herausgenommen. Behandlung der fixirten Objecto mit Kalilauge in alkoholischer Lösung, wie sie von Held angewandt ist, habe ich versucht, aber wieder aufgegeben, weil die Fixirung schlecht ist. Ich erreiche die vollkommene Aufhebung der primären Färbbarkeit der Nisslsubstanz (und des Kerns) durch Behandlung des bereits fixirten Materials mit alkoholischer Ammoniaklösung , die sehr viel weniger zerstörend wirkt, mit darauf folgender Extraction durch alkoholische Salzsäure, welche auch noch Reste löst und das Gewebe zur Aufnahme von Molybdän empfänglicher macht. In alkoholischer Lösung kann man beide Substanzen auf bereits gehärtetes Material in ziemlicher Concentration einwirken lassen, ohne dem Gewebe Schaden zu thun. Nach der Anmioniakbehandlung trotzt die Nisslsubstanz bereits der directen Färbung mit basischen Farbstoffen vollkommen, die Kerne nehmen aber noch etwas Farbe an. Nach der Extraction mit Salz- säure sind auch die Kerne fast immer bei directer Färbung mit ba- sischen Farbstoffen ganz unfärbbar. (Nur die Kerne der Körner- schicht des Kleinhirns und der Körnerschichten der Retina setzen einen grossen Widerstand entgegen.) So beliandelte Präparate kann man st n n d e n 1 a n g m i t M e t h y 1 e n b 1 a u oder 'V o 1 u i d i n b 1 a u m i t und ohne E r w ä r m e n färben, es w i r d ausser dem capillär imbibirten Farbstoff nichts aufgenommen; sie bleiben ganz ungefärbt. Hierbei ist es ganz gleichgültig, ob der Schnitt vor dem Färben gesäuert oder alkalisch gemacht ist. Es lässt sich also künstlich eine vollkommene B a s o p h o b i e nicht nur einzelner Gewebsbestandtheile, sondern eines ganzen Ge- webes herstellen. Fisciikk (8) sieht als einen Ihniptbeweis für seine XVII, 1. l'.ctlic: Das Molybdänverfahren. 19 rein inoclimiiselie Theorie der Färbung das Ni c h t vo r k oiinn eu einer Basophobie an. Er sagt, es wäre eine Acidopbobie theoretisch niöglicli und praktisch bei den Nucleinsäuregrannlae vorhanden ; eine Basopliobie sei aber umnöglicli und käme in der That nirgends vor. liier ist sie! Zwar nicht an künstlichen Granulae gefunden, aber doch aucli so beweiskräftig. — Solche Präparate zeigen aber eine starke und a u s g e s p r o c h e n e Acidophilie ; sie sind mit der grössten Leichtigkeit mit Säurefuchsin, Eosin und Nigrosin zu färben und werden der Färbung mit basischen Farbstoifen durcli saure Metall- beizen leicht zugänglich. (Ich habe noch eine ganze Reihe von Einwänden gegen Fischer's mechanische Auffassung der Färbung bei der Hand; sie sollen aber nicht hier ihren Platz finden.) Nach FortschafFung der primären Färbbarkeiten steht der voll- kommenen Darstellung der Neurofibrillen durch das Molybdänverfahren nur noch zAveierlei hindernd im Wege ; das ist einmal die kräftige Aufnahme des Molybdäns durch den Kern und zweitens die Schwie- rigkeit, überschüssiges Molybdän fortzuschaffen. Der Kern, der eine primäre Färbbarkeit nach der Vorbehandlung nicht mehr zeigt, nimmt beim Molybdäniren viel Molybdänsäure oder Molybdänsalz auf und reisst nun bei seiner grossen Masse allen in die Nähe kommenden Farbstoff bei der secundären Färbung au sich. Ich habe kein Mittel gefunden dies zu verhindern, und so kommt es, dass man besonders in kleinen Zellen in der Nähe des Kerns nur selten die Fibrillen o-efärbt erhält. Sie sind von den Fortsätzen bis in die Nähe des Kerns gefärbt, werden dann aber blass. Ausnahmen sind leider selten. Manchmal bleiben einzelne Kerne aber blass, und dann sind die Fi- brillen auch meist gut in der Nähe des Kerns zu sehen. Bei grossen Zellen ist der Umstand oft sehr günstig, dass die Zellen häufig dicht am Kern durchschnitten sind, so dass sich nun die Fibrillen in seiner natürlichen Nachbarschaft gut färben können. Am meisten Schwierigkeiten bereitet es, ein Mittel zu finden, um das überschüssige Molyl)dän fortzuschaffen, d. h. um zu differen- ziren. (Differenzirung nach der secundären Färbung ist theoretisch und praktisch unzweckmässig. Zwar können auch hierbei die Structuren deutlicher hervortreten •, aber es ist dies dann nur ab- hängig von der grösseren Menge von Toluidinblaumolybdat , das an den deutlicher hervortretenden Stellen vorhanden war, da nach der secundären Färbung die Differenzirungsflüssigkeit überall das ganz gleichartige Farbsalz vorfindet und die Verschiedenheit der Gewebs- bestandtheile bei der Differenzirung nicht mehr in Betracht kommen 2* 20 Bethe: Das Molybclänverfahren. XVII, 1. kann.) — Bei Hirndo (Blutegel) bekommt man nach Sublimatfixirnng- und bei Carcinus nach Pikrinsäurefixirnng bisweilen durch blosses Abspülen mit Wasser vollkommen differenzirte Bilder, d. h. die Fi- brillen tief dunkel auf ganz farblosem Grund. Dies ist aber immer nur bei vereinzelten Blöcken der Fall. Bei anderen Blöcken , nach anderen Fixirungen und bei anderen Objecten (hauptsächlich bei Wirbelthieren) ist der Grund gefärbt und das Präparat mit Nieder- schlag bedeckt, auch wenn man reichlich mit Wasser gewaschen hat. Bei Hirudo und Carcinus habe ich mit Erfolg sehr verdünnte wässerige Ammoniaklösung vor dem Färben zum Ditferenziren an- gewandt. Der Erfolg k a n u sehr schön sein , ist aber ganz un- sicher. Von neben einander liegenden Schnitten zeigt häutig einer die prachtvollste Dilferenzirung, während andere Niederschlag zeigen und wieder andere gar keine Farbe angenommen haben. Bei Wirbelthieren lässt dies Verfahren ganz im Stich ; man bekommt diftus gefärbte Präparate. Für sie habe ich dann nach langen ver- geblichen Versuchen in der Behandlung mit warmem Wasser eine befriedigende Ditferenzirungsmethode gefunden. (Diese Methode lässt bei Wirbellosen, soweit meine nicht grossen Erfahrungen reichen, meist im Stich.) Ihre zweckmässige Amvendung erfordert sehr viel Erfahrung, da jeder Block, der überhaupt gut ditferenzirbar ist (und das ist nicht jeder!), andere Differenzirungszeiten und sogar manch- mal andere Wärmegrade erfordert, da jede Zellgattung verschieden behandelt, sein will und die verschiedenen darstellbaren Gebilde (Fibrillen und pericelluläre Netze) verschiedenen Bedingungen ihre Darstellbarkeit verdanken. Schliesslich — und das ist vielleicht das grösste Uebel — ändern sich die Eigenschaften jedes Blockes nach der Tiefe zu in unbekannter Progression, so dass nicht selten die richtige Differenzirung erst ausprobirt ist, wenn die Schnitte schon beginnen schlecht fixirt zu sein, denn bis zu einer grösseren Tiefe als 0"75 bis l'O mm ist selten ein Block brauchbar. Als bestes Fixirungsmittel für den vorliegenden Zweck habe ich für Wirbelthiere (Fische [Scyllium und Torpedo], Amphibien [Rana], Säugethiere [Homo, Canis, Bos, Lepus caniculus]) die Salpetersäure erkannt. Auch mit Alkohol, Pikrinsäure -|- pikrinsaurem Ammonium (4 Th. -)- 1 Th. der concentrirten wässerigen Lösung) und Sublimat kann man ganz gute Resultate erzielen. Schlecht (für vorliegenden Zweck) sind alle Fixirungsmittel, die Chromsäure oder Chromsalze enthalten. Seit längerer Zeit wende ich aber nur noch Salpetersäure an. Die Achsencylinder lässt sie wie alle Fixirungsmittel ausser XVII, 1. Bethc: Das Molybdänverfahren. 21 Osmiumsäiirc ziisammeiischnurren. Die Zellen erhält sie aber sehr jiTit und bereitet sie bereits für die Behandlung mit Ammoniak und Salzsäure vor. Wie schon erwähnt, ist in Blöcken, die mit stärkerer Salpetersäure (ß- bis 7'5procentig) bei etwas über Stubentemperatur fixirt sind , die Nisslsubstanz nur noch schwach primär färbbar. Erhöhte Temperaturen bei der Fixirung- erwiesen sich nun als un- günstig, da so behandelte Blöcke sehr zu krystallinischen Niederschlägen neigen. Aber auch in der Kälte (12 bis 15" C.) wirkt Salpeter- säure von ,5 bis 7 '5 Procent bereits auf die Nisslsubstanz so ein, dass sie sich primär nicht mehr stark färbt. AVerden solche Blöcke ohne Ammoniak- und Salzsäure -Nachbehandlung direct molybdänirt, so bekommt man häufig ganz schöne Hbrillenpräparate , da die schwache primäre Färbbarkeit kaum zum Ausdruck kommt. In diesen Präparaten sind aber die Fibrillen nie so dunkel, scharf und glatt und nie so weit zu verfolgen wie in den nachbehandelten. Es scheint die Nachbehandlung die Färbungsenergie in irgend einer Weise zu erhöhen. (Ich sage dies ausdrücklich , um den Vereinfachern zu zeigen, warum ich complicirter verfahre. Ich habe nämlich „merk- würdigerweise" auch bei der Fixirung der Methylenblaufärbung an- fangs in einfachster Weise nur mit Ammoniummolybdat fixirt, die geistreiche Vereinfachung späterer Autoren also selbst primär ge- funden. Da das complicirtere Verfahren sich aber als sicherer er- wies, habe ich es beschrieben, ohne behauptet zu haben, dass das Einfachere nicht auch brauchbar ist. Ebenso verhält es sich mit dem Abkühlen der Fixirungsflüssigkeit , das ich bei dieser Methode vorgeschrieben habe. Dass bei dem Verfahren Dogiel's, mit Me- thylenblau zu färben , sogar Erwärmung nichts schadet , zeigt mir von neuem, dass die Reaction des Farbstofts mit dem Gewebe hier- i)ei nicht dieselbe ist wie bei dem Verfahren Ehrlich's, denn bei diesem verschwindet die Färbung — wenigstens in den peripheren Organen vom Frosch und Kaninchen und bei Wirbellosen — beim Erwärmen sehr schnell.) Nach Fischer (8) ist die Salpetersäure ein minderwerthiges Fixirungsmittel , weil sie nicht alles gelöste Eiw^eiss ausfällt. Ich halte das in vielen Fällen nur für einen Vortheil. Wir wollen ja gar nicht in jedem Präparat alles zur Darstellung bringen, was in den betreffenden Geweben vorhanden ist, sondern oft bestimmte Bestandtheile möglichst isolirt darstellen, und dazu ist die chemische Methode der Reindarstellung, durch Fortschaffen der Vermi- reinigungen , entschieden eine der vornehmsten imd sichersten Me- 22 Bethe: Das Molybdänverfahren. XVII, 1. tlioden. Salpetersäure fällt nicht nur nicht alles, sondern löst schon alles mögliche aus dem Gewebe heraus, und das ist von Vortheil, so lange d i e Elemente unalterirt bleiben , die zur Darstellung ge- langen sollen. Mir schwebt als schönster Traum für das Nerven- system eine Methode vor, bei der Alles: Kerne, Glia, Markschei- den etc. gelöst würde , und nur die Neurotiljrillen übrig blieben. Dann brauchte man nur zu versilbern und würde Präparate von un- geahnter Vollständigkeit und Uebersichtlichkeit bekommen. Natürlich ist das ein Traum, aber immerhin ist es für viele Zwecke von Vor- theil, so viel zu lösen als möglich, und darum ist die Salpetersäure für die Fibrillendarstellung (und manche andere Zwecke) geeignet und hervorragend geeignet, weil sie manches löst und lockert und zugleich die Fibrillen intact lässt. Genauere Beschreibung der Methode zur Darstellung der Neurofibrillen und der Golginetze im Centralnervensystem der Wirbelthiere, Yorbehaiidlung- T. Ä. Fixir uny. Das frische Material wird in Scheiben von 4 bis 10 mm Dicke geschnitten und dann auf Fliesspapier in Salpetersäure (HNO.^) von 3 bis 7*5 Procent gebracht, worin es unter mehrmaligem Wenden der Blöcke 24 Stunden verbleibt. (Je dünner die Scheiben sind, desto besser ist der P>folg. Praktisch lassen sich aber von den meisten Objecten keine dünneren Scheiben schneiden, ohne dass die Orientirung verloren geht.) Die Procentangaben beziehen sich n i c h t auf den Gehalt an Salpetersäuredampf, sondern auf die gewöhnliche reine in den Handel kommende Salpetersäure (Acidum nitricum pur. conc), welche ein spec. Gew. von 1"40 hat, somit 65 Procent Sal- petersäuredampf enthält. Zur Erlangung einer ,'}procentigen HNO^ sind also 3 cc dieser Salpetersäure auf 100 cc mit destillirtem Wasser aufzufüllen etc. Wer nur Salpetersäure von anderem spec. Gew. hat, kann sich leicht die nothwendigen Verdünnungen seiner Stanimsalpetersäure an der Hand der BEHRENs'schen Tabellen um- rechnen. Die Temperatur der Salpetersäure soll 20^ C. nicht über- steigen. Besonders die stärkeren Goncentrationen wirken schädigend, wenn die Temperatur zu hoch ist. Eine verdüuntere Salpetersäure XVII, 1. Betlio: Dus Molybdänverfahren. 23 bringt bei höherer Temperatur denselben Fixinmgserfolg hervor wie eine stiirlvere bei niederer Temperatur, so dass man sich also bei warmer Witterung dünnerer Salpetersäure zu bedienen hat als bei kühler. Dies gilt ganz im allgemeinen. (Es beruht der Erfolg eben nicht nur auf der Säurewirkung der Salpetersäure, sondern auch auf einer schwachen Nitrirung. Die Blöcke sollen nach der Fixiruug eine schwach gelbe Färbung liaben , und weder ganz weiss noch stark gelb sein. P^ine zu starke Nitrirung macht sich später beim Aufgiessen des Ammoniakalkohols sofort geltend ; sie werden nämlich braun. Solche Blöcke haben meist keinen Werth mehr. Sie diiferen- ziren sich schlecht. Es soll im Ammoniak nur eine Vertiefung der Gelbfärbung, aber keine Bräunung eintreten.) Im speciellen ist noch Folgendes zu sagen : Stärkere Nitrirung (also Anwendung concentrirterer Salpetersäure, z. B. einer 7"5pro- centigen bei 12 bis 15*^ C. oder einer verdünnteren bei 18 bis 20^ C.) disponirt bei der späteren Färbung mehr zur Hervorrufung der Golgi- netze, schw^ächere Nitrirung (HNOg 3- bis öprocentig bei 10 bis 1.5^0.) mehr zum Hervortreten des Fibrillenbildes. Besonders die Zellen der Kleinhirnrinde und der Kleinhirnkerne, des Ammonshorns und des Olivenkerns gestatten keine starke Nitrirung, wenn die Fibrillen gut zur Darstellung kommen sollen. Ich wandte bei diesen Objecten mit Vortheil eine Sprocentige HNO., bei 12 bis 15^ C. an. Aus- nahmen kommen aber auch hier vor , wie überhaupt diese ganzen Vorschriften nur auf die häufigste Art der Erreichung des Zieles nach meiner Statistik aufgebaut sind. B. Härten, Aus der Salpetersäure kommen die Blöcke direct in 96procen- tigen Alkohol und verbleiben hier 12 bis 24 Stunden. Mehrtägiges Verw^eilen im Alkohol schadet nichts. C. Ausziehen init A}ninoniak- Alkohol. Aus dem Alkohol kommen die Blöcke für 12 bis 24 Stunden in eine Mischung von Ammoniak (spec. Gew. 0-95 bis 0-96) . . 1 Th. Wasser o „ Alkohol, 96procentig 8 „ 24 Bethe: Das Molybdänverfahren. XVII, 1, (Ohne Gegenwart von Wasser löst sich die färbbare Substanz der Ganglienzellen nur schlecht. Der Alkohol anderseits verhindert Quel- hmg. Mit Vortheil hält man sich eine ^/^ concentrirte Ammoniak- lösung vorräthig und mischt von dieser vor dem Gebrauch 1 Th. mit 2 Th, Alkohol. In dieser Flüssigkeit werden die Blöcke dunkler gelb.) Die Temperatur soll 20^ C. nicht übersteigen. Nach der Ammoniakbehandlung kommen die Blöcke mit Vortheil wieder auf einige Stunden in Alkohol (6 bis 12 Stunden) darauf: D. Ausziehen ')nit Salzsäure- Alkohol. Salzsäure, concentrirt (spec. Gew. 1*18 = 37 Procent) . 1 Th. Wasser , 3 „ Alkohol, 96procentig 8—12 „ (Die Verdünnung mit Wasser und Alkohol erfolgt aus den- selben Gründen wie beim Ammoniak. Auch hier ist es praktisch, die Salzsäure in vierfacher Verdünnung vorräthig zu halten. In der Salzsäure werden die Blöcke wieder heller gelb bis annähernd weiss, wenn sie nur schwach nitrirt sind.) Die Temperatur soll 20 '^ C. nicht übersteigen. Hieraufkommen die Blöcke wieder für 10 bis 24 Stunden in Alkohol, weil sie beim directen Uebertragen in Wasser durch die wässerige Salzsäure erweicht werden. E. Uebertragen in Wasser. Für 2 bis 6 Stunden, nicht länger ! F. Molybdäniren. Die Blöcke werden in eine 4procentige Lösung von Ammonium- molybdat (Ammonium molybdaenicum) übertragen und bleiben hier 24 Stunden. Das weisse Präparat in grossen stark krystallinischen Schollen ist besser als das gelbe in kleinen Krystallen.) Niedrigere Temperaturen 10 bis 15^ C. disponiren mehr zur Färbung der Fi- brillen, liöhere 18 bis '50*^ C. mehr zur Färl)ung der Golginetze. Die Temperatur sollte aber 80 '^ nie wesentlich übersteigen, da sonst ganz andere Bilder auftreten. XVII, 1. Bethe: Das Molybdänverfuhvon. 25 G. Einbetten. Die Blöcke werden kurz mit destillirtem Wasser abgespült und dann in 96procentigen Alkohol übertragen. Hier bleiben sie nicht langer als notlnvendig (10 bis lU Stunden), ebenso in absolutem Alkohol (10 bis 24 Stunden). Der Alkohol wird durch Xylol oder Toluol (wenn man will auch durch C-hloroform) verdrängt und in Paraffin (nicht in Celloidin! !) eingebettet. Yorbehaiiclluiig II. Eine Reihe von Versuchen ergab , dass bei der Differenzirung zuerst das Fibrillenbild auftritt, dass beim weiteren Difterenziren das Golginetz hinzutritt unter gleichzeitigem Abnehmen der Deutlich- keit der Fibrillen, bis schliesslich bei noch weiter getriebener Diffe- renzirung die Fibrillen ganz verschwinden und nur noch das Netz gefärbt wird. (Die Golginetze sind im typischen Fibrillenbild über- haupt noch n i c h t gefärbt und nicht etwa nur durch die P^'ibrillen verdeckt. Sie verdanken eben ihre Färbbarkeit einer anderen Reac- tion als die Fibrillen.) Es zeigte sich ferner, dass, je reicher eine Zelle an Fibrillen ist , sie desto länger bei der Ditferenzirung das Fibrillenbild hervortreten lässt, so dass man also bei fibrillenreichen Zellen und Protoplasmafortsätzen sehr lange ditferenziren muss , um die Golginetze darzustellen. Dies hat seine Grenze darin, dass bei zu langer Ditferenzirung (länger als 10 bis 12 Minuten) erstens das Präparat opak wird und zweitens unter Ueberspringung des Golgi- netzstadiums Inversion des Bildes, d. h. normale Kernfärbung und Färbung der NisslschoUen eintritt. (Beides nur unter dem Einfluss von Molybdän.) Es hat sich nun weiter gezeigt, dass das Molybdän sehr viel weniger festgehalten wird, wenn die Blöcke direct nach der Ammo- niakbehandlung molybdänirt werden , wenn also das Ausziehen mit Salzsäure unterbleibt und das molybdänsaure Ammonium mit dem alkalisch reagirenden Gewebe in Berührung kommt, statt mit dem sauer reagirenden. (Einen ähnlichen Effect kann man auch er- reichen, wenn man die Acidität des Ammoniummolybdats mit Ammo- niak bis zur ganz schwachsauren Reaction abstumpft [bei alkalischer Reaction derselben wird gar kein Molybdän aufgenommen] und es 20) Hctho: Das Mulybdänverfahren. XVll, 1. auf die mit Salzsäure extraliirten Blöcke einwirken lässt. Der andere Weg ist aber einfacher und sicherer.) Die Blöcke kommen also nach dem Ausziehen mit Ammoniak für 6 bis 12 Stunden in Alkohol, dann für 2 bis 6 Stunden in Wasser und darauf für 24 Stunden in die 4procentige wässerige Lösung von Ammoniummolybdat. Alles übrige wie bei der Vorbehandlung I. Die Vorbehandlung II hat nur für Zellen mit sehr vielen Fi- brillen einen Zweck. Für das Grosshirn und Kleinhirn ist sie ganz überflüssig. Dagegen ist sie zweckmässig, um gute Bilder von den Golginetzen der Vorderhornzellen des Rückenmarks und den Zellen des motorischen Feldes der Medulla zu erhalten. Ferner dient sie zur Darstellung der Fibrillen in den Spinal- ganglienzellen, da diese Zellen das Molybdän sehr stark festhalten und bei der Vorbehandlung I fast nie gute Resultate geben. H. Schneiden. Die Blöcke werden aus Paraffin geschnitten, die Schnitte mit MAYEii'schem Eiweissglycerin aufgeklebt. Die Benutzung von AVasser beim Aufkleben ist unzweckmässig, weil das Wasser trotz der Pa- raffineiubettung (wie bei Objecten, die mit Säurefuchsin durchgefärbt sind, den Farbstoff; das Molybdän zum Theil auszieht, so dass die Resultate unsicher werden. Die zweckmässigste Schnittdicke beträgt 10 jii. Dickere Schnitte färben sich meist niclit ganz durch, ditfe- renziren sich schlecht und werden zu dunkel. Dünnere Schnitte differenziren sich sehr viel leichter, und das ist ein Nachtheil. Unter 5 fx kann man ohne besondere, später zu erwähnende Maassnalimen beim Ditt'ereuziren nicht gut gehen, da es sich dann zur Erreichung des Differeuzirungsoptimum um Zeitdifferenzen von wenigen Secunden handelt , welche kaum einzuhalten sind , so dass man in der Regel entweder ganz farblose oder undifferenzirte Präparate mit Nieder- schlägen erhält. Ausserdem muss meist die Ditferenzirungszeit von 2 Minuten unterschritten werden, was nur auf Kosten der Deutlich- keit geschehen kann. Einen grossen Werth haben hier nach meiner Meinung sehr dünne Schnitte überhaupt nicht. Da die Fixirung nach der Tiefe zu schnell an Güte abnimmt, empfiehlt es sich, auch die ersten, noch unvollkommenen Schnitte zu benutzen. Wie schon gesagt, ändert sich nach der Tiefe des Blockes zu im allgemeinen die Differeiizii-barkeit , und es müssen für jeden X\m. 1. IJethc: Das MolybdänvcrtHliiTn. 27 Block die Ditferenzirungszeiten nusprobirt werden. Es ist daher zweckmässig', gleich eine ganze Menge Schnitte zu machen, diese lose der Reihe nach auf eine Glasplatte oder auf Glanzpapier zu legen und nun zunächst Stichproben aufzukleben und weiter zu behandeln. Ich klebe dazu gewölinlich zwei oder mehr Schnitte auf je einen Objectträger uiul zwar in der Reihe weit aus einander liegende. In der Regel nehme ich drei Objectträger : Auf den ersten kommt Schnitt 1 und etwa Schnitt 21, auf den zweiten Schnitt 2 und 22, auf den dritten Schnitt 3 und 23. Die drei Objectträger werden, wie unten angegeben, verschieden weiterbehandelt. Aus dem Fär- bungsresultat ergiebt sich, wie sich die Differenziruug nach der Tiefe zu verändert. Die aufgeklebten Schnitte werden in üblicher Weise durch Xylol und Alkohol in destillirtes Wasser gebracht , wo sie nicht länger verbleiben sollen, als zur Entfernung des Alkohols nöthig ist, d. h. nicht länger als eine halbe bis eine Minute. (Uebrigens schadet auch ein Verweilen im Wasser von 20 Minuten und mehr bei gewöhnlicher Zimmertemperatur nichts ; man soll es sich aber nicht zur Gewohnheit machen, da bei höherer Temperatur das Wasser in unberechenbarer Weise ditferenzirend wirkt.) J. D ifferenziru it y und Färbung. Die Ditferenzirung bildet das schwierigste Kapitel bei der vor- liegenden Methode, weil sie für jeden Block und für jede Zellart ausprobirt werden muss. Der Objectträger wird noch einmal mittels einer Spritztiasche mit destillirtem Wasser abgespült, um letzte Reste von Alkohol aus den Schnitten zu entfernen , dann auf der Unterseite und an den Rändern mit einem reinen (vor allem mit molybdänsaurem Ammonium nicht beschmutzten) Tuch trocken gewischt und auf der Schnittseite mit einer Schicht von destillirtem Wasser überdeckt, wobei man ihn horizontal hält. Das Aufbringen des Wassers bewerkstellige ich mit einer Spritzflasche. Das Wasser soll gleichmässig vertheilt sein, die Schichtdicke 1*5 bis 2 mm und die heraufgebrachte Wassermenge 1 bis 1'5 cc betragen. Natürlich kann man der Genauigkeit halber das Wasser aus einer tarirten Pipette auffliessen lassen ; bei einiger Uebung tritft man aber leicht mit der SpritzHasche das richtige Maass. Mit der Wasserschicht wird der Objectträger in einen 28 Bethe: Das Molybdänverfahren. XVII, 1. Wärmesclirank geschoben, dessen Temperatur 55 bis 60'' C. betragen soll. Hier bleibt der Objeetträger 2 bis 10 (höchstens 12) Minuten. Dann wird die Wasserschicht abgegossen, die Schnittseite in stets gleicher Weise 3- bis 4mal mit destillirtem Wasser kurz abgespült; die Ränder werden wieder trocken gewischt und nun — in derselben Weise wie vorher das Wasser — eine Lösung von 1 Th. Toluidiu- blau in 3000 Th. destillirten Wasser heraufgebracht. Der Objeet- träger wird wieder in den Ofen geschoben und 10 Minuten lang darin gelassen. Hierauf Avird mit der Spritzflasche der Farbstoff abgespült, imd der Objeetträger in 96procentigen Alkohol gebracht. Es löst sich aus den Schnitten der nicht an Molybdän gebundene Farbstoff mit blaugrüner Farbe. Wenn kein Farbstoff sich mehr löst (nach "'/^ bis 2 Minuten), wird in absoluten Alkohol übertragen, dann in Xylol und in Canadabalsam eingeschlossen. Eine Hauptbedingung für die Haltbarkeit der Präparate ist vollständige Alkohol- und Wasserfreiheit. Trübt sicli das Xylol beim Uebertrageu aus dem Alkohol (Wasserausfall), so verderben die Präparate in wenigen Tagen. Man führe deshalb die Präpa- rate zweimal durch wasserfreies Xylol und benutze wasserfreien Canadabalsam. Der Canadabalsam soll in Xylol gelöst sein. Mit Vortheil wird vielleicht der neutrale Canadabalsam von Grübler an- gewandt. — Ungenügend und schlecht differenzirte Präparate erkennt man sofort makroskopisch daran , dass die Farbe der Schnitte ziemlich blau ist. Im allgemeinen gut differenzirte Präparate sind immer violett bis röthlichviolett. Fibrillenreiche Zellen und dichte Objecte müssen länger differenzirt werden als fibrillenarme und solche mit weit aus einander liegenden Zellen. Die beste Differenzirungszeit für Grosshirn und Kleinhirn liegt in der Regel zwischen 2 und 6 Minuten (bei 58** C), für Medulla zwischen 3 und 7 Minuten, für Rückenmark zwischen 5 und 10 Minuten. Um Zeit beim Ausprobiren zu er- sparen und gleich ein kleines statistisches Material an der Hand zu haben, ist es zweckmässig, drei Probeobjectträger gleichzeitig zu be- handeln und zwar die einzelnen zu dilferenziren bei Grosshirn und Kleinhirn: 2, 3^/., und 5 Minuten, bei Medulla : 3, 5 und 7 Minuten, bei Rückenmark : 4 , d und 8 Minuten. Vor dem Färben weiterer Schnitte werden die drei Präparate bei Oelimmersion durchmustert und nun die passende Differenzirung ausgesucht, resp. eine andere gewählt, dabei aber auf die verschiedene Tiefe Rücksiclit genommen, der die Schnitte entstammen. XVII. 1. Botho: Das Molybdänvoifahron. 29 Ist auch bei dem am längsten ditterenzirten Pi'äparat noch Niederschlag vorhanden, so muss länger ditterenzirt werden. Sind bei 2 Minuten Ditferenzirung die Schnitte schon ziemlich blass, so ist durch Verkürzung der Differenzirungszeit fast nie etwas zu erreichen. Die Schnitte werden dann allerdings dunkler, zeigen aber fast nie gute Contraste. Hier kann auf zwei Weisen abge- holfen Averden : 1) Man wendet nach dem Differenziren stärkere Lösungen von Toluidinblau an. (1 : 2000, 1 : ir)00 oder 1 : lOOO.j Die Präpa- rate dirt'erenziren sich nämlich während der Färbung noch weiter, da nicht gleich die ganze Farbstoffmenge in die Schnitte diffundirt, welche zur Bindung der noch vorhandenen Molybdänsäure nothwendig ist. Bei stärkerer Farbstofflösung wird daher die vollständige Sät- tigung früher erreicht. 2) Es wird statt mit Wasser mit dünnen Lösungen von Arnmo- niumraolybdat differenzirt, wie später genauer auszuführen ist. — Nach den von luir angestellten Versuchen scheint ein bestimmter Coefficient zwischen der Menge von Molybdän, welche im Gewebe bleibt, uud der , welche ins Wasser geht , bei der gewöhnlichen Ditferenzirung zu bestehen (entsprechend der SpiRo'schen Lösungs- therorie der Färbung), welche natürlich abhängig ist von der Menge des Gewebes, der Menge des Molybdäns und der Menge des Wassers. Da die Menge des beim Molybdäniren aufgenommenen Molybdäns ver- schieden und nicht bekannt ist, da ausserdem das Volumen des Ge- webes , das zur Ditferenzirung kommt und von dem der absolute Molybdängehalt abhängt, nur durch genaue Flächenmessung der Schnitte bestimmt werden kann, also praktisch auch unbekannt ist, so sind die differenzirende Wassermeuge, die Differenzirungszeit und die Temperatur die einzigen constanten Grössen bei Gegenwart von zwei Unbekannten. (Es müssen also immer mindestens zwei Präpa- rate mit verschiedenen Zeiten gemacht werden, um einigermaassen einen Anhalt zu haben, und die so gefundenen Resultate gelten nur dann, wenn man bei der Nutzanwendung gleiche Gewebsvolumina anwendet wie bei den Vorversuchen.) Es soll nun ein solches Ver- hältniss zwischen Gewebsmasse, Molybdän und Wassermasse beim Differenziren bestehen, dass bei der Differenzirungszeit, welche dem Optimum entspricht, noch kein Gleichgewicht erreicht ist, d. h, das Wasser bei längerer Diflferenzirung im Stande wäre , noch mehr Molybdän aus dem Gewebe herauszulösen. (Der Lösungscoefficient ist , wie schon aus dem Gesagten hervorgeht , in hohem Maasse ab- v{Q B utile: Das Molybdänvorfahren. XVIT, 1. hängig von der Temperatur. Bei Zimmertemperatur findet fast gar keine Ditierenzirung statt. Temperaturen zwischen 30 und 50° C. geben sclion Ditt'erenzirungen. die Bihler stehen aber denen an Schön- heit weit nach, welclie mit liöheren Temperaturen erzeugt sind.) Das Ideal ist es natürlich, ein solches Yerhältniss der Factoren zu linden, dass das Differenzirungsoptimum mit einem Gleichgewichts- zustand zusammenfällt, da dann ein genaues Einhalten der Differen- zirungszeit nicht mehr nöthig ist, wenn nur die Gleichgewichtslage schon erreicht ist. In der Praxis ündet man diesen Moment nur selten, und er kann nie genau bestimmt werden, weil sich durch Ein- dunsten des Ditferenzirungswassers das Verhältniss schon wieder ändert. (Ueberhaupt bekommt man auch vom selben Block fast nie zwei Präparate, die ganz gleich ditterenzirt sind.) Eine Kenntniss dieser Verhältnisse ist aber nothwendig, weil man nicht selten bei weit aus einander liegenden Dirt'erenzirungszeiten z. B. 3 Minuten und 7 Minuten bei der längeren Dilferenzirungszeit keine stärkere Ditferenzirung erhält. Hier ist also für das Verhältniss von Gewebe zu Wasser zu viel Molybdän vorhanden. Daher muss entweder we- niger Gewebe (d. h. weniger Schnitte) oder mehr Wasser genommen werden. Man arbeitet also, wie später zu besprechen ist, mit grossen Wassermengen , oder man giesst die in gewöhnlicher Weise auf- geschichtete VVassermenge nach einigen Minuten ab und ersetzt sie durch eine neue. Die Beschleunigung der Ditferenzirung auf die letztere Art ist nicht sehr bedeutend. Es ist immerhin noch eine milde Ditferenzirung. Werden die Schnitte bei einer Dilferenzirungs- zeit von 2 Minuten zu hell, so ist das Umgekehrte der Fall. Es ist zu viel Wasser da im Verhältniss zur Gewebsmenge oder, was das- selbe ist, zu wenig Molybdän. Das Gefälle ist zu gross. Die Wasser- menge kann man nicht gut verringern, ohne Gefahr des Eindunstens. Man könnte nun die Schnitte dicker machen oder mehr Schnitte nehmen und so das relative Verhältniss verändern ; aber dies ist dann nicht möglich , wenn man gerade dünne Schnitte untersuchen will oder bereits 10 /t dick geschnitten hat, und die Fläche des Objectträgers schon maximal mit Schnitten bedeckt ist. Wenn solche Schnitte statt mit Wasser mit einer Lösung von molybdänsaurem Am- monium behandelt werden, die weniger Molj^bdän enthält als dem Gleichgewichtszustand im gegebenen Fall entspricht, so wirkt sie milde ditferenzirend ; das Lösungsgefälle ist gering. Daher geht die Ditferen- zirung langsam, und das Optimum liegt nicht auf der Schneide eines Zeitraumes von wenigen Secunden. Ich benutze dazu Lösungen von XVir, 1. Betlio: Das Molylxbinvcrf.ilirrn. 3I 1 Tli. niolyb(l:iiis;uirein Ammoniinu in 2r)(M) bis 5U0ü Tli. Wasser. (Tebrigens ist der Process der I )itfereiizining nach allem nicht so einfach, dass das warme Wasser nur überschüssiges Molybdän l()st. Es scheint vielmehr, dass auch im Gewebe eine vollständige Um- lagerung des ^lolybdäns unter dem Einfluss des warmen Wassers vor sich geht. Man kann z. r>. bei sehr systematischen üitferen- zirungsreihen mit kleinen Zeitintervallen feststellen, dass nacli einiger Zeit ein erstes Minimum des Molybdängehaltes eintritt, dem dann wieder eine »Steigung folgt. Später sinkt er dann Avieder ab und kann, wenn die Wassermenge richtig gewählt war, bis beinahe auf absinken.) Natürlich ist es auch möglich wie sonst vorbehandelte , aber nicht molybdänirte Blöcke erst auf dem Schnitt zu molybdäniren. Es genügt hier 5 Minuten lange Einwirkung einer einprocentigen Lösung Aon Ammoniummolybdat bei Zimmertemperatur. Die Ditferen- zirung geschieht dann wie sonst. Es hat diese Methode aber be- deutende Nachtheile insofern, als in den mit Ammoniak und Salz- säure extrahirten Blöcken die Zellen beim Einbetten ziemlich schrum- pfen, vor allem die Fibrillen verkleben, ein Process, der durch das eingelagerte Molybdän verhindert wird, wenn im Block molybdänirt worden ist, so dass selbst da, wo bei der Ditt'erenzirung noch er- hebliche Mengen Molybdän zugeführt werden müssen , die Molybdä- nirung im Block durchaus nicht übertlüssig ist. Es wurde schon hervorgehoben , dass sich die Fibrillen früher ditferenziren als die Golginetze, und dass das Fibriilenbild um so frülier durch das Netzbild ersetzt wird, je ärmer die Zellen an Fi- brillen sind. Man kann daher oft im selben Präparat an grossen fibrillenreichen Zellen nur die Fibrillen sehen, während an den kleinen nur die Netze gefärbt sind. (Im Leib einer Zelle und in den dicken Protoplasmafortsätzen können die Fibrillen gefärbt sein, in den mitteldicken Fortsätzen die Fibrillen und das umhüllende Golginetz und an den dünnen Zweigen nur das Golginetz'.) Oft ist nun durch längeres Ditferenziren in der gewöhnlichen Weise an grossen Zellen nicht das Golginetz darstellbar (Vorderhornzellen). Hier kann man zu seiner Darstellung auf zwei Arten verfahren. 1) Entweder mau ditferenzirt mit grossem Lösungsgefälle. Zu diesem Zweck erwärmt man in einer Glastube 20 bis 40 cc destillirtes Wasser auf 45 bis 59^ 0. und taucht den Objectträger für etwa den vierten oder dritten Theil der Zeit ein, welche bei gewöhnlicher Differenzirung nöthig ist, um die Fibrillen optimal zur Darstelhing 32 Bethe: Das Molybdänverfahren. XVII, 1. zu bringen. (Also statt 8 Minuten etwa 2 bis 3 Minuten.) Die Ditferenzirung ist oft stellenweise recht gut, aber selir ungleich- massig. 2) Man behandelt den Block nach dem Verfahren der Vor- behandlung II vor, d. h. man lässt die Behandlung mit Salzsäure fort. Bei Schnitten solcher Blöcke folgen die einzelnen Phasen der Ditferenzirung sehr viel schneller auf einander, so dass man auch mit dem gewöhnlichen Differenzirungsverfahren in 2 bis 5 Minuten an den tibrillenreichsten Zellen die Golginetze darstellen kann. Schöner und klarer sind die Netze im allgemeinen dort, wo sie sich nach Vorbehandlung II darstellen lassen. Die so hergestellten Prä- parate sind meist ziemlich dunkel , etwas schmutzig in der Farbe und zeigen auch gliöse P^lemente. Behandelt man die ganzen Blöcke oder Schnitte von gewöhnlich molybdänirten Blöcken mit warmer (40 bis 60*^ C.) Lösung von molybdäusaurem Ammonium (1- bis 4procentig) länger als 20 Mi- nuten, so bekommt man beim P^ärben niemals ein gutes Fibrillenbild (auch nach dem DifFereuziren nicht). Die Präparate sind nicht vio- lett sondern blau und zeigen unter dem Mikroskop 1) Achsencylinder- färbung, 2) Gliafärbung, 3) normale Kernfärbung (Kernkörperchen gefärbt) und 4) Färbung der Nisslschollen (aber nie der feineren Nisslstructureu der kleinen Zellen). Man kann also so willkürlich das Nisslbild der Ganglienzellen wieder hervorrufen, trotzdem die primäre Färbbarkeit vernichtet ist. Es kann dies — besonders bei pathologischem Material — von Vortheil sein. An solchen Präpa- raten zeigen sich auch um die Ganglienzellen Structuren , wie sie Auerbach (5) abgebildet hat. Bei normaler Ditferenzirung erhält man diese Inversion des Bil- des nicht selten dann bei längerer Differenzirungszeit (8 bis 12 Mi- nuten), wenn die Wassermenge zu gering ist, um die Ditferenzirung unter oder weit unter das Optimum zu bringen. Bisweilen gelingt es dabei, Difierenzirungen zu erhalten, bei denen gleichzeitig die Fi- brillen und NisslschoUen zu sehen sind. Leider haben die Achsencyliuder ungefähr gleiche Differen- zirungsbedingungen wie die Fibrillen, so dass es schwer ist, gleich- zeitig die Golginetze und die Achsencylinder zur Darstellung zu bringen. Besonders die dünnen Achsencylinderzweige , auf die es gerade ankommt, entmolybdäniren sich leicht. Dies wäre in der Hauptsache das, was ich über die hier walten- den Vorgänge herausgebracht habe. Man muss auf sehr Vieles achten XVII, 1. Bethe: Diis Molybdänverfahren. ' 33 und sich das Probiren nicht verdriessen lassen. Zweckmässig wird es sein, bei der Erlernung der Methode mit einem einfachen Object anzufangen. Ich empfehle für die Fibrillen die Vorderhornzellen vom Kaninchen , Menschen oder Hund , für die Golginetze den Nucleus dentatus oder die Olive des Hundes. Man wähle für diese Objecte die Vorbehandlung I bei einer Temperatur von 15 bis 18*^ C. und differenzire beim Eückenmark .5 bis 8 Minuten, beim Nucleus den- tatus und der Olive 2 bis 6 Minuten. Da wird man leicht Resultate erhalten, soll aber nicht vergessen, dass manche Blöcke aus un- bekannten Ursachen nie eine gute Ditferenzirung abgeben. Vorbehandlung und Differenzirung für wirbellose Thiere. Ich habe hier nicht so grosse Erfahrungen wie bei Wirbel- thieren, will aber das, was ich an Kenntnissen über sie besitze, nicht vorenthalten. Bei Hirudo habe ich in der Regel mit concen- trirter Sublimatlösung fixirt (12 Stunden), mit Jodalkohol 24 Stun- den ausgezogen und dann eingebettet. Die Schnitte kommen für 10 Minuten in eine einprocentige Lösung von Ammoniummolybdat (25 bis SO*' C), werden mit destillirtem Wasser 10 Minuten ge- waschen und dann 5 Minuten bei 58^ C. mit Toluidinblau 1 : 3000 gefärbt. So bekommt man oft gute Resultate wenigstens im Neuropil, den Längscommissuren und peripheren Nerven. Bei anderen Blöcken muss man differenziren in der weiter unten angegebenen Weise. Zur Darstellung der Fibrillen in den Zellen muss mit Ammoniak und Salzsäure in derselben Weise ausgezogen werden, wie es oben für die Wirbelthiere angegeben ist. Hier bekommt man aber bessere Resultate, wenn man statt mit Sublimat, mit Salpetersäure (3pro- centig) oder Alkohol hxirt. Bei Salpetersäure werden die Fibrillen bei der Färbung besonders dunkel und scharf. Ist mit Ammoniak und Salzsäure ausgezogen, so empfiehlt es sich, im Block zu molyb- däniren (genau wie bei Wirbelthieren). Die Schnitte ausgezogener Blöcke müssen, so weit meine Er- fahrung reicht, immer differenzirt werden. Man färbt erst einige Probeschnitte direct, um zu sehen wie stark die Niederschläge sind. Darauf werden mit anderen Difterenzirungsversuche gemacht. Zum Differenziren benutze ich 1) wässerige Lösungen von Ammoniak, 2) alkoholische Lösungen von Soda (Natriumcarbonat). Zeitachr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 1. 3 34 Betlie: Das Mülybdänverfahrcn. XVII, 1. 1) Es wird 1 Tli. des g-ewölinlichen Ammoniaks (spec. Gew. 0'95 l»is 0-9 G) mit 500 bis 2000 Tb. destillirten Wassers verdümit. (Eine einprocentige Ammoniaklösnng- kann man vorrätbig balten. Scbwäcbere Lösungen geben zu babl ibr Ammoniak ab, um auf- geboben werden zu können). 2) Es Avird 1 Tb. einer einprocentigen Lösung von Soda (Xatriumcarbonat) mit 10 bis 30 Tb. öOprocentigen Alkobols ver- dünnt. In erstere Lösung kommen die Objecträger aus Wasser, in letztere aus Alkobol. Sie verbleiben darin 2 bis 30 Seeunden. Sie werden dann scbnell mit Wasser resp. Alkobol abgespült und 5 Mi- nuten lang mit Toluidinblau (1 : 3000) bei 58^ C. gefärbt. Die Scbnitte difl'erenziren sich so verscbieden schnell, dass sich genauere Angaben nicht machen lassen. Bei glücklich abgepasster Concen- tration der Differenzirungsflüssigkeit und der Diflterenzirungszeit kann man Präparate von hervorragender Klarheit bekommen: ganz dunkle Fibrillen auf ganz farblosem Grund. Bei Carcinus und Astacus habe ich manchmal mit obigem Ver- fahren leidliche Resultate bekommen. Bessere Resultate ergab aber hier Fixirung mit 3 Tb. concentrirter Pikrinsäurelösung und 1 Tb. concentrirter Lösung von pikrinsaurem Ammoniak mit direct darauf folgender Molybdänirung im Block. Die Schnitte geben oft ohne weitere Ditferenzirung gute Fibrillenfärbung im Neuropil und den Nervenstämmen. Die primäre Färbbarkeit der Zellen ist hier schwer zu unterdrücken und, auch wenn sie gelingt, ist das Fibrillenbild in der Regel undeutbch , Aveil sich das Plasma der Zellen stark molybdänirt. Literaturverzeiclmiss. 1) Bethe, Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LI, 1898. Bethe, Morphol. Arbeiten (Schwalbe) Bd. VIII, II. 1, 1898. 2) GoLGi, BoUettino della Societä nied.-cliirurg-. di Pavia 1898. 3) Meyer, S. , Berichte d. math.-phys. Kl. d. Kgl. Sachs. Gesellsch. d. Wiss. Leipzig 1897. Meyer, S., Arch. f. mikr. Anat. Bd. LIV, 1899. 4) Held, Arch. f. Anat. u Pliysiol. Anat. Abth. Suplement 1897. 4a) Held, Arch. f. Anat. u. Pliysiol. Anat. Abth. 1896. 5) Auerbach, Neurol. Centralbl. 1898. Auerbach, Monatsschr. f. Psycliatr. u. Neurol. Bd. VI, 1899. XYII, 1. Betho: Das Molybdiinverfahren. 35 G) DüXAGGio, Rivista speriment. di Frenetria vol. XXIV, iy;>8 — 1899. 7) Apäthy, Mittheil. d. Zool. Station zu Neapel Bd. XII, 1897. 8) FiscHKR, Fixirung, Färbung und Bau des Protoplasma. Jena 1899. 9) Spiro, Physikalische und physiologische Selection. Strassburg 1897. [Eingegangen am K!. Januar 1900.] ;;5ß Referate. XVII, 1. Referate. 1. Präparationsmethoden im allgemeinen. Yosmar, G. C. J., Eine einfache Modification zur Her- stellung von Plattendiagrammen (Auat. Anz. Bd. XVI, 1899, No. 10, 11 p. 269—271). Verf. bemerkt, dass die Methode der Wachsmodellirung zur Zeit hauptsächlich angewandt wird, dass Strasser aber schon auf die Nützlichkeit durchsichtiger Platten hingewiesen hat. Dass solche nicht mehr benutzt worden sind, liegt wohl hauptsächlich daran, dass das Zeichnen auf Glas, abgesehen von anderen Unbequemlichkeiten, immer sehr umständlich ist. Verf. hat daher Versuche mit Celluloid- platten gemacht und glaubt, dass die Herstellung von Diagrammen auf solchen genug Vortheile bietet, um Fachgenossen darauf aufmerk- sam zu machen. Er legt das Hauptgewicht in seiner Methode auf die bequeme und rasche Anfertigung. Sie ist also ein Hülfsmittel, um möglichst schnell eine körperliche Vorstelhmg von dem in Schnitte zerlegten Object zu gewinnen. Verf. benutzt Platten von „beiderseits polirtem transparentem Celluloid" von 0*5 mm Dicke (aus der Deutschen Celluloidfabrik Leipzig-Eulenburg). Solche Platten und auch dickere lassen sich sehr bequem mit der Scheere bearbeiten; man kann also jede beliebige Grösse und Form für die Diagramme wählen. Man fertigt einen Satz von 10X15 cm grossen Plättchen an und zeichnet darauf mittels lithographischer Kreide. Man kann dies entweder direct nach dem mikroskopischen Bilde thun, oder, was mehr zu empfehlen ist, erst die Umrisse auf Papier zeichnen XVII, 1. Referate. 37 und dann durchpausen. Verbesserungen können leicht ausgeführt werden, da ein mit Benzin benetztes Tuch die Zeichnung sofort ver- schwinden lässt. Die angefertigten Diagramme kommen dann in ein Gestell, an dem sich Vorrichtungen befinden, die Celluloidplatten einzuschieben ähnlich wie Objectträger in Präparatenkästchen, nur sind hier die Wände offen. Das Kästchen wird am bequemsten aus Metall hergestellt. Die Länge und Breite hängt ab von der Länge und Breite der Platten , die Tiefe von ihrer Anzahl. Für die oben erwähnte Plattengrösse von 10 X 15 cm betrugen die Dimensionen des Kästchens 10"5 : 16'5 : 30 cm. Man kann nun die Diaarramme von zwei Seiten bei durchfallendem Licht betrachten oder auch schief von oben. Mau bekommt also auf sehr einfache Weise das reconstruirte Bild. Mit dem bekannten FABER'schen Stift zum Zeichnen auf Glas lassen sich blaue und rothe Linien bequem anbringen. Man braucht nicht immer alle Schnitte durchzupausen. Mitunter ist es vortheilhaft, z. B. nur jeden dritten Schnitt zu zeichnen. Es bleiben dann entsprechende Räume zwischen den Platten offen, und es kann mehr Licht eindringen, Sckiefferdecker (Bo?m). Argutinsty , P. , Eine einfache und zuverlässige Me- thode, Celloid in Serien mit Wasser und Eiweiss aufzukleben (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LV, 1900, p. 415—419). Auf den sorgfältig von Fett gereinigten Objectträger bringt man ein kleines Tröpfchen von P. Mayer's Glycerineiweiss und verreibt dasselbe gleichmässig. Darauf wird das Eiweiss durch Erwärmen coagulirt. Dies geschieht am besten in einem bis etwa 100*^ C. er- hitzten Wärmeschrank. Viel unvollkommner ist das Gerinnenlassen des Eiweisses durch directes Erhitzen des Objectträgers über der Flamme , da man hierbei nur zu leicht zu stark erwärmt. In Er- mangelung eines Wärmeschrankes nimmt man ein Gefäss mit stark siedendem Wasser, überdeckt es mit einer glatten Metallplatte und legt, sobald sich dieselbe auf beinahe 100** C. erhitzt hat, den Ob- jectträger für einige Minuten darauf. Das Schneiden geschieht wie gewöhnlich unter TOprocentigem Alkohol. Jeder Schnitt wird gleich, nachdem er geschnitten ist , vom Mikrotommesser in ein Schälchen mit TOprocentigem Alkohol gebracht und darin sorgfältig entfaltet, um dann vorsichtig mit einem Spatel auf den Objectträger über- tragen zu werden , wo er reichlich mit Alkohol bedeckt , auf die coagulirte Eiweissschicht zu liegen kommt, ohne im geringsten an 38 Referate. XVII, 1. derselben zu haften. Ganz in derselben Weise verfährt man mit den folgenden Schnitten, bis die gewünschte Anzahl auf den Object- träger gebracht ist. Sind dann die Schnitte geordnet, so wird der die Schnitte bedeckende Alkohol abgesogen , indem man die Längs- ränder des Objectträgers vorsichtig mit Fliesspapier berührt, ohne die Schnitte hierbei zu verrücken. Jetzt wird , um das Haften der Schnitte zu bewirken, ein etwa 8- bis 12mal gefalteter Streifen von glattem Filtrirpapier auf den mit den Schnitten beschickten Object- träger gelegt. Durch wiederholtes, ziemlich starkes Streichen mit dem Finger wird das Filtrirpapier an die noch nasse Oberfläche des Ob- jectträgers gepresst. Hierauf wird der Filtrirpapierstreifen abgenom- men und das Präparat sofort (damit die Schnitte nicht austrocknen) in ein Gefäss mit destillirtem Wasser gebracht, worin sie bis zur Weiterbehandlung verbleiben. So hergestellte Serien vertragen jede Behandlung und jede Flüssigkeit, sofern diese das Eiweiss (oder das €elloidin) nicht auflösen, resp. angreifen. Will man das Färben erst nach vielen Tagen vornehmen, so empfiehlt es sich, die Objectträger in schwächerem Alkohol aufzubewahren. E. Schoebel {Neapel). Pokrowsski, M., Pribor dlja bysstrago obes wodnenija kussotschkow tkanei. [Apparat zur schnellen Entwässerung von G e w e b s t ü c k e u ] (Medizinsskoe Obosrenie 1899, Sept. — SA., 3 pp. m. 1 Fig.). Verf. beschreibt eine kleine Vorrichtung, um Gewebstücke mög- lichst schnell zu entwässern resp. von Härtungsflüssigkeiten möglichst schnell durchdringen zu lassen. Die Vorrichtung besteht, wie die beistehende Figur leicht erkennen lässt, aus einem Schälcheu , dessen Wand von Löchern durchbohrt ist, oder das netz- artig aus einzelnen Stäbchen hergestellt ist und einen entsprechend hohen Fuss be- sitzt, der unten auf einer Fussplatte ruht. Das Ganze hat also etwa ein weinglas- artiges Aussehen. Der Apparat wird nun in ein entsprechend grosses Glasgefäss ge- stellt, das mit Alkohol oder mit der Här- tungsflüssigkeit gefüllt ist imd das Gewebs- stückchen in die siebartige Schale gelegt. Dass diese Vorrichtung an sich ihren Zweck zu erfüllen vermag, ist wohl zweifellos, XVII, 1. Referate. 39 fraglich ist es nur, aus welchem Material mau sie am besten herstellt, damit sie nicht von den verschiedenen Flüssigkeiten angegriffen wird ; am besten wäre ja zweifellos Glas. Näheres ist darüber nicht an- gegeben. 8c]iiefferdecl;er {Bonn). McFarlaud, F. M., Histological fixation by injectiou (Journ. applied Microsc. vol. II 1899, no. 10, p. 541). Um in bequemer Weise eine vollständige Härtung eines ganzen Thieres oder auch einzelner Organe herbeizuführen, schlägt Verf. die Injection der Fixirungsflüssigkeit in das Thier vor. Er hat diese Art der Fixirung bei den verschiedenen Wirbelthierklassen mit stets gutem Erfolge angewendet. Der dazu von ihm benutzte Apparat besteht aus zwei Gummischläuchen von 6 bis 8 Fuss Länge, in deren oberes Ende je ein Trichter eingefügt ist. Die beiden Schläuche werden auf ein Y-förmiges Glasrohr aufgesteckt, dessen dritter Schenkel in einen dritten kurzen Schlauch eingeführt wird, welcher die Kanüle trägt. In einen langen Gummisclilauch wird kurz vor dem Y-förmigen Verbindungsstück noch ein T-förmiges Glasrohr eingefügt, dessen freies Ende mit einem ganz kurzen Gummischlauch versehen ist, welcher frei endigt. Alle die genannten Schläuche werden durch im ganzen vier Klemmen geschlossen. Der kurze Schlauch auf dem T-Stück dient dazu, bequem die Luft herauszulassen. In den einen Trichter wird nun auf Körpertemperatur erwärmte physiologische Kochsalzlösung eingegossen, in den anderen (dessen Schlauch das T-fÖrmige Stück trägt) die zu injicirende Fixirungsflüssigkeit, welche ebenfalls auf Körpertemperatur gebracht wird. Der physiologischen Kochsalzlösung werden vor der Injection noch einige Tropfen von Milchsäure , Amylnitrit oder von einem anderen, Gefässerweiterung herbeiführenden Stoffe eingefügt. Nachdem das Thier anästhesirt ist, wird der Thorax schnell geöffnet, die Herzspitze quer abge- schnitten und die Kanüle durch den linken Ventrikel in die Aorta ascendens eingeführt und dort festgebunden. Bevor die Kanüle in das Herz eingeführt wird , lässt man die Salzlösung durch den ganzen Apparat unterhalb des T-Stückes laufen, um die Luftblasen zu entfernen. Durch die Kochsalzlösung wird das Blut des Thieres aus den Gefässen entfernt. Sieht man, dass aus dem rechten Ven- trikel keine blutig gefärbte Flüssigkeit mehr austritt (es genügt dazu eine Injection von 30 bis 40 Secunden), so schliesst man den Salz- schlauch ab und öffnet den Schlauch der Fixinmgsflüssigkeit, welche man etwa 5 bis 10 Minuten durch das Blutgefässsystem hindurch- 40 Referate. XVII, 1. laufen lässt. Dann wird die Injection beendigt und das Thier je nach der Art der Fixirungsfiüssigkeit verschieden weiter behandelt. Hat man z. B. Sublimat angewendet, so wird der Verdauungskanal geöffnet, der Inhalt entfernt und das Thier in Alkohol von steigender Concentration gebracht. Bevor die Härtung im Alkohol vollendet ist, nimmt man am besten die verschiedenen Organe heraus und legt sie in besondere Gläser. Hat man ZENKER'sche Flüssigkeit angewendet, so nimmt man nach vollendeter Injection die Organe heraus und legt sie weiter die Nacht über in dieselbe Flüssigkeit; dann Aus- waschen in Wasser und steigendem Alkohol. Ausgezeichnete Dienste leistet diese Methode für die Untersuchung des Centralnervensystems bei Anwendung der verschiedenen Bichromatmischungen. Mau braucht viel weniger Zeit zur Härtung, und das Herausnehmen von Gehirn \mä Rückenmark wird durch die Härte, welche diese Organe schon erhalten haben, erleichtert. Will man nur bestimmte Theile des Thieres iujiciren, so kann man das durch Abbinden leicht erreichen. — Wählt mau statt der physiologischen Kochsalzlösung eine keine Chloride enthaltende, isotonische Lösung und beschränkt die Injection auf die Baucheingeweide, so erhält man ausgezeichuete Präparate von Endothelien. Nachdem das Blut ausgewaschen und nachdem die Bauchhöle mit der isotonischen Flüssigkeit ausgespült ist, injicirt man eine Silbernitratlösung von ^/^ bis 1 Procent. Nach einer In- jection von 3 bis 5 Minuten wird die Silberlösung mit destillirtem Wasser ausgewaschen, das Mesenterium wird ausgebreitet und bis zur vollständigen Reduction dem Sonnenlicht ausgesetzt. Schie/ferdecker (Bonn.) Fischer, A. , Fixirung, Färbung und Bau des Proto- plasmas. Kritische Untersuchungen über Tech- nik und Theorie in der neueren Z e 1 1 f o r s c h u n g. Jena (Fischer) 1899, 362 pp. 8^. Die vorliegende Kritik der modernen cytologischen Methoden gliedert sich in drei Abschnitte : im ersten Kapitel wird die Fixirung, die Wirkung der Fixirungsmittel auf die Lösung von Eiweisskörpern behandelt, im zweiten die Färbungsverfahren nach theoretischen und praktischen Gesichtspunkten erörtert, im letzten die durch die mo- dernen Methoden gewonnenen Anschauungen über Plasmastrahlungen, Centrosom u. a. kritisch besprochen. Die Fülle von Material, die Verf. in seinem Werke zusammengetragen hat, und der Reichthum an bedeutsamen neuen Gesichtspunkten, die wir in dem Buche aus- XVII, 1. Referate. 41 gesprochen tiiulen , nötliigen uns , statt einer eingehenden Inhalts- angabe nur eine gedrängte Uebersicht des Allerwichtigsten zu geben, das für den Mikroskopiker beherzigenswerth und zur richtigen theoretischen Deutung allbekannter Proceduren unentbehrlich er- scheint. Die Wirkung der Fixrrungsflüssigkeiten und -gemische wurde vom Verf. an zahlreichen Eiweisskörpern studirt, von welchen folgende als Testobjecte hervorgehoben werden : 1) Nucleinsäure (aus Hefe), 2) Albumose (Deuteroalbumose) und 3) Serumalbumin. „Die erste wurde gewählt wegen ihrer engen Beziehungen zum , Chromatin', die Albumose könnte vielleicht als Verdauuugsproduct in gewissen Ge- weben erscheinen, das Serumalbumin charakterisirt die beiden grossen, fixirungstechnisch übereinstimmenden Gruppen der Albumine und Globuline, überhaupt die Gerinnselbildner." — Nach ihrem Verhalten zu den verschiedenen Eiweisskörpern gruppiren sich die wichtigsten Fixirungsmittel folgendermaassen : I. Nucleinsäure wird nicht oder nur durch starke Concentration gefällt. Albumose wird gar nicht, Albumin sowohl aus alkalischen als sauren Lösungen gefällt. — Hier sind zu nennen die von Alt- mann gerühmte Salpetersäure, ferner Essigsäure, Salpetersäure-Alkohol und Essigsäure-Alkohol. „Diese Fälhmgsmittel müssen deshalb als unzuverlässig bezeichnet werden, weil sie, stärker verdünnt, oft anders wirken als concentrirt und ausserdem die Fällungen mancher Eiweiss- körper theilweise oder ganz im Ueberschuss wieder löslich sind." H. Nucleinsäure wird gar nicht, Albumose und Albumin werden nur aus sauren, nicht aus alkalischen (oder neutralen) Lösungen ge- fällt. Die Niederschläge sind unlöslich. — Zur zweiten Gruppe ge- hören die gewöhnlich als „neutrale" bezeichneten Fixirungsmittel: Osmiumsäure, Kaliumbichromat, Kaliumbichromat-Glaubersalz (Müller- sche Lösung), Kaliumbichromat -|- Osmiumsäure (Altmann's Gemisch) und das selten gebrauchte Jodkaliumquecksilberjodid (nach Altmann). - — Osmiumsäure ist zweifellos ein sehr schwaches und unvollständiges Fällungsmittel. Die Nucleoalbumine werden von ihr nicht gefällt, Deuteroalbumose und Protalbumose nur in saurer Lösung, Hämo- globin erst nach mehrtägiger Einwirkung. Kaliumbichromat steht der Osmiumsäure in ihren Wirkungen nahe , fällt aber auch die Nucleoalbumine in saurer Lösung leicht aus. Die bekannte Wirkung der MüLLER'schen Flüssigkeit dürfte sich wohl durch die dissociiren- den Fähigkeiten des Glaubersalzes und die allmähliche Abspaltung von Chromsäure erklären. 42 Referate. XVII, 1. III. Niicleinsäure , Albumose niul Albumin werden bei jeder Keaction gefällt, obscbon auch bei vielen Vertretern dieser Gruppe der fällungsverzögernde Eiufluss der alkalischen Reaction bemerkbar ist. — Es sind zwei Untergruppen zu unterscheiden : A) Die Fällungen der Nucleinsäure und der Albumose sind in Wasser löslich. Albumin wird coagulirt. — Hierher gehören Alkohol, Aceton (nach Held) , Pikrinsäure und Pikrinschwefelsäure (nach Kleinenberg). Die Niederschläge der Peptone und Albumosen durch Pikrinsäure sind wasserlöslich , die der Albumine , Nucleoalbumine, des Nucleins , Hämoglobins etc. in Wasser unlöslich. Sehr leicht lösen sie sich aber in verdünnter Kalilauge (0'2 Proceut) , „was vielleicht für eine Nachbehandlung der Schnitte später einmal ver- wendet werden könnte". B) Alle Fällungen sind in Wasser unlöslich. „Wenn überhaupt bei beliebiger Reaction Eiweisskörper im Protoplasma oder im Kern gelöst vorkommen, und ihre Menge nicht unter das Fällungsminimum, was sehr gering ist, herabsinkt, dann müssen sie durch die nun folgenden Fixirungsmittel derartig dauerhaft und unlöslich abgeschieden werden, dass sie im fertigen Präparat auch hervortreten." — Zu dieser Untergruppe gehören die selten verwendete Gerbsäure (Alt- mann, Zacharias, Rawitz), die Chromsäure, Chromsäure -\- molybdän- saurem Ammon (Altmann) , Sublimat , Platinchlorid , MERKEL'sche Mischung (Platiuchlorid-Chromsäure), Formol, Jodlösuugen (Jodalkohol, Jodjodkalium) , Osmiumessigsäure , Flemming's und Hermann's Ge- misch. — Die Erklärung Flemming's für die „treue Fixirung der Formen" bei Anwendung seines Fixirungsgemisches corrigirt Verf. dahin, dass nicht die Osmiumsäure momentan tödtend wirke und den Spielraum für Veränderungen während des Absterbens auf ein Mini- raum abkürze, sondern vielmehr die Fällungskraft der Osmiumsäure eine sehr geringe ist und ihre Wirkung der der Chromsäure nach- hinken müsse, — abgesehen davon, dass Nucleoalbumine, Nuclein und Nucleinsäure der Fällung durch Osmiumsäure sich gänzlich ent- zögen (s. oben). Von vornherein als wenig empfehlenswerth werden ihrer lösen- den Wirkungen wegen die alkalischen Lösungen Lysol (nach Reinke) und Laugenalkohol (nach Held: Alkohol -\- Natronlauge) zu be- zeichnen sein. — Nach der Form der Niederschläge lassen sich zwei Gruppen von Eiweisskörpern unterscheiden: die Gerinnselbild- ner, welche schollige, häutig -faltige, meist fein plasmatische, zart XVII, 1. Referate. 43 punktirte Niederschläge entstehen lassen. Die Producte dieser Art bestehen offenbar aus feinsten granulären Elementen, die zu grösseren Aggregaten vereinigt keine Diff'erenzirung in diesen gestatten. Die G r a n u 1 a b i 1 d n e r dagegen „geben isolirte oder paarweise und in kurzen Kettchen oder nach Art der Hefesprossverbäude zusammen- gelagerte schöne Körner von sehr verschiedener Grösse". — Bei Behandlung der Granula mit einem der üblichen Färbemittel wird die Vollfärbung von der „Spiegelfärbung" zu unterscheiden sein. Die erstere resultirt bei schwächerer Entfärbung als Totalfärbung der grösseren Granula , während die kleineren gänzlich oder theil- weise entfärbt und damit einer Contrastfärbung zugänglich werden. Durch länger andauernde Entfärbung wird auch der äussere Theil der grösseren Granula für eine Contrastfarbe frei werden. Bei Bil- dung eines secundär färbbaren Bandes oder einer unterschiedlichen Tingiruug eines solchen spricht Verf von Spiegelfärbung. Zu den Granulabildnern gehören Deuteroalbumose , Prot- albumose, Pepton, Nucleinsäure, Hämoglobin u. a. Dünnere Lösungen von Fixirungsmedien geben durchschnittlich kleinere und regelmässigere Granula als concentrirtere Lösungen. — Zu den Gerinnselbildnern sind zu rechneu Serumalbumin, Serumglobulin, die Nucleoalbumine, Nuclein etc. — Auch bei Behandlung von Gemischen behalten Gra- nula- und Gerinnselbildner ihre specifischen Fällungsformen bei. Die durch Reagensglasversuche gewonnenen Resultate lassen sich, wie Verf. des weiteren zeigt , dazu verwerthen , bestimmte Eiweiss- körper in der Zelle fixirungsanalytisch nachzuweisen. Die Unter- scheidung der Gerinnselbildner wird vorläufig freilich als aussichts- los erscheinen müssen, dagegen ist der Nachweis von Albumose und reiner Nucleinsäure wohl möglich. Der Kürze wegen seien hier nur die Resultate angegeben. I) Methode zum fixirungsanalytischen Nachweis der Albumose: „1) Fixirung mit Osmiumessigsäure und Alkohol, die erstere giebt Granula, wenn Albumose vorhanden, die letztere darf keine geben. Zur Controlle wende man noch HERMANN'sche Lösung (Granula) und Pikrinsäure (keine Granula) an. 2) Färbung mit Säurefuchsin , Difterenzirung mit Pikrinalkohol : im Osmiummaterial schön rothe Granula, im Alkoholmaterial nichts. Letzteres auch mit Eiseuhämatoxylin gefärbt und ausserdem noch vor der Färbung mit Säurefuchsin, mit Albumose oder Osmiumsäure imprägnirt, um die Farbkraft zu steigern. Sind jetzt im Alkoholmaterial keine solchen Granula zu finden wie bei Osmiumfixirung , so ist Albumose vor- 44 Referate. XVII, 1. banden. 3) Lösung der Osmiumalbumose mit Kaliumpermanganat und Salzsäure, Oxalsäure, lieissem Wasser. Lösen sich die Granula nicht, so ist keine Albumose vorbanden, was sich auch schon bei der Fixirung dadurch zeigen wird, dass das Alkoholmaterial Granula enthält'^ II) Methode zum fixirungsanaly tische n Nachweis der freien N uc lein säur e : „Fixirung mit Flemmixg's oder Hermann's Gemisch und mit Alkohol; in ersterem Granula oder knorrige, chro- mosomenartige Bildungen, die sich mit sauren Farben, kalt oder heiss, gar nicht färben. Im Alkoholmaterial werden diese Gebilde ganz fehlen. 2) Imprägniruug der Schnitte mit öprocentiger Albumose (eine halbe Stunde kalt) und Färben mit denselben sauren Farben wie bei 1). Intensive Färbung der acidophoben-*^ Fällungen. Zur Controlle Färbung der nicht imprägnirten Schnitte mit Alauneosin." Was lehren die bisher mitgetheilten Thatsachen für die moderne cytologische Methodik? Wehn anders die üeberführung in feste, unlösliche Verbindungen als Grundprincip der Fixirung anerkannt werden darf, wenn die Eiweisskörper der Zelle in die entsprechenden chemischen Verbindungen des Fixirungsmittels vor der mikroskopischen Untersuchung übergeführt werden müssen , wird die Bildung von Artefacten nicht auszuschliessen sein; in der That liefert ja jedes Fixirungsmittel ein anderes Bild. Wir werden uns durch Anwendung zahlreicher, den oben erörterten Verhältnissen ent- sprechend ausgewählter Fixirungsmittel bedienen müssen, um uns vor Irrthümern zu bewahren, und nur regelmässig wieder- kehrende Formen als glaubhaftes Abbild des natürlichen Baues be- trachten dürfen. Wir werden ferner auch den sogenannten schlecht tixirten Stellen unsere Aufmerksamkeit zu schenken und uns nicht, wie es häufig geschieht, auf die „typischen" Fälle der Ausbildung zu beschränken haben. Aus dem zweiten Kapitel des Werkes heben wir lediglich Fol- gendes hervor : Bekanntlich muss man dem Färben fixirter Objecte eine gründ- liche „Auswaschung" vorangehen lassen, da andernfalls die Tinctionsfähigkeit des Präparates herabgesetzt oder gänzlich auf- gehoben wird. Die verschiedenen Fixirungsflüssigkeiten verhalten sich hierin verschieden. Als indifferente, welche kein Auswaschen ^) Auf den Begriflf der Acidophobie kommen wir weiter unten noch zurück. XVII, 1. Referate. 45 verlaugeu, siud Alkohol, Formaldehyd und Essigsäure zu bezeichnen, nahezu indifferent ist Pikrinsäure. Totale Farbfeinde sind Platiuchlorid, HEiiMANN'sche Lösung, Tannin, Osmiumsäure, Altmann- sche Lösung, Jodalkohol. Zwischen beiden stehen die partiellen Färb feinde, welche Färbung mit Eosin oder Säurefuchsin ge- statten, die anderen Farben aber gänzlich absperren: Chromsäure, Kaliumbichromat, FLEMMiNo'sche Lösung, Sublimat. — Die Erklärung für die w^ohlbekannten Phänomene findet Verf. darin, dass der aus- waschbare Rest der Fixiruugsllüssigkeiten nicht chemisch gebunden, sondern nur adsorbirt ist, und eben weil er alle Adsorptionsfähig- keiten des Niederschlaggranulums sättigt, werden die physikalischen Affinitäten des letzteren zu Farbstoffen unwirksam werden müssen. — üeber leichte und schwere „Auswaschbarkeit" fixirten Materiales wird übrigens nicht nur das Adsorption svermögeu der fixirten Ob- jecte, sondern auch der passive Adsorptionscoefficient des betreffenden Fixirungsmittels zu entscheiden haben. Gleich GiERKE ^ steht auch Verf. durchaus auf dem Boden der physikalischen Färbungstheorie. Ausser den oben bereits erörterten Vorgängen beim Auswaschen fixirten Materiales werden für die phy- sikalische Färbungstheorie noch folgende Beobachtungen ins Feld zu führen sein. Die als indifferent bezeichneten Fixirungsmittel ändern das ur- sprüngliche Färbuugsvermögen eines Eiweisskörpers nicht und lassen somit die primäre Chromatophilie (primäres Adsorptionsvermögen) hervortreten. Die übrigen Fixirungsmittel geben dem behandelten Eiweisskörper neue chromatophile Eigenschaften (secundäres Ad- sorptionsvermögen). Ist das primäre Adsorptions vermögen stark und specifisch ausgebildet, so verschiebt sich auch bei Fixirung die Chro- matophilie nicht ; der Einfluss wird aber bemerklich , wenn es an einem intensiven, primären Adsorptionsvermögen fehlt. — Hinsichtlich der primären Chromatophilie lassen sich zwei Gruppen von Fällungen unterscheiden: acidophobe und indifferente. Zu den acidophoben, d. h. denjenigen, welche saure Farbstoffe verschmähen, gehört die Nuclein- säure , indifferent sind Albumose , Albumine, Globuline, Casein, Hämoglolin und Nuclein, — das letztere zeigt ganz schwache Acido- phobie , die in wenigen Secunden überwunden wird. Von basischen Farben kamen (in O'l procentiger Lösung) Fuchsin, Safranin, Methyl- grün, Methylenblau, Gentianaviolett, — von den sauren (in 0*5 pro- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. I, 1884, p. 62 ff. 46 Referate. XVII, 1. centiger Lösung) Säui'efuchsin, Liclitgrün, Indulin, Pikrinsäure, Eosin und Methylorange — letzteres in couceutrirter wässeriger Lösung zur Verwendung. Basophobe Körper konnten nicht ge- funden werden. — Durch Einführung schwerer Metalle in das Molekül der Eiweisskörper wird das primäre Adsorptionsvermögen des letzteren zum secundären umgeprägt. Im allgemeinen gilt die Regel, „dass nur die schweren Metalle secundäre Färbungsstimmung verleihen, dass diese nur gegen die sauren Farben und das Methylgrün sich richtet und in gesetzmässigen Beziehungen zum specifischen Gewicht steht". Im letzten Abschnitt des zweiten Kapitels fasst der Verf. die Grundlagen seiner physikalischen Theorie zusammen , in der alles Erörterte seine einheitliche Erklärung findet. „Je weniger löslich ein Stoff ist, um so leichter fällt er ja natürlich aus, um so geringere Kräfte sind dazu erforderlich. Da nun die Färbung gewissermaassen als intermicellare Fällung des Farbstoffes aufzufassen ist, so leuchtet ein , dass die schwerer löslichen basischen Farbstoffe schon durch schwächere Micellarkräfte gefällt werden, als die sauren . . Nicht weniger intensiv färben auch die sauren Farben, wenn man durch Säure oder durch Alaun ihre Löslichkeit herabdrückt auf das Niveau der basischen Farben". — Die von Auerbach entdeckte „Chromatophilie" der Geschlechts- kerne findet durch die physikalische Theorie ihre schönste Erklärung: Die dichtgebauten männlichen Kerne verhalten sich zu den lockeren weiblichen hinsichtlich ihres „Wahlvermögens" nicht anderes als grosse und kleine Granula. Auch diese künstlichen Niederschlags- producte färben sich „wundervoll chromatophil : die grossen substanz- reichen Granula blaugrün, die anderen roth" (Näheres im Original p. 147, 141, 142). Ausser Stande , alles in diesem Kapitel Enthaltene hier auch nur zu streifen, wende ich mich mit einigen Worten noch dem letzten Abschnitt zu : Bau des P r o t o p 1 a s m a s. Künstliche Strahlungen in HoUuiidermark erhielt Verf. durch Injection der letzteren mit Eiweisslösungen , nachfolgender Fixirung und Färbung der Niederschläge. Die Strahlen gruppiren sich in den Markzellen um den zumeist noch vorhandenen Kernrest; sind deren zwei vorhanden , so entstehen Curvensysteme , wie wir sie von den magnetischen Figuren und den karyokinetischen Bildern her kennen. Bau und Verlauf der histologischen Strahlungen stimmt so vollständig mit den künstlich erzeugten überein, dass diese wohl XVII, 1. Referate. 47 mehr als eine nur rein äusserliclie Nachahmung gedeutet werden können. Hinsichtlieh der C e n t r o s o m e n macht Verf. darauf aufmerk- sam , dass der für diese charakteristische Hof eine Deutung der Centrosomen als Nucleolen in „Spiegelfärbung" (s. o.) nahe legt. Damit harmonirt, dass die Cytologen den Nucleolen ein grösseres Volumen als den Centrosomen zuerkennen. Bei einer Kritik der verschiedenen Ansichten über P r o t o - p 1 a s m a s t r u c t u r (Granulär-, Filar- und Wabenstructur) wird man sich daran zu erinnern haben, dass den betreffenden Autoren fixirtes Material vorgelegen hat. Verschiedene Fixirungsflüssigkeiten erzeugen nun , wie Verf. gezeigt hat , die verschiedenartigsten Niederschlags- formen, die bald der Granulär-, bald der Filartheorie das Wort zu sprechen scheinen. Lässt man zu den erzeugten Niederschlägen lang- sam wirkende Lösungsmittel hinzutreten, so entstehen, wie Versuche an Hollunderraark zeigen, — Schaumstructuren. Hieraus ergiebt sich von selbst, in wie weit unsere Fixirungs- methoden berufen sind, Fragen nach der Structur des Plasmas lösen zu helfen. Die Rückkehr zur Natur , zum Studium der lebenden, nicht fixirten Zelle wird zum mindesten vor derartigen Irrthümern bewahren können. Küster {Miinchen). Hacker, V., Praxis und Theorie der ZeUb efruchtuugs- lehre. Jena (Fischer) 1899. 260 pp. m. 137 Figg. Verf. bespricht in einer sehr ausführlichen und interessanten Arbeit genau alles Das, was wir bis jetzt von der Zelle, ihrer Theilung, der Ei- und Samenbildung und der Befruchtung wissen. Er giebt dabei ausserdem in jedem Falle Mittheilungen über die Beschaffung des Materials und die Methode, auf die hier speciell verwiesen werden soll. Es können hier aus der grossen Anzahl solcher Angaben nur einige mitgetheilt werden, wegen der übrigen muss auf das Original verwiesen werden. Für die C o n s e r v i r u n g der Amöben w ird das Folgende angegeben : Sind Amöben in genügender Menge vor- handen, so dass der durch Wegschwemmung etc. hervorgerufene Ver- lust nicht ins Gewicht fällt, so kann mau die Conservirung und Färbung derselben auf dem Objectträger vornehmen. Als Conservirungs- fiüssigkeit verwendet man absoluten Alkohol mit Zusatz von Jod oder Sublimat, nach Schaudinn eine Mischung von concentrirter, wässeriger Sublimatlösung mit absolutem Alkohol 2:1, als Färbungsmittel eine Carmin- oder Hämatoxylinlösung. Alle Flüssigkeiten werden hinter 48 Referate. XMI, 1. einander unter dem Deckglas durcligeleitet. Es ist liierbei darauf zu achten, dass unter dem Deckglas nicht Sandköruclien, Rhizopoden- schalen etc. liegen, weil sonst die Amöben in Folge des mangelnden Druckes leicht weggeschwemmt werden. Die Verklebung zusapimen- geschwemmter Amöben erzeugt häufig Trugbilder, welche den Thei- lungsprocess vortäuschen. Diese Methode lässt die Kern- und Proto- plasmastructur, die contractilen Vacuolen und vielfach auch, wenn die Einwirkung des Conservirungsmittels eine plötzliche war , die Pseudopodien Erkennen. — Für die Structur des Kernes werden unter anderen die Ovarialeier von Siredon und Triton empfohlen. Die Ovarialeier desAxolotls und der Amphibien über- haupt können nur auf Schnitten untersucht werden. Bei vielen Conservirungsmethoden werden aber die Eier wegen der Menge und Beschaffenheit des Dotters so spröde , dass sie beim Schneiden zer- bröckeln. Man hat daher schon bei der Wahl der Conservirungs- mittel auf die Schneidfälligkeit Rücksicht zu nehmen. Bei der Unter- suclmng junger Eierstockseier von Siredon ist die FLEMMiNG'sche Methode anzuwenden: Conservirung und 14tägige Behandlung mit 0'25procentiger Chromsäure, Auswaschen in Wasser, Härtung mit Alkohol, Herstellung der Schnitte, 24stündige Färbung in verdünntem BüHMEu'schen Hämatoxylin. Etwas abgeändert worden ist die für die jungen Eierstockseier von Triton vorgeschlagene BoRN'sche Methode. Man entnimmt dem Weibchen von Triton taeniatus während der Laich- zeit (April bis Juni) die Ovarialsäcke, öffnet sie unter physiologischer Kochsalzlösung der ganzen Länge nach und zerschneidet sie in mög- lichst kleine Stücke. Man bringt die letzteren in heisse , drittel- procentige, wässerige Chromsäurelösung (80 bis 90^ C), lässt sie in der erkaltenden Flüssigkeit 2 Tage liegen und spült sie 2 Tage lang in fliessendem Wasser ab. Die mit Collodium-Ricinusöl auf- geklebten Schnitte werden 24 Stunden lang mit BöHMEu'schem Hämat- oxylin gefärbt und einige Minuten in messendem Wasser abgespült. Sie erscheinen nun vollkommen schwarz , und auch die Auf klebe- masse ist sehr dunkel. Man zieht jetzt unter dem Mikroskop aus, entweder mit salzsaurem Alkokol eine Minute lang oder mit 0*5- bis l'öprocentiger Eisenammonium - Alaunlösung 5 bis 15 Minuten lang, jedenfalls so lange , bis die Auf klebemasse farbfrei ist. Nach Ab- spülen mit Wasser Weiterbehandlung bis zum Einschluss in Canada- balsam. Bei sehr sorgfältiger Ausführung des Verfahrens wird man die Erfahrung machen, dass bei Conservirung mit Chromsäure bei gleicher Behandlung und bei gleichen Objecten die Kerne und Zell- XVII, 1. Referate. 49 striicturon verschieden gut zur Darstellung- kommen und auch die Schneidbarkeit eine verschiedene ist. Möglicherweise hängt das mit wechselnden physiologischen Zuständen der Gewebe /Aisammen. — Für die chromatische Figur bei der Z eilt h eilung geben Cornea und Schwanz flossenepidermis der Salamander- larven schöne Bilder. Die Cornea lässt sich am conservirten Material leicht mittels einer Pincette abziehen, ebenso wie die Epi- dermis der Schwanzflosse. Schöne Bilder liefern auch die Epithel- zellen des Mundbodens und der Kiemenblätter, sowie des parietalen Bauchfells, das man in kleinen Fetzen frei präparirt. Nach den Erfahrungen des Verf. ist bei jüngeren Larven am sichersten auf eine grössere Menge von Kerntheilungstiguren zu rechnen, wenn man die Larven , nachdem sie ein Paar Tage gehungert haben , bis zur üebersättigung mit Tubifex- oder mit Chironomuslarven füttert und dann etwa am vierten Tage nach Beginn der Fütterung conservirt. Zur Fixirung der ganzen oder in Stücke geschnittenen Larven sind besonders FLEMMiNG'sche, HERMANN'sche oder vom RAxn'sche Flüssig- keit zu empfehlen. Kürzere (bis zu 24stündige) Behandlung des Objects mit der Conservirungsflüssigkeit , gründliche Auswässerung und lialbstündige Färbung mit verdünntem Hämatoxylin liefern für die Chromatinfiguren vollkommen ausreichende Bilder. Für die gleich- zeitige Darstellung der achromatischen Figur, speciell der Kern- spindel empfiehlt sich längere, mindestens 48stündige Anwendung der Flüssigkeit, und bei Wahl der HERMANx'scheu oder vom RATH'schen Flüssigkeit längere (je 12- bis 24stündige) Nachbehandlung (Reduction) mit rohem Holzessig, Methylalkohol und TOproeentigem Alkohol. Die so vorbereiteten Larvenstücke werden von dem Prakticanten selber in einem Uhrschälchen präparirt und die Epithelfetzen mit verdünntem BöHMER'schen oder DELAFiEEo'schen Hämatoxylin 15 bis 30 Minuten lang gefärbt. Dann Alkohol, Einschluss in Balsam. — In Bezug auf die befruchteten Eier des Pferdespulwurms (Ascaris me- galocephala ) vergleicht Verf. die angegebenen Methoden und kommt zu folgendem Schluss : Ein Rückblick auf alle Methoden und die damit erzielten Bilder zeigt, dass bei günstiger Beschaffenheit der EihüUen (BovEui) die meisten Methoden die Strahlungen deutlich und in annähernd gleicher Weise zur Darstellung bringen. Was die Dar- stellung der Centralkörper und Centrosomen anlangt, so leistet die HEiDENHAiN'sche Hämatoxylin-Eisenlackfärbuug auch bei diesem Object gute Dienste, obwohl sich auch hier die von Flemming, P. Mayer u. A. gemachte Erfährung bestätigt, dass sie launenhaft ist und keines- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 1. 4 50 Referate. XVII, 1. wegs eine specifiscbe Centralkörperfärbiing darstellt. Für unsere Zwecke empfiehlt es sich , gleichzeitig 2 Präparate vorzubereiten, eines für die Untersuchung der ganzen Eier , das andere für die Herstellung von Schnitten. Das erste würde etwa nach der Herla- schen Methode, das letztere nach dem Verfahren von Boveri oder KosTANECKi - SiEDLECKi herzustellen sein. — Ueber Eibildung, K e i m f 1 e c k e und D o 1 1 e r k e r n wird bei den P^ i e r s t o c k s e i e r n der Teichmuschel das Folgende angegeben : Die beiden Theile des Hauptnucleolus verhalten sich gegenüber den Reagentien in manchen Punkten verschieden. Neuerdings hat List ^ bei den Eiern von marinen Lamellibranchiern mittels der Berlinerblau-Reaction dieses Verhältniss aufs neue festgestellt. Diese Reaction besteht darin, dass die Ferrocyanwasserstotfsäure, welche bei Einwirkung verdünnter Säuren auf Ferrocyankalium (gelbes Blutlaugeusalz) entsteht, sich an der Luft rasch bläut unter Bildung von Ferrocyaneisen oder Berliner- blau. Nach List zeigen unter den Kernsubstanzen nur die Substanz des grossen, blassen Theiles des Doppelkernkörpers und ebenso die Nebennucleolen die Berlinerblau-Reaction. Die Reaction wird wesentlich gefördert, wenn man zuvor mit Hülfe einer starken Säure Eisen in ganz geringer Menge an die Substanzen bindet. Färbt man dann die Präparate nachträglich mit Carmin, so erhält man, da sich nunmehr der „kleine dunkle Theil" und ebenso die Chromatinsubstanz roth färben, ein schimes Contrast- bild. Schnitte durch das mit Sublimat fixirte Ovarium z. B. von Pholas dactylus werden mit Wasser aufgeklebt und eine halbe Stunde in ein Bad gestellt, das 50 cc destillirtes Wasser, 10 Tropfen einer 0'5 procentigen Eisenchloridlösung (0"5 g an der Luft zerflossenes Eisenchlorid auf 100 cc destillirtes Wasser) und ö Tropfen einpro- centige Salzsäure enthält. Dann gründliches Aljspülen in destillirtem Wasser, Zusatz von 2 Tropfen der l*5procentigen Ferrocyankalium- lösung, nach 5 Minuten Abgiessen des Ueberflüssigen, so dass der Schnitt gerade noch benetzt ist, dann Zusatz von 2 Tropfen der einprocentigen Salzsäure. Die Reaction tritt fast augenblicklich ein. Nach gründlichem Abspülen mit Wasser Nachfärbung mit einem Carmin (Boraxcarmin, Paracarmin oder Mayer's Carmin) und zwar auch wieder in der Weise, dass man nur einige Tropfen auf den Objectträger giebt und nach kurzer Einwirkung die Farbe behufs Entfernung der Spuren der vorhin angewandten Reagentien einmal 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. ;32t5. XVII, 1. Referate. 51 wechselt. — Befruclitete Eier von Myzostoma. Myzostoma ist während der Frühjahrsmonate olme Schwierigkeit in Neapel in genügender Menge und in geschlechtsreifem Zustande zu erhalten. Man zerzupft in einem Uln-gläsclien einige möglichst grosse und dunkel gezeichnete Exemplare mittels zweier Nadeln, oder es werden die Thiere, indem man sie mit einer stumpfen Nadel längs der Mittellinie des Rückens quetscht, zur Entleerung der Eier und des Samens gebracht (Wheeler). Hierauf werden die Gewebsfetzen oder die aus- gedrückten Thiere entfernt, und es wird frisches Seewasser zugesetzt. Die Befruchtung vollzieht sich nunmehr im Laufe von 1 bis 2 Stunden, und so lange etwa lässt man die Cultur stehen. Da nun bei der ausserordentlichen Kleinheit der Eier die Uebertragung in die ver- sdiiedenen Reagentien und die Vorbereitung zum Schneiden bei Anwendung des gewöhnlichen Verfahrens mit Schwierigkeiten verknüpft wäre, so muss man sich eines kleinen Kunstgriffs bedienen. Man schneidet aus ülvablättern keine, napfförmig vertiefte Parthien heraus und hält dieselben in einem kleinen, tiefen Uhrgläschen bereit. In diese Näpfe werden nach Absaugen des Wassers die Myzostomaeier mittels der Pipette gebracht. Haben sich die Eier gesetzt, so fügt man vorsichtig einige Tropfen FLEMMiNG'scher oder vom RATH'scher Flüssigkeit zu, unter deren Wirkung die Eier an den Blattstückchen in dichter Menge kleben bleiben, so dass sie dann mitsammt dieser Unterlage den weiteren Proceduren unterzogen werden können. Man lässt die Flüssigkeit nur wenige Minuten einwirken und ersetzt sie dann durch TOprocentigen Alkohol. Die Ulvastückchen mit den darauf befindlichen Eiern werden eingebettet und geschnitten , die Schnitte mit Hämatoxylin gefärbt. — Hoden von Salamaudra. Man entnimmt die Hoden im September oder October Thieren, welche sich möglichst kurz in Gefangenschaft befunden haben. Man fixirt mit HERMANN'scher Flüssigkeit (1 Vol. einprocentiger Platinchlorid- lösung, 2 Voll. 2 procentiger Osmiumsäure, 1 Vol. Eisessig) und färbt die Schnitte mit Safranin und Gentianaviolett. Die in Anilin- wasser (Farbstoff l'O, Alkohol, absolut, lO'O, Aniliuwasser 90"0) gelösten Farbstoffe kommen getrennt zur Wirkung. Die Schnitte kommen zuerst auf 24 bis 48 Stunden in die Safraninlösung und werden dann mit Wasser, saurem und absolutem Alkohol weiter behandelt, der Farbstoff jedoch nicht so weit ausgezogen, dass die Präparate ohne weiteres brauchbar sind. Aus dem Alkohol kommen die Schnitte direct auf 3 bis 5 Minuten in die Gentianaviolettlösung und werden wie bei der GRAii'schen Methode in Alkohol flüchtig 4* 52 Referate. XVII, 1. abgespült und der Einwirkung einer Jod -Jodkaliumlösung (Jod 1"0, Jodkalium 2*0, destillirtes Wasser 300) ausgesetzt. Hierin verbleiben die Präparate 1 bis 2 Stunden bis sie vollständig schwarz geworden sind. Es wird durch diese längere Einwirkung erreicht, dass die nachträg- liche Difterenzirung mit absolutem Alkohol bedeutend verlangsamt wird und so die gewünschte Nuance leichter zu treffen ist. Die Dauer der Difterenzirung lässt sich natürlich nur durch einige Hebung feststellen. Im allgemeinen sollen die fertigen Präparate einen vio- letten Ton, der einen leichten Stich ins Bräunliche zeigt, besitzen. Aus Alkohol kommen die Schnitte in Xylol, welches jede weitere Entziehung des Farbstoffes hintanhält. Endlich Einschluss in Xylol- .Cauadabalsam. In den ruhenden Kernen sind die Nucleolen grellroth. das Chromatingerüst blauviolett, in den sich theilenden Kernen sind die Phasen vom Monaster bis zum Dyaster roth, Monospirem und Dispirem dagegen blau. Ausserdem wird der rothe Farbstoff noch ausschliesslich in den degenerireuden Kernen und in den Granula der Mastzellen festgehalten. Die Protoplasmastructuren des Zellleibes und die Fasern der achromatischen Spindel färben sich in der Jod- lösung leicht gelbbraun. Schiefferclecker {Bonn). Claudius , M. , ü e b e r die Anwendung einiger gewöhn- licher Pflanzenfarbstoffe in der mikroskopi- schen Färbungstechnik (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 2, Bd. V, 1899, No. 16, 17, p. 579). Claudius empfiehlt als neues Kernfärbemittel dunkelrothe Pflanzen- farbstoft'e aus Blumen und reifen Früchten. Zur Wirkung dieser Farb- stoffe ist deutlich saure Reaction nothwendig (am besten durch Schwefel- säure oder Salzsäure), während sie in alkalischer Reaction die Farbe verändern (roth in grün, gelb, blau oder braun), diffus und unangenehm färben und bei neutraler Reaction kaum besser sind. Brauchbar ist der schwarzviolette Blumenfarbstoff von gewissen Georginen, von Frucht- farbstoften, das „Brombeer-" und Hollunderbeerroth. Maulbeeren, Kirsclien, schwarze Johannisbeeren und Heidelbeeren^ dürften auch verwendbar sein , wurden aber nicht geprüft. Das Recept zur Be- reitung des Farbstoffes ist folgendes: ..Die Kronblätter und Früchte (die nicht zerdrückt oder gepresst werden dürfen) werden mehrmals mit Spiritus , welcher jedesmal abgegossen und erneuert wird , aus- gekocht; das gesammte Extract wird abgekühlt und dann fiitrirt. ') Blaubeerfarbstoff ist schon früher als Kernfärbeuiittel empfohlen. Ref. XVII, 1. Relerate. 53 Filtrirt man , wälireml die Flüssigkeit noch warm ist , so dauert der Prooess viel länger wegen Ausfüllung in den Poren des Papiers. Jetzt wird eingedickt, bis der Spiritus gänzlich weggejagt ist, d. h. bis die Dämpfe nicht länger anzündbar sind (man löscht leicht, indem man den Deckel auf das Kochgeschirr setzt), aber man darf nicht bis zur Trockenheit eindicken. ^ Die stark concen- trirte Farblösung wird jetzt mit Wasser verdünnt , und man be- kommt eine passende Conceutration, wenn man aus je 100 g Frucht 100 cc Farbe zubereitet." Zur Ansäuerung wurden auf 100 cc Farblösungen 1 cc 25procentige Schwefelsäure und der Haltbarkeit wegen 10 Tropfen Carbolsäure zugesetzt. Schnittfärbung wird erzielt durch einige Minuten Anfärben, dann Entwässern mit absolutem Alkohol, Nelkenöl,^ Xylol, Xylolbalsam; distincte Kernfärbung ; mit HoUunderbeer- und Brombeerroth sind die Kerne schön purpurroth. — Da die neuen Farben sauer sind, lassen sie sich gut mit Pikrinsäure combiniren und in Mischung mit dieser im Gegensatz zum Pikrocarmin (bei welchem pikrinsaures Ammoniak wirkt) mit der von Claudius^ angegebenen „Methylviolett-Pikrinsäure- methode" combiniren. Auf 100 cc schwefelsaures Hollunderbeerroth rechnet Claudius 5 cc wässeriger, (kalt) coucentrirter Pikrinsäure- lösung. — Diese neue CLAUDius'sche combinirte Methode wird folgender- maassen ausgeführt : 1) Färbung mit einer 2promilligen wässerigen Methylviolettlösung (Methylviolett B) w ährend einer bis 2 Minuten , danach Abspülung mit Wasser , welches wieder mit Fliesspapier abgesaugt wird. 2) Färbung mit Pikrinsäure-Hollunderbeerroth 2 Minuten, wegsaugeu der überflüssigen Farbe. 3) Entwässerung durch absoluten Alkohol. 4) Entfärbung durch Nelkenöl, bis sich die rothe Kernfarbe schön rein zeigt. 5) Xylol. 6) Canadabalsam. — Nach der Claudius- schen Methode färbbare Bacterien sind tief indigoblau. Kerne pracht- voll roth , Protoplasma gelb. Die nach Claudius nicht färbbaren Bacterien sind dagegen rothgefärbt (Hollunderbeerroth lässt sich da- her auch für sich allein als „Universalfarbe" benutzen). Bei dünnen Schnitten lässt sicli die Entwässerung mit Alkohol durch das bekannte ^) Es dürfte sich wohl doch besser empfehlen, den Alkohol der Flüssigkeit im Fractionskolben im Wasserbade mit Flammendrahtnetz ab- zudestilliren. Ref. -) Das Nelkenöl sollte wegen seiner verderbhehen Eigenschaften längst verbannt sein. Ref. ") Vgl. Ann. de l'Inst. Fasteur 1897 Mai. 54 Referate. XVII, 1. wiederholte Abdrücken mit Fliesspapier ersetzen. Auf Aiisstricli- (Deckglas-, Objectträger-) Präparaten ist Alkohol zu vermeiden, und kann das Präparat gleich in Nelkenöl untersucht werden. Verf. rühmt den neuen Farben nach, dass sie billig, leicht zu bereiten und (^/^ Jahr Erfahrung) besonders echt und haltbar seien." Cxapleivski {Köln). 2. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. A, Niedere Thiere, Lillie, F. R., n t h e s m a 1 1 e s t p a r t s o f 8 t e n t o r c a p a b 1 e of regeneration; a contribution on tlie limits of divisibility of living matter ( Journ. of Morphol. vol. XII, 1896, p. 239—249). Die Theilstücke wurden durch Schütteln gewonnen, bei Stentor coeruleus genügt ein fünfmaliges kräftiges Schütteln, bei Stentor poly- morphus ein 20maliges. In zweifelhaften Fällen wird zum Nachweis von Kernstücken fixirt und gefärbt. Verf. empfiehlt zu letzterem Zweck Schneider's Essigsäure-Carmin. E. Schochel {Neapel). Wilson, E. B., A r c h o p 1 a s m , c e n t r o s o m e a n d c h r o m a t i n in the sea-urchin des Formols in Methämoglobin um- gewandelt werden , und entsprechende Krystalle können entstehen. Es gelang Verf. bisher nicht, durch starke Abkühlung in mensch- lichen Leberzellen Hämoglobinkrystalle auszuscheiden. — Li den Zellen eines Melanosarkoms , das mit der linken Niere fest ver- wachsen und wahrscheinlich aus einer Nebenniere hervorgegangen war, fand Verf. nach Härtuug in 2procentigem Formol an Gefrier- schnitten ebenfalls in zahlreichen Zellen braunes, nadeiförmig krystal- linisches Pigment, welches in Vacuolen lag. Das Bild entsprach voll- kommen dem oben von der Leber beschriebenen. — Verf. hat dann weiter Hunden in die Halsvene MERCK'sches Hämoglobin iujicirt. 4 Stunden nach erfolgter Hämoglobininjection wurden die Thiere getödtet. Leberstückcheu wurden unmittelbar nach dem Tode des Hundes in 2procentiger FormoUösuug aufbewahrt. Die Gefrierschnitte wurden nach van Gieson oder mit Hämotoxyliu und Eosin gefärbt. In den Leberzellen fanden sich in den Kernen derselben Erythrocyten oder Hämoglobinkrystalle. Ausser diesem Befunde zeigten sich in den Kernen der Leberzellen allein oder auch nur im Cytoplasma der Leberzelle, sowie in beiden zugleich, verschieden grosse, scharf um- grenzte, rundliche Häufchen dunkelbraunen bis schwarzen Pigments. Verf. hält es für zweifellos , dass diese Pigmentablagerung mit der Hämoglobininjection in unmittelbarem Zusammenhang steht. Auch hier würde das Formol gleichsam als ein mikrochemisches Reagenz für das in den Zellen vorhandene und durch dieselben entsprechend modificirte Hämoglobin anzusehen sein. — In der letzten Arbeit hebt Verf. noch einmal die Vortheile des Formols für bestimmte Zwecke hervor. Es conservirt gut Gallenfarbstoffe , es ermöglicht während und nach der Härtung das Hervorrufen von Krystallisations- phänomenen in den Zellen; es hindert nicht das Sichtbarmachen des Fettes in den Zellen mittels Osmiumsäure. Beachten muss man jedoch dabei , dass unter dem Einfluss des Formols Veränderungen des zur Zeit in den Zellen vorhandenen Hämoglobins zu Stande kommen, welche bei Beurtheilung von Pigmentablagerungen, ob dieselben in- travital oder postmortal, während der Formoleinwirkung entstanden sind, Vorsicht erfordern. Verf. erwähnt dabei, dass er ganz dieselben amorphen und krystallinischen Pigmentablagerungen in den Zellen eines Niereukarcinoms gefunden habe. Schiefferdecker (Bo'mi). 72 Referate. XVII, 1. Browicz, T., Ueber intravasculä re Zelleu in den Bliit- capillaren der Leberacini (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LV, 1900, p. 420—426). Verf. empfiehlt zur Fixirung der Leber angeleg-entlichst 2pro- centiges Formalin. Untersucht wurden ausschliesslich Gefrierschnitte, die mittels Hämatoxylin und Eosin oder mittels van Gieson's Me- thode gefärbt wurden. E. Sclioebel (Neapel).. ßaiivier , L. , Histologie de 1 a p e a u (Arch. d'Anat. microsc. t. III, fasc. 1, 1899, p. 1—10 av. 1 piche.). Als beste Methode, die Vermehrung der Zellen in den untersten Schichten der Epidermis zu beobachten, beschreibt Verf. die folgende: Man entfernt durch einen Tangentialschnitt die Epidermis der Fuss- sohle des Meerschweincliens, legt sie für eine Stunde in FLEMMiNo'sche Flüssigkeit, überträgt sie in Alkohol und macht 12 Stunden später dünne Schnitte senkrecht zur Oberfläche, die man mit Purpurin oder mit Hämatoxylin färbt. — In dem Stratum fllameutosum flnden sich in den Epidermiszellen Fibrillen. Das Wasser hat keinen Eiufluss auf diese ; sie widerstehen auch dem Kochen, unter der Einwirkung von Säuren und Alkalien quellen sie, mit Hämatoxylin färben sie sich violett , mit Carmin roth , mit Thiouin bleiben sie entweder un- gefärbt oder sie nehmen eine blassgrüne Färbung an, während das Zellprotoplasma eine intensiv violette Färbung erhält. Diese Epi- dermisfibrillen sind doppelbrechend. Man kann auf diese Weise bei gekreuzten Nicols das Stratum filamentosum scharf von dem Stratum germinativum trennen. — Das Eleidin wird bekanntlich durch pikrocarminsaures Ammoniak und Hämatoxylin gefärbt, Thionin nach FLEMMiNG'scher Flüssigkeit färbt es violett, doch ist diese Färbung etwas unsicher. Tritt sie ein , so ist sie sehr deutlich. Verf. hat kürzlich eine neue Methode gefunden, um das Stratum granulosum und das Eleidin darzustellen. Man härtet in Alkohol, färbt in Pikro- carmin, wäscht aus und behandelt mit Kalkwasser. Die Zelleu quellen, und die Eleidinkörner, welche nicht verändert werden, treten dann sehr deutlich hervor. — Behandelt man die Meerschweinchenepidermis mit Osmiumsäure (einprocentig, eine Stunde), so färben sich be- kanntlich die oberflächliche und die tiefe Schicht des Stratum cor- neum schwarz. Bei längerer Osmiumeinwirkung würde sich das ganze Stratum corneum schwarz färben. Unter dem Stratum corneum liegt das Stratum lucidum, welches nach Ranvier doppelt ist: Man färbt Schnitte der Epidermis , welche eine Stunde in Osmiumsäure und XVII, 1. Referate. 73 24 Stunden in Alkohol gelegen hat, mit Pikroeannin und nntersucht m Gl3a'erin. Das Eleidin ist hier nicht gefärbt, da es mit Osmium imprägnirt ist. Das wahre Stratum lucidum färbt sich weder mit Carmin noch mit Osmiumsäure, aber unter ihm und unmittelbar ober- halb des Stratum granulosum zeigt sich eine lebhaft roth gefärbte Schicht, welche sehr dünn ist und nur aus 2 bis 3 Zelllagen besteht. Diese Schicht (nach Ranvier Stratum intermedium), welche sich so leb- haft mit Carmin färbt, färbt sich mit Purpurin gar nicht. Nach Alkohol- härtung wird sie auch von Thioniu nicht gefärbt, während das Stratum corneum grün und das Stratum filameutosum violett wird. Um das Stra- tum intermedium gut zu erkennen, muss man Schnitte nach Flemmimg- scher Flüssigkeit untersuchen entweder ohne jede Färbung oder noch besser nach Purpurinfärbung : Alle Epidermisschichten sind rosa mit Ausnahme des Stratum intermedium, das ungefärbt bleibt. Unter dem Einfluss der FLEMMiNG'schen Flüssigkeit, welche ja Essigsäure enthält, quellen die Zellen des Stratum intermedium leicht, und die fibrilläre Structur ihrer Aussenparthie wird deutlich. Das Stratum corneum hat sehr charakteristische Reactionen. Es ist stark doppelbrechend, färbt sich mit Osmiumsäure schwarz und mit Thionin intensiv grün. Mit Safranin wird es lebhaft orangeroth, während in den anderen Epidermisschichten nur die Nucleoli und die Chromatinfäden der in Theilung befindlichen Zellen gefärbt werden. Nach Osmiumeinwirkung difFerenziren sich die oberflächlichen Schichten des Stratum corneum von den tiefen: sie färben sich schwächer, unter Umständen sogar gar nicht. Schiefferdecker {Bonn). Merk , L., Experimentelles zur Biologie der mensch- lichen Haut. 1. Mittheilung: Beziehungen der Hornschicht zum Gewebesafte (Sitzber, d, k. Acad. d. Wiss., Wien. Mathem.-naturwiss. Kl. Bd. CVIII, H. 4—7, Abth. 3, 1899, p. 335 — 380 m. 3 Tfln.). Verf. bediente sich bei seiner Arbeit zum Nachweis der elasti- schen Fasern einer Methode, die von der herkömmlichen etwas ab- weicht, ihm aber in sehr bequemer Weise so schöne und sichere Resultate lieferte, dass er sie kurz mittheilt. Man bereitet sich die UxNA-TAENZER'sche Lösuug : Orcein 0*5 g Alkohol, absolut 40 cc Wasser, destillirt 20 „ Salpetersäure 20 Tropfen. 74 Referate. XVII, 1. Von dieser Stammlösung thut mau 8 bis 10 Tropfen in etwa 10 cc eines Sprocentigen Salzsäurealkoliols. Hierin verbleiben die Schnitte 24 Stunden (nach Härtung in Alkohol oder in ZENKER'scher Flüssig- keit). Wäscht man nun die Schnitte in destillirtem Wasser ab, so kann man in Glycerin oder nach entsprechender Behandlung in Harz untersuchen, oder man kann die Schnitte mit Methylenblau, Vesuvin, Hämatoxylin, kurz auf verschiedene Weise gegenfärbeu. Die elasti- schen Elemente bleiben gut gefärbt. Schieff erdecke?' (Bonn). Foä, C, lieber die feinere Structur der geschichteten Pflasterepithelien (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LV, 1900, p. 431—441 m. 1 Tfl.). Die Untersuchungen wurden an der Mundschleimhaut, der Haut, dem Hufe , den Magenepithelien von verschieden alten Rinderfiiten und vom ausgewachsenen Rind ausgeführt. Verf. bediente sich der gewöhnlich gebräuchlichen Macerations-, Fixirungs- und Färbemittel. Die besten Resultate ergab Material, das in Herrmann' scher Flüssig- keit fixirt und dann mit einer lOprocentigen Tauuinlösung behandelt war (KoLOSsow). Zur Ditferenziruug der glykogenen Substanz diente Jodtinctur , die EHRLicn'sche Gentianaviolettlösuug mit nachfolgender Entfärbung in Bergamottöl und Alkohol (Bizzozero), wobei das Gly- kogen einen von der übrigen Zelle verschiedenen violetten Ton an- nimmt. Auch mit der van GiESON'schen Methode lässt sich das Glykogen darstellen (hellgelbe Färbung). E. Schoehel {Neapel). Branca, A., Recherches sur la cicatrisation epithe- liale (epitheliums cylindriques stratifies). La trachee et sa cicatrisation (Journ, de TAnat. et de la Physiol. t. XXXV, 1899, no. 6, p. 764—807). Es wurden Hunde und Meerschweinchen, hauptsächlich die letz- teren, zu den Versuchen verwendet. Es wurde unter aseptischen Vorsichtsmaassregeln eine Tracheotomie ausgeführt. Die Thiere wur- den später zu verschiedenen Zeiten durch Chloroform getödtet ; die herausgenommene Trachea wurde zuerst im hinteren Theile auf- geschnitten und aufgespannt. Doch ergab das Zerrungserscheinungen in der Narbe. Später wurde daher die Trachea nur an einem Faden in der FixirungsÜüssigkeit aufgehängt und durch ein mittels eines zweiten Fadens an dem unteren Ende angebrachtes Gewicht in der nöthigen Spannung erhalten. Zur Fixirung wurden verwendet : Subli- mat in concentrirter Lösung, rein oder mit Zusatz von Essigsäure, XVII, 1. Referate. 75 Zenker'scIic Flüssigkeit, FLEMMiNo'sche Flüssigkeit und folgende Mischung. Man giesst eine in der Wärme gesättigte Sublimatlösung auf krystallisirte Pikrinsäure im Ueberscliuss. Zu 300 cc der so erhaltenen Lösung setzt man kurz vor dem Gebrauch 50 cc Formol und 5 cc krystallinische Essigsäure. Die Präparate verbleiben in dieser Lösung 24 Stunden, dann Abwaschen in fliessendem Wasser, Härten in steigendem Alkohol. Fixirt man Stücke von verhältniss- mässig bedeutender Grösse in einer solchen Mischung , so ist es praktisch, sie der Reihe nach in alkoholische Lösungen von Jod und von Lithiumcarbonat zu legen. Das Jod löst die Sublimatkrystalle, das Lithiumcarbonat erleichtert das Ausziehen der Pikrinsäure. Dieses Auswaschen in Alkohol ist indessen überflüssig, wenn man nur ganz kleine Gewebsstückchen fixirt. Verf. bemerkt, dass die letztgenannte Mischung ihm sehr schöne Präparate von einer Anzahl zarter Orgaue geliefert hat. Eine einfache Hämateinfärbung lässt die chromophilen Körperchen der Gangiienzelle hervortreten, die Eigenthümlichkeiteu der Nebenuierenzelleu etc. Eingebettet wurde stets in Paraffin. Die Schnitte wurden zunächst auf dem erwärmten Objectträger nach der Methode von Duval^ ausgebreitet und dann mit Eiweisswasser auf- geklebt. Die Färbungsmittel waren je nach der Fixirungsflüssigkeit verschieden. Die Schnitte, welche aus Sublimatlösung kamen, wur- den in Hämatein, Eosin und Orange gefärbt, die Schnitte aus Flem- •vnNG'scher Lösung mit Anilin -Safranin und Lichtgrün, mit Rubin S und Pikrinsäure, mit Gentianaviolett nach Bizzozero. Die unter dem Epithel befindliche Basalmembran färbt sich gelbbraun mit Aurantia, rosa mit Hämatoxylin - Eosin , helUila bei längerer Anwendung einer schwachen Hämatoxyliulösung. Sckiefferdecker {Bonn). Byrnes, E. F., Ex perimental studiesonthedevelopment of limb-muscles in Amphibia (Journ of. Mophol. vol. XIV, 1898, p. 105—140 w. 3 pltes.). Die Fixirung geschah in einer gesättigten Lösung von Subimat mit 5 Procent Essigsäurezusatz. Die Schnitte wurden mit Dela- field's Hämatoxylin gefärbt und dann mit Pikrinsäure-Alkohol ge- waschen, wobei die Muskelfasern eine sehr deutliche Differenzirung annehmen. E. Schoebel (Neapel). ^) DuvAL, M., Le placenta des rongeurs (Journ. d'Anat. 1892, p. 281). 76 Referate. XVII, 1. Riclier ii. Ellenbeck, Beiträge zur K e n n t n i s s des Muskels nach der Durch sclmeidung seines Nerven ( Vir- CHOw's Arch. Bd. CLVni, H. 2, 1899, p. 199—253). Die Yerff. haben die schon mehrfach ausgeführten Unter- suchungen über die Veränderungen des Muskels nach Durchschnei- dung seines Nerven wieder aufgenommen. Die Versuche wurden an Kaninchen angestellt, indem der N. ischiadicus gleich nach seinem Austritt aus dem Becken auf die Länge von 1 cm resecirt wurde. Eine Vereinigung der Enden wurde bei der Section nie beobachtet. Die dem oben getödteten Thier entnommenen Mm. gastrocnemius, plantaris und soleus wurden sofort gewogen, ebenso die der ge- sunden Seite, und Stücke aus allen Theilen in Formol und in Alt- MAXN'scher Flüssigkeit fixirt. Die Einbettung geschah in Paraffin. Zur Färbung wurde für die in Formol fixirten Präparate Hämalaun und die van GiEsoN'sche Pikrinsäure-Säurefuchsinlösung benutzt ; für die mit ALTMANN'scher Lösung zum Nachweis des Fetts behandelten Präparate eine kurze Hämalaunfärbung. Die Verff. heben hervor, dass es sehr schwer oder unmöglich ist, sich über die Mengen- verhältnisse des Bindegewebes in den Muskeln zu unterrichten, wenn man ein in der gewöhnlichen Weise behandeltes Präparat vor sich hat, auch nach der schärfsten Färbung mit der van GiESON'schen Lösung. Die Muskelfasern liegen zu eng an einander, und z. B. zusammengefallene Capillaren täuschen nur zu leicht Bindegewebe vor. Die ersten Stadien der Atrophie und Quellung lassen das Bindegewebe zwar in der vollendetsten Weise schon zu einer Zeit hervortreten, in der es noch keine nennenswerthe Veränderung er- fahren hat 5 aber es ist trotzdem wünscheuswerth , um ganz sicher zu gehen, eine Methode zu besitzen, mit der es am unveränderten, dem eben getödteten Thier entnommenen Muskel gelingt, das Binde- gewebe klarzulegen und durch Färbung übersichtlich darzustellen. Es ist dies den Verff. gelungen durch Aufbewahren des Muskels für 24 Stunden oder länger in O"65procentiger Kochsalzlösung. Der Muskel vergrösserte sich darin sehr stark. Im nachträglich ent- wässerten und eingebetteten Präparat liegen seine Fasern in sehr weiten Abständen von einander. Die Bindegewebsfasern und Capillaren sind ohne Schwierigkeit zu übersehen. Es ergiebt sich dabei auch ein guter Einblick in den ausserordentlichen Reichthum des Muskels an Capillaren, den man dann ebensogut beurtheilen kann wie am Injectionspräparat. o 7 • ^ 77 /t-. n Schiefferdecker {Bonn). XVII, 1. Referate. 77 Negri, A., Teber die Persistenz des Kernes in den rothen Blutkörperchen erwachsener Silugethiere (Anat. Anz. Bd. XVI, 1899, No. 2, p. 33—38 m. 9 Figg.). Verf. hat die Versuche von Petrone wiederholt, welcher behauptet hatte, dass in den Blutkörperchen der erwachsenen Säugethiere sich noch ein Kern befinde. In der Methodik ist Verf. Petrone gefolgt. Die besten Picsultate erliielt er mit dem mit Osmiumsäure 1 : 4000 extrahirten und sodann in Pikrinsäure (ebenfalls 1 : 4000) gebrachten und mit dem von Petrone empfohlenen ameisensauren Carmin gefärbten Blute. Die Blutkörperchen besonders des Menschen und des Kanin- chens waren sehr geeignet dafür. Verf. konnte das von Petrone beobachtete und als Kern gedeutete Gebilde klar sehen. Die mit Ameisensäure versetzten Farben, besonders das ameisensaure Carmin, färbten dasselbe rasch und electiv. Verf. hat dann diesen sogenannten Kern weiter bei Kaninchenembryonen untersucht. Ein vorzügliches Material lieferten die gegen die Mitte der intrauterinen Entwicklung entnommenen Thiere. Mit der oben angegebeneu Methode konnte auch hier das Kerngebilde gesehen werden, daneben aber noch eine andere, dicht neben dem Kern befindliehe Bildung. Der Unterschied zwischen diesen beiden Bildungen tritt mit besonderer Deutlichkeit vermittels einer Contrastfärbung hervor, so z. B. wenn man zuerst das fragliche Gebilde mit ameisensaurem Carmin färbt und sodann den Kern durch eine Hämatoxylinfarbe hervortreten lässt. Von den so erhaltenen Bildern giebt Verf. photographische Ansichten. Mit dem Blute der Eier legenden Wirbelthiere ist es Verf. bisher niemals gelungen, etwas dem Gebilde Petrone's ähnliches zu sehen. Aus seinen Resultaten zieht übrigens Verf. den Schluss, dass das Gebilde von Petrone nicht als der Kern der Blutkörperchen anzusehen ist. Schiefferdecker {Bonn). Ascoli, M., U eher das VorkommenkernhaltigerErythro- cyten im normalen Blute (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LV, 1900, p. 426—430). Die Operationstechnik und Untersuchsmethode war folgende: Nach Abtragung des Wadenbeinköpfchens wurde die Vena efferens tibiae freigelegt, und ohne auch nur den leisesten Druck auf den Knochen auszuüben , durch einen kleinen Einschnitt in die Venen- wandung gewonnenes Blut nach der EHRLicn'schen Trockenmethode untersucht: die Präparate wurden zweistündig fixirt und mit Hämat- oxylin-Eosin gefärbt. E. Schoebel (Neapel). 78 Referate. XVII, 1. Pappeilheim, A., Vergleichende Untersuchungen über die elementare Zusammensetzung des rothen Knochenmarks einiger Säugethiere (Nebst Be- merkungen zur Frage des gegenseitigen Ver- hältnisses der verschiedenen Leu kocyten for- men zu einander) (Virchow's Arch. Bd. CLVII, 1899, p. 19—76). Verf. hat sich mit der Untersuchung der Brutstätten rother Blutkörperchen, speciell des rothen Knochenmarks beschäftigt. Die verschiedenen Functionszustände des Knochenmarks sind noch zu wenig erforscht und seine Beziehungen zu constitutionellen Krank- heiten noch zu wenig festgestellt. Das rothe Knochenmark gelangte zur Untersuchung: 1) in seiner gewöhnlichen erythroblastischen Thätigkeit, aber bei einem Thier, welches auf so niedriger phylo- genetischer Stufe steht (Marsupialier) , dass man erwarten durfte, möglichst primitive embryoide Zustände vorzufinden. 2) im Zustande physiologisch vermehrter Function (Embryo, neugeborenes Thier, 12 Tage altes Thier). 3) im Zustande höchster künstlicher Reizung (nach Aderlass). Es wurde also untersucht das Rippenmark einer ausgewachsenen Beutelratte (Didelphys virginiana), das Femur- Diaphj^senmark bei 12 Tage alten, neugeborenen und embryonalen (Ende der dritten und Anfang der vierten Schwangerschaftswoche) Kaninchen; schliesslich das Rippenmark vor und nach Aderlass. Resection einer Rippe bei einer 4 Wochen alten, einer grossen Doggeurasse angehörigen Hündin). Betreffs der sehr ausführlichen technischen Angaben muss auf das Original verwiesen werden. Ich hebe nur die folgenden Sätze, zu denen Verf. gelangt, noch besonders hervor: 1) Eine der besten Fixationen für Blutzellen bei Deckglas- präparaten ist die RuBiNSTEiN'sche. ^ 2) Neben Hämatoxylin hat auch das Myrtillin seine besonderen Vorzüge. 3) Ausser den bekannten, gewöhnlichen Färbungen von Blutpräparaten THämatoxylin-Eosin, Methylenblau-Eosin, Triacid) ist besonders die Methylgrün-Pyronin- färbung als Reagenz auf basophile, granulationslose Zellen anzuwenden. Scliiefferdecker (Bonn). Arnold, J., Weitere Beobachtungen über „vitale" Granulafärbung (Anat. Anz. Bd. XVI, 1899, No. 21, 22, p. 568—572). 1) Diese Zeitsehr. Bd. XIV, 1897, p. 45G. XVII, 1. Referate. 79 In einer früheren Mittlieihuig hat Verf. eine Methode besehrieben, mittels welcher an lebenden und überlebenden Leukocyten bei der Zufuhr von Farbstoffen, besonders von Neutralroth und Methylenblau alle Phasen der Granulafärbung wahrgenommen werden können. Es gelang auf diesem Wege, den Nachweis zu liefern, dass die Granula wirkliehe Zellbestandtheile sind. Es erschien nun weiter wünschens- werth, auch an anderen lebenden und überlebenden Zellen solche Versuche anzustellen. Zu diesem Behufe wurden die Zunge, die Schwimmhaut und das Mesenterium des lebenden Frosches in der Jjekannten Weise vorgelagert (hierzu ist die Verwendung des TnoMA'schen Objectträgers [Mechaniker Jung, Heidelberg] zu empfehlen) und mit Farbstoff in Substanz oder in Lösung in Berührung gebracht. Bei anderen Versuchen wurde der Farbstoff in Substanz in den Lymph- sack eingeführt, und es wurden die genannten Organtheile einer Beobachtung im lebenden Zustande unterzogen. Eine wesentliche Bedingung für den Erfolg solcher Versuche ist die gute Erhaltung der Circulation. Es kamen ausschliesslich Neutralroth und Methylen- blau zur Verwendung, von dem ersteren eine gesättigte, von dem letzteren eine 0"5- bis 2 procentige Lösung in 0*75 procentiger Koch- salzlösung. Wie Verf. hervorhebt, ist die Ausführung dieser Versuche so einfach, ihr Ergebniss, namentlich in der Froschzunge so sicher und lehrreich, dass er die Wiederholung derselben nicht nur zur eigenen Belehrung, sondern auch zu Demonstrationszwecken auf das Angelegentlichste empfehlen kann. Die Vorgänge am überlebenden Object verfolgte Verf. in der Weise, dass er aus den lebenden Geweben kleine Stückchen ausschnitt, in die erwähnten Farbstofi'- lösungen einlegte und nach verschieden langer Zeit einer Beobachtung unterzog. Hat man die Froschzunge vorgelagert und mit einem möglichst kleinen Korn von Neutralroth bestäubt, so tritt an vielen Stellen, insbesondere denjenigen der Papillen zunächst eine diffuse rothe Färbung ein; die Bewegung der Cilien, sowie die Circulation bleiben dabei sehr lebhaft; viele Zellen sind nicht gefärbt. Nach einigen Minuten kommen sowohl an den gefärbten wie an den unge- färbten Zellen feine rothe Granula zum Vorschein und bei Anwendung stärkerer Vergrösserung kann man wahrnehmen, wie Körner, welche bei Beginn des Versuches nicht gefärbt waren, allmählich immer intensiver sich tingiren. Mit der Zeit nimmt die Zahl der rothen Granula zu. Manche Zellen sind mehr oder weniger mit solchen erfüllt. Auch der Inhalt der Schleimzellen färbt sich mit Neulralroth intensiv. Ebenso treten in den Leukocyten , den Mastzellen und 80 Referate. XVU, 1. eiuzelnen Bindegewebszelleu rotlie Granula auf. Isolirte Zellen von Stückchen der Froschzunge, die abgeschnitten sind, sind sehr geeignet, um sich über die gegenseitige Lagerung der gefärbten Granula zu unterrichten. Methylenblau ergab ganz ähnliche Resultate. Die Zahl der sich färbenden Granula schien hier geringer zu sein, die der Mastzellen grösser. Ausserdem färben sich die Nerven. In manchen Papillen kamen ganz feine Nervennetze zum Vorschein. Gefärbte Granula kommen auch im lebenden Mesenterium, nachdem die Farb- stoffe einige Zeit eingewirkt haben , in den Leukocyten und Binde- gewebszellen , namentlich auch in der Umgebung der Lymph- und Blutgefässe zum Vorschein. Bei Anwendung von Methylenltlau ent- stehen au solchen Stellen Zeichnungen von gefärbten Saftbahnen, weil deren Zellen selbst in ihren Ausläufern gefärbte Granula führen. Sckiefferdecker (Bonn). Arnold, J., Ueber Granulafärbung lebender und über- lebender Leukocyten (V^irchow's Arch. CLVII, H. 3, 1899, p. 424—437). Wie Verf. hervorhebt , ist die Beantwortung der Frage beson- ders schwierig, ob die in den Zellen zu beobachtenden Körner als präformirte Structurbestandtheile der Zellen (Plasmosomeu) oder ledig- lich als körnige Ausscheidungsproducte (Granula) aufgefasst werden müssen. Es wurden zu diesem Zwecke Fütterungsversuche mit Farb- stoffen und anderen Substanzen (Eisen, Fett etc.) vorgenommen, von denen hier zunächst über die mit Farbstoffen au lebenden und über- lebenden leukocytären Wanderzellen berichtet wird. Technik : Mög- lichst dünne HoUunderplättchen (zu beziehen durch Jung, Mechaniker, Heidelberg) wurden in den Rückenlymphsack von Fröschen ein- geschoben und nach 6, 12 bis 48 Stunden entfernt. Will man den Vorgang der P'ärbung unmittelbar beobachten , so hängt man die Plättchen an einem Deckglase auf, bedeckt sie mit einem kleinen Korn des Farbstoffes in Substanz oder mit einem Tröpfchen der Farb- stoftlösung und schliesst die Kammer mit Vaseline ab. Bei anderen Versuchen hat Verf. die Plättchen vor der Einführung in den Lymph- sack mit Farbstoffkörnchen bestäubt. Vou den verschiedenen Farb- stoffen, welche in Anwendung kamen, seien hier Säurefuchsiu, Rubin, Bordeaux, Phloxinroth, Eosin, Nigrosin, sowie Jodgrün, Methylgrün, Safranin, Bismarckbraun, Cyanin, Neutralroth, Methjdenblau, ein Ge- misch beider und Biondi's Dreifarbengemisch genannt. Sehr inter- essante und constante Ergebnisse wurden mit der Fütterung mit XVII, 1. Referate. 81 Xeiitralrotli und Methylenblau , resp. durch ein Gemenge beider er- halten. Bezüglich der anderen Farbstoffe ist zu bemerken, dass Eosin eine manchmal ziemlich rasch eintretende, aber wieder verschwindende Färbung- der eosinophilen Granula bedingt. Bei längerem Verweilen solcher Plättclien im Lymphsack kommen in vielen Leukocyteu ganz feine rotbe Granula zum Vorschein , ebenso bei Fuchsin. Durch BiONDi's Dreifarbengemisch werden feine Granula violett gefärbt. Frühere Versuche hatten gelehrt, dass nach 6- bis 24stündigem Ver- weilen der Plättchen in dem Lymphsacke die Maschen mit zahlreichen Zellen erfüllt sind, welche in Anbetracht der kurzen Frist als häma- togene Wauderzellen angesehen werden müssen. Die Mehrzahl der Zellen gehört zu den Formen mit polymorphen Kernen. Neben diesen kommen aber auch nucleäre Zellen von wechselnder Grösse vor. Füttert man solche Plättchen in der oben angegebenen Weise mit Neutralroth in Substanz oder in Lösung, so treten sehr bald in den Zellen gefärbte Granula auf. Bei flüchtiger Beobachtung erhält man leicht den Eindruck, als ob die Granula erst mit beginnender Ein- wirkung des Farbstoffes auftreten. Eine genauere Untersuchung der Plättchen lehrt aber, dass dieselben schon vor dem Farbstoffzusatz nachweisbar sind und als kleinere und grössere Körner, sowie hyaline Tröpfchen sich darstellen. Hervorzuheben ist, dass, wenn man ge- trocknete Abklatschpräparate von Plättchen anfertigt, bei welchen eine vitale Fütterung der Zellen mit Neutralroth nicht stattgefunden hatte, eine nachträgliche Färbung der Granula mit diesem Farbstoffe nicht zu erreichen war. Ebenso wenig konnte man die Granula an Präparaten nachweisen, welche in MIiller - Osmium oder Formol ge- härtet und nach der ALXMANJsr'schen Methode oder mit jMethylenblau, Triacid etc. gefärbt wurden. Die eosinophilen Granula färben sich bei der vitalen Fütterung mit Neutralroth sehr frühzeitig, aber ver- schieden intensiv. Manchmal verschwindet die rothe Färbung wieder. Eine solche Entfärbung kommt übrigens auch bei anderen Granula vor. Anfangs ist die Unterscheidung der eosinophilen Granula von den anderen leicht, später kann auch bei diesen die Grösse, Zahl und Anordnung derjenigen bei den ersteren ähnlich werden. Die Kerne der Leukocyteu färben sich gewöhnlich erst nach längerer Zeit, wenn die amöboiden Bewegungen aufgehört haben oder schwächer werden. Einige Male hat Verf. eine frühzeitige Färbung der Kerne beobachtet, welche mehr gleichzeitig mit dem Auftreten perinucleärer Granula wieder verschwand. Ob zwischen diesen Vorgängen irgend eine causaler Zusammenhang besteht oder nicht, will Verf. nicht ent- Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 1. 6 82 Referate. XVII, 1. scheiden. Zu erwähnen ist, dass man Zellen mit gefärbten Granula auch in Milz und Leber antrift't, wenn die Hollunderplättchen vor der Einführung- in den Lymphsack mit etwas grösseren Farbstoif- mengen bestäubt worden waren. Um sich über die Lage von aussen aufgenommener körniger Substanzen zu den Granula zu unterrichten, versenkte Verf. mit Tusche imprägnirte Hollunderplättchen in den Lymphsack und setzte nach Entfernung derselben aus dem letzteren Neutralroth hinzu. Zahlreiche Zellen enthalten dann Tuschekörner und rothe Granula zugleich. Hieraus konnte der Schluss gezogen werden, dass Zellen, welche nach den Typus der Phagocytose Tusche- körner aufgenommen hatten, sich auch noch mit Neutralroth färbten. Einen Schluss hinsichtlich des Einflusses der Fütterung der Zellen mit Neutralroth auf ihre phagocytären Eigenschaften Hess sich dar- aus nicht ziehen. Verf. änderte die Versuche deshalb in der Weise ab , dass er die Granula erst färbte und die Plättchen dann mit Tuscheaufreibung beschickte. Auch unter diesen Bedingungen er- folgte noch eine Aufnahme von Tuschekörnern seitens der Zellen. Entsprechende Versuche mit Methylenblau in Substanz und Lösung ergaben ähnliche Resultate. Auch bei ihnen fanden sich zahlreiche Zellen , welche kleinere und grössere verschieden intensiv blau ge- färbte Granula in wechselnder Menge und Vertheilung enthielten. Die Färbung trat etwas später ein als bei Neutralroth 5 amöboide Bewegungen konnten auch an solchen Zellen beobachtet werden. Später erschien auch hier eine mehr oder weniger deutliche Kern- färbung, noch später eine diffuse Färbung des Zellleibes. Beschickt man Hollunderplättchen, deren Maschen Wanderzellen enthalten, mit einem Gemenge von Neutralroth imd Methylenblau in Substanz, so kommen in den einen Zellen rothe, in den anderen blaue, in wieder anderen rothe und blaue Granula zum Vorschein. Hat man in den Lymphsack Methylenblau in Substanz eingeführt, so ergeben sich bezüglich Leber und Milz dieselben Befunde wie bei Neutralrothver- suchen. Im circulirenden Blut lassen sich blaue Granula in rothen und weissen Blutkörperchen nachweisen. Die eosinophilen Zellen führen neben ungefärbten Granula intensiv blau gefärbte Körner von derselben Grösse und Form wie die ersteren. Ueber Versuche bei Kaninchen soll später berichtet werden. Die Ergebnisse waren ähnliche wie die bisherigen. Unter die Rückenhaut wurden Hollunderplättchen eingeschoben und nach 6 bis 24 Stunden Avieder entfernt. Die Fütterung mit Neutralroth oder Methylenblau geschah theils nach der Herausnahme, theils während ihres V^erweilens im Unterhautzellgewebe XVII, 1. Referate. 83 in der oben beschriebenen Weise. In solchen Plättchen, die zahlreiche Zellen mit acidophiler Grannlirung enthalten, färben sich diese acido- philen Granula mit Neutralroth bald schwach, bald intensiv roth. Ausserdem finden sich aber noch gefärbte Granula, welche kleiner, andere, welche grösser sind als die acidophilen, neben ungefärbten. In Folge der grossen Neigung dieser Zellen zum Zerfall isoliren sich die Granula sehr leicht. Ganz ähnliche Bilder ergaben sich bei der Anwendung von Methylenblau. Bei dieser war der Befund von gefärbten und ungefärbten freien Körnern auffallend, welche aus einem Zerfall der Zelle hervorgegangen sein mussten. Später tritt eine Färbung der Kerne und eine diftuse Blaufärbung des Zellleibes ein, während die Granula bei eintretendem Absterben sich zu entfärben scheinen. Die Färbung der Granula hört viel früher auf als beim Frosch. — Die Frage, ob lebende Zellen sich färben können, ist bisher meist dahin beantwortet worden, dass eine Färbung während des Lebens nicht eintritt, vielmehr das Eintreten einer Färbung den Beginn des Absterbens anzeigt. Bei den vorliegenden Versuchen mit Neutralralroth, Methylenblau und Methylgrün zeigten die lebhaft sich bewegenden Zellen gewöhnlich keinerlei diftuse Färbung des Kerns oder Cytoplasmas. Ob alle Zellen, deren Kerne oder Cytoplasma diftus gefärbt erschienen, als abgestorben angesehen werden mussten, konnte Verf. nicht entscheiden. Die Färbung der Granula scheint sicher eine vitale Eigenschaft zu sein. ScJiiefferdeclcer {Bomi). Morrill, A. D., The Innervation o f t h e a u d i t o r y e p i t h e - lium of Mustelus Canis, De Kay (Journ. of Morphol. vol. XIV, 1897, p. 61—82 w. 2 pltes.). Die Embryonen wurden mit der raschen GoLGi'schen Methode behandelt, die Gewebe des erwachsenen Thieres mit der Ehrlich- schen vitalen Methylenblau-Methode. Der Ausfall der letzteren war anfangs äusserst verschieden. Es stellte sich aber heraus, dass nach Decapitation vollständig gesunder Fische und bei Beobachtung einiger Vorsichtsmaassregelu gleichmässig gute Resultate zu erzielen waren. Die Ampullen wurden unmittelbar nach der Tödtung des Thieres herauspräparirt und in physiologische Kochsalzlösung gelegt und letzterer soviel einer halbprocentigen Methylenblaulösung in Koch- salzlösung zugesetzt, dass das Ganze eine tiefdunkelblaue, aber immer noch durchsichtige Farbe hat. Durch die Färbflüssigkeit wurde ge- legentlich Luft durchgeblasen und ihre Temperatur auf 26 bis 32*^ C. gehalten. Die besten Resultate wurden an heissen, trockenen August- 6* 84 Referate. XVH, 1. tagen gewonnen. Nach einer bis einer und einer viertel Stunde wurden die Objecte aus der Farblosung genommen , mit physio- logischer Kochsalzlösung abgespült und dann für 10 bis 15 Minuten der Luft ausgesetzt, wobei durch Befeuchten mit physiologischer Salz- lösung dafür gesorgt wird, dass die Präparate nicht vertrocknen. Zur Fixiruug der Färbung wurde gesättigte Lösung von Ammoniumpikrat in destillirtem Wasser gebraucht, der ein Drittel Normalsalzlösung und auf 10 cc 2 bis 3 Tropfen einprocentige Osmiumsäure zugesetzt sind. Nach ungefähr anderthalbstündiger Einwirkung wurden die Stücke für eine Stunde in eine gesättigte Lösung von gewöhnlichem Hutzucker in destillirtem Wasser gebracht , dann an der Oberfläche mit Fliesspapier abgetrocknet und für 15 Minuten in eine Gummi- arabicum -Lösung gebracht, um schliesslich mit dem Gefriermikrotom geschnitten zu werden. Die Schnitte schliesst mau in verdünntes, mit Ammoniumpikrat versetztes Glycerin ein. Verf. fand, dass, wenn das Gewebe vor dem Einlegen in die Farbe fast abgestorben ist, oder wenn man zu lange oder bei hoher Temperatur färbt, nur ein- zelne isolirte Epithelzellen tief dunkelblau gefärbt werden oder zahl- reiche dunkele Körper an der Basis der Haarzellen oder au ihrer Oberfläche auftreten. Die Nerven repräsentiren sich in diesem Falle als Reihen unzusammenhängender Perleu. Bei zu starker Farblösung treten zahlreiche Varicositäten an den Nerven auf, und die Zellen sind dunkel gefärbt. Verdünnte Farblösung scheint mehr physiologisch zu wirken , das Gewebe wird erst durch das Fixirungsmittel abge- tödtet. Wenn sowohl Zellen als Nervenfasern stark gefärbt sind, ist es unmöglich, ihre gegenseitigen Beziehungen mit genügender Sicher- heit zu bestimmen. Bei zu langer Einwirkung der Fixirungsflüssigkeit wird das Epithel zu stark macerirt oder löst sich auch ganz ab. Auch mit der BETHE'sehen Fixirungsmethode wurden sehr gute Re- sultate erzielt. E. Sclioebel {Neapel). Greeff, R. , Anleitung zur mikroskopischen Unter- suchung des Auges. Berlin (Hirschwald) 1898, 77 pp. rii. 5 Figg. Selig'lliaim , S., Die mikroskopischen Unt er su ch ungs - m e t h d e n des Auges. Berlin (Karger) 1899, 248 pp. In den oben genannten Werken liegen zwei empfehlenswerthe technische Hülfsbücher für die Untersuchung des Auges vor. Das Buch von Greeb^f ist, wie sein Name besagt, eine kurze, aber immer- hin inhaltsreiche Anleitung, welche man bequem auf den Arbeitstisch XVII, 1. Referate. 85 legen kann und in der alle wesentlicheren Methoden mitgetheilt sind. Weit eingehender ist das ja auch weit umfangreichere Buch von Seligmann. Dasselbe stellt nicht nur eine einfache Anleitung dar, sondern auch eine Zusammenstellung der bisher für das Auge an- gewandten Methoden, so dass es auch zu eingehenderem Studium zu verwenden ist. Erhöht wird der Werth des Buches durch umfang- reichere Literaturangaben. Schiefferdecker {Bo7i7i). Piiies, L. , Untersuchungen über den Bau der Retina mit Weigert's N eur ogliametho de (Zeitschr. f. Augen- heilk. Bd. II, 1899, H. 3, p. 252—256 m. 1 TU.). Verf. hat die WEiGERx'sche Neurogliafärbung auf die Retina angewendet. Es ergaben sich dabei anfangs einige Schwierigkeiten trotz peinlichster Befolgung der WEiGERT'schen Vorschriften. Diese Schwierigkeiten bestanden hauptsächlich in dem schlechten Annehmen der Farbe, falls die Schnitte zu lange in Alkohol gelegen hatten, in dem störenden Celloidin und endlich in der zu schnellen Differen- zirung. Das erste Moment glaubte Verf. eliminiren zu können durch Uebertragen der Schnitte aus dem Chromogen in physiologische Koch- salzlösung (nach Seligmann), sowie auch durch Anwendung der dop- pelten und dreifachen Färbung. Die beiden anderen Hindernisse überwand er dadurch, dass er das so schnell differenzirende Anilin- Xylol durch das langsam wirkende Nelkenöl ersetzte, welches zugleich das Celloidin entfernte und so ein klareres Bild der Retina erzeugte. Die Differeuzirung wurde unter dem Mikroskop controllirt. Die Prä- parate wurden dann mit Xylol behandelt. War die Färbung zu schwach, so erfolgte nach Abspülen mit physiologischer Kochsalz- lösung [y] nochmalige Färbung und Differeuzirung. Verf. fand in- dessen die Angabe von Weigjert, dass die Alkoholpräparate, selbst wenn sie anfangs sehr gut gelungen waren, nach 2 bis 3 Tagen trotz der Belichtung abblassten, auch für die Retina zutreffend. An der Retina des Menschen , der Katze und des Kaninchens zeigten sich an den so angefertigten Präparaten gefärbt : die MüLLER'schen Stützfasern mit allen Fortsätzen und Fäserchen, die Membrana limi- tans externa, äussere und innere Körnerschicht, Nervenzellenschicht und Kerne der Gliazellen und Gliafasern. Schiefferdecker {Bonn). Corning , H. li. , Ueber die Methode von P. Kronthal zur Färbung des Nervensystems (Anat. Anz. Bd. XVII, 1900, No. 4, 5, p. 108 — 111). 86 Referate. XVII, 1. Kürzlich hat Kronthal ^ eme Methode zur Färbung von Nerven- zellen veröffentlicht , die älinliche Bilder liefern soll wie die Golgi- Methode. Verf. hat die Methode genau nach der Vorschrift von Kronthal benutzt mit einer Modification , die darin bestand , dass er die Stücke vor dem Einlegen in das Formol -Ameisensäure -Blei- gemisch mit lOprocentigem Formol vorhärtete. Zum Theil war das benutzte Material vor 2 Jahren in lOprocentigem Formol gehärtet worden, ohne dass die Klarheit der Präparate dadurch eine Einbusse erlitt. Verf. hat ferner das ameisensaure Blei nicht selbst hergestellt, sondern es als Plumbum formicicum direct von Merck bezogen. Die Resultate, welche an den mit lOprocentigem Formol vorbehandelten Stücken erhalten wurden , waren entschieden besser als die nach directem Einlegen in die oben angegebene Mischung. Leider dringen die Flüssigkeiten, wie das auch Kronthal angiebt, nicht über 3 bis 4 mm in die Tiefe der Stücke ein. Der Versuch, den Verf. machte, um diesen Uebelstand zu beseitigen, dass er einen constauten Strom von Schwefelwasserstoff durch die lOprocentige Formollösung leitete, hatte keinen Erfolg. Bei jüngeren Thieren (Rückenmark von neu- geboreneu Katzen) gelingt die Reaction recht gut , bei Embryonen (Huhn, Maulwurf) hatte Verf. nur vereinzelte Erfolge. Durch Cel- loidineinbettung wird die Färbung etwas geschädigt, durch Paraffin- einbettung zum grössten Theil zerstört. Man schneidet daher die Stücke am besten aus freier Hand oder zwischen Hollundermark nach Umgiessen mit dicker Celloidinlösung. Zum Aufhellen hat Verf. die verschiedensten ätherischen Oele, auch Kreosot, Terpentin, Xylol und Carbolxylol verwendet. Am besten bewährte sich frisches (helles) Nelkenöl, das jedoch vor dem Einschluss in Cauadabalsam möglichst entfernt wurde. Kreosot und Carbolxylol ergeben besonders ungün- stige Resultate. Sehr schön werden die grossen Vorderhornzellen des Rückenmarks , mitunter sind auch die kleinen Zellen der Sub- stantia gelatinosa Rolandi gut gefärbt. Häufig sind nur einzelne Theile von Zellen gefärbt. Die PuRKiNjE'schen Zellen Hessen sich nie so schön darstellen wie mit der GoLGi'schen Silbermethode. Eine gute Färbung der Fortsätze der Spinnenzellen und der Korbzellen des Kleinhirns blieb aus, obgleich die Kerne der Zellen sich intensiv schwarz färbten. Sehr schön liess sich die Faserung der Molecular- schicht des Kleinhirns sowie die „Körbchen" darstellen, und zwar nach längerem Aufenthalt der Stücke in dem Formol -Ameisensäure- >) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVI, 1899, p. 235. XVII, 1. Referate. 87 Bleigeraisch. Ueberliaupt gelingt die Färbung der Achsencylinder um so besser, je länger die Stücke in der Lösung des Bleisalzes liegen, während für Zellen und Dendriten 4 bis 5 Tage genügen. Von besonderem Werthe dürfte die Methode für das Studium der Medulla oblongata des Erwachsenen und der Thiere sicli erweisen. Am Pes hippocampi der Katze, der vor anderthalb Jahren in lOpro- centiges Formol eingelegt worden war, und der nach lOtägigem Aufenthalt in der Lösung des ameisensauren Bleis 14 Tage lang mit Formol-Schwefelwasserstoff behandelt worden war, erhielt Verf. eine gute Färbung der charakteristischen Zellen der Fascia dentata. Die Pyramidenzellen der Grosshirnrinde färben sich gut aber nie isolirt. Von der Neuroglia wurden nur ganz vereinzelte Färbungen erhalten. Verf. schlägt die Methode zunächst für mikroskopische Curse vor zur Darstellung der Ganglienzellen des Rückenmarks, des Grosshirns und der Medulla oblongata, sowie der PuRKiNJE'schen Zellen und der Faserung des Kleinhirns. Zur Darstellung von Secret- und Drüsen- gängen scheint sie nicht geeignet zu sein. Schiefferdecker {Bonn). Bomie, C. , Note s u r 1 e d e v e 1 o p p e m e n t des c e 1 1 u 1 e s ependymaires (Bibliogr. Anat. t. VII, fasc. 3, 1899, p. 103—113 av. 2 figg.). Die Untersuchungen wurden ausgeführt an den im Schwanz be- findlichen Rückenmarkstheilen von Embryonen (Schaf, Rind, Schwein), welche in der Entwicklung schon ziemlich vorgeschritten waren (2 bis 10 cm lang ohne Berücksichtigung der Krümmung). Das Schwanz- mark ist immer weniger weit entwickelt als die weiter vorne ge- legenen Theile. Da hier später von der Gegend der unteren Extre- mität an eine Atrophie eintritt, so macht das Mark nicht die Ver- änderungen durch wie die übrigen Abschnitte bis zum ausgebildeten Zustande. So zeigt das Schwauzmark zu der Zeit, wo das Lenden- mark eines Embryo nicht nur seine allgemeine definitive Form be- reits erreicht hat , sondern auch gut differenzirte Elemente aufweist, immer noch einen Centralkanal, um welchen nur Ependymzellen sicht- bar sind. Man kann so an diesen sehr verschiedene Stadien der Entwicklung deutlich beobachten. Mau kann das Schwanzmark in situ ohne Präparation in die Fixirungsflüssigkeiten hineinlegen. Verf. hat die schnelle GoLGi'sche Methode angewendet. Die Behandlung mittels einfacher Bichromatlösuug ohne Osmiumsäure, oder der Er- satz dieser letzteren durch Formol ergab niemals brauchbare Resul- 38 Referate. XVII, 1. täte. Der letzte Abschnitt tles Marks ist nicht mehr zur Färbung brauclibar imd zwar schon hinge bevor er seine charakteristische Form Cverlängerter Centralkanal) verloren und eine runde Form an- genommen hat. Anderseits ist eine Osmium-Bichromatfärbung, welche für die Lumbaigegend des Marks gerade hinreicht, gewöhnlich schon zu lange dauernd gewesen, um die Neurogliaelemente der Schwanz- gegend in derselben Klarheit darzustellen. Schiefferdecker (Bonn). Studuicka, F. K., Ueber das Vorkommen von Kanälchen und Alveolen im Körper der Ganglienzellen und in dem A c h s e n c y 1 i n d e r einiger Nerven- fasern der Wirbelthiere (Anat. Anz. Bd. XVI, 1899, No. 15, 16 p. 397 — 401). Verf. hat die Kanälchen in den Ganglienzellen an den grossen Zellen des Trigeminus und anderer Nerven von Petromyzon Planeri und weiter auch in den Spinalganglienzellen desselben Thieres gefun- den; weiterhin auch in den grösseren Ganglienzellen der Oblongata und den REissNER'schen Zellen. Die Präparate waren hauptsächlich mit Sublimat-Eisessig, mit der Pikrin-Osmiümlösung nach vom Rath und mit der PERENYi'schen Lösung fixirt, mit Hämatoxylin-Eosin, Methylenblau-Eosin oder mit Eisenhämatoxylin gefärbt. Die Pere- NYi'sche Flüssigkeit und das Eisenhämatoxylin haben sich am besten bewährt. Schiefferdecker {Bonn). Hardesty, J., The n u m b e r a n d a r r a n g e m e u t o f t h e f i b e r s forming the spinal nerves of the frog (Rana virescens) (Journ. of compar. Neurol. vol. IX, 1899, no. 2, p. 64—112 w. 8 pltes.). Das Thier wurde getödtet und gewogen. Bei Weibchen wurde das Gewicht der Ovarien abgezogen. Sodann wurden die Eingeweide, die Haut, die Extremitäten und ein Theil der Bauch- und Brust- muskeln fortgenommen. So blieb nur der Kopf und der mehr dor- sale Theil des Körpers übrig. Jetzt wurde von der ventralen Seite das Rückenmark durch vorsichtiges Wegnehmen der Wirbelkörper (Abkneifen der Bogeuj freigelegt, damit zugleich auch die Inter- vertebral-Löcher. Sodann wurden mit einer feinen Scheere oder einer feinen Knochenzange in die dorsalen Muskeln, gerade unter- halb eines jeden Spinalganglions , Einschnitte gemacht , so dass das Reagenz die dorsalen Nervenäste besser erreichen konnte. Endlich wurde der Kopf gerade oberhalb des Ursprungs des ersten Spinal- XVII, 1. Referate. 89 nervon eutferiit, und es wurde mittels einer feinen Pipette einprocen- tige Osmiumsäure unter das Rückenmark gespritzt, um die Cerebro- spinaltlüssigkeit auszuwasclien und durch Osmiumsäure zu ersetzen. Das Rückenmark wurde in der Lage gelassen, da eine Herausnahme desselben die normale Spannung der Nervenwurzeln hätte verändern und so dieselben schädigen können. Sodann wurde das ganze Prä- parat für 10 bis 15 Minuten in ein Gefäss mit 0*2procentiger Os- miumsäurelösung gelegt, worauf das Gefäss hin- und herbewegt wurde. Der Grund für die Anwendimg der schwächeren Lösung war der, eine laugsamere Fixirung der bindegewebigen Häute zu erzielen. Eine langsamere Fixirung dieser aber musste voraussichtlich eine weniger heftige Contraction und in Folge dessen auch eine weniger starke Verdichtung der Nervenstränge zur Folge haben und so ein schnelleres Eindringen einer stärkeren Lösung, welche darauf an- gewendet wurde, erlauben. Nach 15 Minuten brachte Verf. das Präparat zusammen mit der schwachen Osmiumlösung in einem Ge- fäss unter ein Präparirmikroskop. Nachdem die Augen und die Nase des Beobachters gegen die Osmiumsäuredämpfe geschützt waren, wurde jede Nervenwurzel aus ihrer Verbindung mit dem Rücken- mark vorsichtig gelöst und das Rückenmark herausgenommen. Es folgte Durchtrennung jedes Nervenstranges einige Millimeter distal von seiner Verbindung mit dem Ramus communicans, worauf der Ramus selbst durchschnitten wurde. Jetzt wurde mit Hülfe von feineu Instrumenten bei einer IGmaligen Vergrösserung jeder Nerv aus dem Forameu intervertebrale herausgelöst , wobei besonders darauf zu achten war, keinen von den dorsalen Aesteu zu beschädigen oder zu vergessen. Sodann wurde die perigauglionäre Kapsel geöffnet und theilweise abgezogen, und nun der Nerv in eine einprocentige Osmiumlösung übertragen. Nach 12 bis 24 Stunden legte Verf. die Nerven aus der Osmiumlösung in destillirtes Wasser. Darauf entfernte er unter dem Präparirmikroskop die perigauglionäre Kapsel und sonstiges noch vorhandenes Bindegewebe mögliehst sorgsam und entwarf mittels einer Camera lucida die Conturenbilder der heraus- genommenen Nerven und der Wurzeln bei einer bekannten Ver- grösserung. Die Länge der Wurzeln und des Nervenstammes wurde darauf in Millimetern bestimmt und auf den Zeichnungen ange- geben. Das sich daran schliessende Auswaschen in Wasser war 4 bis 12 Minuten lang fortzusetzen oder so lange, bis der Ueber- schuss an Osmiumsäure entfernt war. Es folgte Uebertragung der Präparate in TOprocentigen Alkohol, in 97procentigen, sodann Auf- 90 Referate. XVII, 1. hellen in einer Mischung von 3 Th. reinem Xylol und 1 Th. Carbol- säure und endlich Einbettung in sehr hartes Paraffin (56° Schmelz- punkt). Absoluter Alkohol wurde gewöhnlich vermieden, da frühere Experimente ergeben hatten , dass unter Umständen das Myelin durch denselben sich etwas gelöst hatte. Nelkenöl und Cedernholzöl wurden aus demselben Grunde nicht verwendet. Aus bestimmten Gegenden der Nerven und Wurzeln wurden sodann 3 /x dicke Schnitte angefertigt und mittels der Eiweiss- Wassermethode aufgeklebt. Um später Photographien anfertigen zu können , ist es absolut nöthig, dass die Schnitte flach auf dem Objectträger aufliegen. Das Aus- breiten der Schnitte zu diesem Zwecke führte Verf. in der Weise herbei, dass er den Objectträger mit dem auf dem Wasser schwim- menden Schnitte auf ein Wasserbad brachte von einer Temperatur gerade unter dem Schmelzpunkt des Paraffins. Schliesslich Ein- schluss in Balsam. Betreffs der Methode des Photographirens , des photographischen Druckes und der Auszählung muss auf das Original verwiesen werden. Schiefferdecker {Bonn). Holmgren, Weitere Mittheilungen über den Bau der Nervenzellen (Auat. Anz. Bd. XV, 1899, No. 15, 16, p. 388—397 m. 13 Figg.). Verf. hat, um die von ihm in Nervenzellen aufgefundenen Kanälchen darzustellen, mit Bezug auf die optische Differenzirung keine bessere Fixirungsmethode finden können als Pikrin- Sublimat (zu gleichen Teilen). Bei Kaninchen ist es ihm überhaupt mit keiner anderen Methode gelungen, diese Kanälchen so gut darzustellen wie mit der genannten Flüssigkeit. (Lenhossek^ hatte Pikrinsäure- Sublimat als Plxirungsmittel für die Nervenzelle besonders empfohlen.) Bei anderen Thieren dagegen, wie z. B. bei den Vögeln, wo die Kanälchen sehr reichlich und weit sind, kann man dieselben auch mit anderen Methoden gut studiren, so mit dem Gemisch von Carnoy, das für die Nervenzellen sehr vortheilhaft ist, ferner mit Sublimat- Eisessig (100 : 5), Sublimat - Alkohol - Eisessig (75 : 25 : 5), welche ebenfalls sehr nützlich sind. Als Färbemittel ist Toluidin-Erythrosin sicher das beste. Gut ist auch Eisenalaun-Hämatoxylin verbunden mit einer Plasmafarbe wie Rubin oder Orange. Zum Studium der eigenen Wand der Kanälchen ist Toluidin-Erythrosin das Beste. Es ist dabei jedoch nöthig, dass man die Nachfärbung mit Erythrosin 1) Lenhossek, M. V., Neurol. Centralbl. Bd. XVII, No. 13. XVII, 1. Referate. 91 so stark wie möglicli einwirken lässt, um die Wand der Kanäleben durch intensives Roth vom Zellplasma der (langlienzelle isolirt zu erhalten : Zuerst Färbung mit 2procentiger Toluidinlösung während 24 Stunden, dann Differenzirung dieser Färbung mit einer dünnen Er.ythrosinlösung (z. B. 1 : 1000). Man kann auf diese Weise die Erythrosiufärbung beliebig stark machen. Scldefferdecker {Bonn). Holingren, E., Noch weitere Mittheilungen über den Bau der Nervenzellen verschiedener Thiere (Anat. Anz. Bd. XVII, 1900, No. G, 7, p. 113—129 m. 17 Figg.). Verf. geht in der vorliegenden Arbeit noch weiter auf die von ihm in den Ganglienzellen beobachteten Kanälchen ein. Er hat schon früher hervorgehoben,^ dass man in den Spinalganglienzellen des Kaninchens mit Toluidin - Erythrosin, wobei die Nachfärbung mit Erythrosin so lange wie möglich einwirken soll, sehr deutlich beob- achten kann, dass die Kanälchen intensiv und glänzend roth gefärbte Wände erhalten. Er hat in seinen früheren Abhandlungen als Fixirungsmittel der Nervenzellen das Pikrinsäure-Sublimat als das geeignetste empfohlen. Diese Mischung hält Verf. auch jetzt noch für recht gut, doch sei ein gefährliclier Concurrent derselben das ApATHY'sche Sublimatgemisch (Sublimat-Alkohol-Eisessig, Fixirung nicht mehr als 6 Stunden). Letzteres combinirt die fixirenden Eigen- schaften des Gemisches von Carnoy mit der ausgezeichneten Färb- barkeit des Materials, die man gewöhnlich bei Sublimatbehandlung erreicht. Verf. hat daher jetzt mit Vorliebe die Nervenzellen mit der ApATHY'schen Mischung behandelt, allerdings auch zahlreiche andere Conservirungsmittel, darunter besonders die Gemische von Rabl und Carnoy in Anwendung gebracht. Er hat mit diesen Methoden spinale Nervenzellen vom Meerschweinchen und Pferd behandelt. Bei den Zellen des letzteren findet man häufiger solche, welche von äusserst feinen Tigroidkörnern difius durchtränkt sind. In Folge dessen haben die Zellen bei Färbung mit Toluidin-Erythrosin eine diffuse, blaue Farbe angenommen. In dieser blauen Grundmasse treten dann die sehr feinen Kanälchen auf, die sich durch ihre intensiv roth gefärbten Wände scharf abheben. Zur weiteren Unter- suchung der sehr wichtigen Frage nach den Wandungen der Kanäl- chen hat Verf. auch die WEiGERT'sche Elastinfärbung benutzt und ^) Vgl. das vorige Referat. 92 Referate. XVII, 1. durch diese niclit nur die scharfe Abgrenzung der Kanälchen sehr schön dargestellt, sondern auch nachweisen können, dass dieselben in Kanälchen ausserhalb der Zellen übergehen. Reizt man spinale Nervenzellen durch Inductionsströme (eine Stunde, zwei Elemente von Leclanche, Rollenabstand 6 cm), so erhält mau eine auffallende Vermehrung des Tigroids und eine allgemeine Erweiterung sämmt- licher Zellenkanälchen, wodurch dieselben schon mit Toluidin-Erythrosin aufs deutlichste hervortreten. — Verf. hat dann die Untersuchungen von Studnicka bei Petromyzon nachgemacht. Die von Stüdnicka angewandte Untersuchungsmethode (PEiiEXYi'sche Flüssigkeit und J'ärbung mit Eisenhämatoxylin) hielt Verf. nicht für geeignet. Con- servirt man die Medulla oblongata von Petromyzon mit den Gemischen von Rabl, Carnoy und Apathy und färbt die höchstens 5 fx dicken Schnitte mit Toluidin und Erythrosin, so findet man auch hier die Nervenzellen von Kanälchen durchsetzt, die eine intensiv roth gefärbte Wand besitzen. — An Schnitten von Nervenzellen verschiedener Wirbeltliiere, welche in Caknoy's Gemisch oder in Salicylalkohol (concentrirte Lösung in Drittelalkohol) conservirt und mit Eisenhäma- toxylin gefärbt waren, hat Verf. dann weiter eine fädige Structur der Nervenzelle erhalten, die der FLEMMiNG'schen Ularsubstanz völlig entspricht. — Verf. hat endlich die Bauchganglienzellen von Hirudo medicinalis untersucht und durch Fixirung mit dem CARNOY'scheu Gemisch und Tinction mit Eisenalaunhämatoxylin sehr schöne Bilder bekommen, die ein Neuropilem im Sinne von His zeigen. Er bildet eine solche Zelle ab, die von einer feinfädigen und kernführenden, bei Tinction mit Säurefuchsiu-Orange sich in letzterem Stotf färbenden Kapsel umgeben ist, an deren äusserer Seite eine kernführende, collagene, von Säurefuchsin gefärbte Hülle sich befindet. Schiefferdecl:er {Bonn). Turner, W., a. Himter, M. B. , On a form (»f nerve ter- m i n a t i n in t li e central n e r v o u s System, d e - monstrated by methylene blue (Brain , Spring number 1899, p. 1 — 15 w. 2 pltes.). Verf. hat eine besondere Art von Nervenendigung um Nerven- zellen mittels Methylenblau nachgewiesen. Methode : Kleine Mengen einer gesättigten Lösung von Methylenblau wurden in Zwischenräumen von 15 bis 20 Minuten dem Thier subcutan injicirt, bis dasselbe starb. Die Organe des Centralnervensystems wurden schnell heraus- genommen, in Blöcke von passender Grösse zerschnitten und in eine XVII, 1, Referate. 93 Lösung- von Ammoniummolybdat zur Fixirung- eingelegt. Nach Aus- wasehen, Härten und Einbetten wurden die Blöcke in gewöhnlicher Weise geschnitten und die Schnitte mit einem Deckglase aufbewahrt. Verwendet wurden: Affen, Katzen, Hunde, Kaninchen, Meerschwein- chen und Mäuse. Die besten Resultate ergaben Kaninchen im Alter von 6 bis 8 Wochen. Sckiefferdecker (Bonn). Sclavuuos, Ueber Keimzellen in der weissen Substanz des Rückenmarks bei älteren Embryonen und Neugeborenen (Anat. Anz., Bd. XVI, 1899, No. 17, 18, p. 467—473 m. 3 Figg.). Verf. suchte die Frage zu entscheiden, ob die Keimzellen im Rückenmark das Bildungsmaterial auch für die Neurogliazellen ab- geben. War das der Fall, so mussten dieselben mit der Anlage der Nervenzellen nicht verschwinden, sondern bis zu einer späteren Zeit, vielleicht bis zur Geburt fortbestehen, da sich der definitive Ausbau des Neurogliagewebes während der späteren Embryonalzeit vollzieht. Verf. untersuchte zu diesem Zwecke ältere Embryonen und Neugeborene von 1 bis 20 Tagen von Hunden, Katzen und weissen Mäusen. Fixirt wurde mit Sublimat und Eisessig mit oder ohne Zusatz von einigen Tropfen Osmiumsäure. Es wurden Serien- schnitte von 10 ji* gemacht, die nach der Methode von M. Heidenhain gefärbt wurden. Schieferdecker {Bonn). Hliber, C. 0., A study of the operative treatement for loss of nerve substance in peripheral nerves (Journ. of Morphol. vol. XI, 1896, p. 629 — 740 w. 3 figg. a. 3 pltes.). Verf. kam nach vielfachen Versuchen zur Ueberzeugung , dass für die vorliegenden Untersuchungen die Darstellung des Achsen- cylinders am besten mittels der etwas modificirten Anilinblau-Safranin- Methode von Stroebe gelingt. Die Nervenstümpfe wurden 3 bis 4 Wochen bei 40*^ C. in Müller's Flüssigkeit gehärtet, dann un- gefähr 30 Minuten in fliesseudem Wasser ausgewaschen und schliess- lich 3 bis 4 Tage mit 95procentigein Alkohol behandelt. Die Pa- raflinschnitte wurden auf warmem Wasser gestreckt und dann mit einem mit Glycerin-Eiweiss bestrichenen Deckglas aufgefangen. Nach vollständigem Trocknen wird das Paraffin entfernt und in einer ge- sättigten wässerigen Lösung von Anilinblau eine bis b Stunden ge- färbt. Nach Abspülen in Wasser wird mit alkoholischem Alkohol 94 Referate. XVII, 1. (30 bis 40 Tropfen einer einprocentigen alkalischen Aetzkalilösung auf 30 cc absoluten Alkohol; differenzirt. Hierin verlieren sie ihre blaue Farbe, und nach einer bis 2 Minuten ist die Entfärbung be- endet. Nach 10 Minuten langem Waschen in destillirtem Wasser wird ungefähr eine halbe Stunde in einer gesättigten wässerigen Safraninlösung gefärbt, wieder gewaschen, mit Alkohol steigender Concentration entwässert, mit Bergamottöl aufgehellt, in Xylol über- tragen und schliesslich in Canadabalsam eingeschlossen. In gut ge- lungenen Präparaten sind die Achsencylinder tiefblau gefärbt, das Myelin rothgelb oder orange, die Nervenkerne und alle anderen Kerne nehmen die Farbe des Safranius an, das Plasma eine schwach rothe Farbe. Das elastische Gewebe färbt sich zuweilen ähnlich wie die Achsencylinder, eine Verwechslung dürfte indess kaum möglich sein. Die frühesten Degenerationsstadien des Myelins und das Verhalten der Nervenkerne wurden auch nach Fixirung in FLEMMiNa'scher Flüssig- keit und Doppelfärbung nach Benda mit Safranin und Lichtgrün untersucht. E. Sehoebel (Neapel). C. Mikroorganismen. Bulloch, W., A simple apparatus for obtaining plate cultures or surface growths of obligate an ae- rob es. (Centralbl. f. Bacteriol., Abth. 1, Bd. XXVII, 1900, No. 4, p. 139—142). BuLLOCH hat, da ihn die vorhandenen Apparate nicht befriedigten, einen neuen Apparat zur Züchtung von Anaeroben in Oberflächen- culturen construirt. Auf einer geschliffenen Glasglocke steht eine Glocke mit abgeschliffenem unterem Rande. Die Glocke hat zwei Hälse wie eine WouLPF'sche Flasche , in welche zwei Glaspfropfen luftdicht eingeschliflfen sind. Die Glaspfropfen sind der Länge nach durchbohrt und enden in zwei kurze rechtwinklig abgebogene Glas- röhren , welche ein Stück von dem Ende je einen eingeschliflenen Glashahn besitzen. Der eine der Glaspfropfen ist im Innern der Glocke in eine Glasröhre verlängert, welche fast bis auf den Boden der Glocke reicht. Unter der Glocke finden Platz: erstens, diese seit- lich fast ausfüllend eine entsprechend grosse Glasschale, in welche die oben erwähnte Röhre hinabreicht. Sollen die Culturen in Reagenz- gläsern gezüchtet werden, so stellt man sie in einem Glasbecher in XVTI, 1. Referate. 95 die Mitte der Schale unter die Glocke. Handelt es sich um Platten- culturen , so stellt man sie auf den Becher oder auf ein gläsernes oder metallenes Dreieck. Zum Gebrauch legt man 2 bis 4 g trockene Pyrogallussäure in die Schale entfernt vom Ende des langen Röhrchens, dichtet die Glocke gut ab (Unguentum resinae der Britischen Pharma- kopoe) , öffnet beide Hähne und leitet Wasserstoff oder Leuchtgas (letzteres giebt ausgezeichnete Resultate) durch den Halm mit dem kurzen Röhrchen ein, so dass das Gas durch das lange Röhrchen austreten muss. Dann werden die Hähne geschlossen und mittels eines Gummischlauchs , welcher mit einem Glasröhrchen in starke Kalilauge (109 g auf 145cc Wasser) taucht, mit Hülfe einer Luft- pumpe vom kurzen Hahn aus die Kalilauge und danach (zum Nach- spülen , damit die Hähne nicht angegriffen werden) Wasser in die Schale des Apparats nachgesogen , worauf die Hähne geschlossen werden und der Apparat für den Thermostat fertig ist. Die Kali- lauge muss fertig bereitet sein, da sie sonst durch die starke Er- hitzung z. B. Gelatineculturen schmelzen würde. Die Pyrogallus- lösung bleibt gelblich bis lichtbräunlich. Der Versuch erfordere nur 5 Minuten.^ Czapleivski {Köln). ^) Der Apparat wird geliefert von Baird and Tattlok in London. 96 Referate. XVIL 1. Wriglit, J. H, , A simple method for auaerobic culti- vation in fluid media (Centralbl. f. Bacteriol. Bd. XXVII, 1900, No. p. 74 — 75 m. 1 Fi öV Wright hat das Problem der Züchtung von Anaeroben in flüs- sigen Nährmedien in sehr einfacher, ingeniöser Weise gelöst. Man denke sich eine kleine Pipette mit kurzer Spitze und langem Sang- rohr in einem entsprechenden grossen Reagenz- glas untergebracht, welches oben mit einem Watte- pfropf verschlossen ist, durch den das Pipettenrohr durchtritt. Man denke sich ferner innerhalb des Reagenzglases das Pipettenrohr nicht weit oberhalb des Bauches der Pipette getheilt und die beiden Stücke durch ein entsprechendes Stück rothen Gummi- schlauches verbunden. Das Pipettenrohr besitzt ferner am oberen Ende einen kleinen Wattepfropf und ebenfalls ein Stück Gummischlauch als Ansatz. In diese so hergestellte Vorrichtung wird wie in ein gewöhnliches Reagenzglas Bouillon etc. eingefüllt und der gefüllte Apparat sterilisirt, wobei das Gummiverbindungsstück nicht geknickt werden darf. Nach Sterilisation wird der Apparat geimpft und dann die iuficirte Flüssigkeit in die Pipette ge- sogen , bis sie oberhalb des Gummizwischenstücks steht. Dann wird das obere Ende des Gummi- schlauches mit dem Fingern zusammengepresst und das Gummizwischenstück durch Hineinschieben des oberen Rohrstückes in den Apparat geknickt. Es bleibt dann der Bauch der Pipette mit Flüssigkeit gefüllt, während der Rest von nicht mit angesaugter Flüssigkeit am Boden des Reagenzglases steht. So kann man in der Pipette anaerob, in der Aussenflüssigkeit gleichzeitig aerob züchten. Bei obligaten Anaeroben zeigt Klarbleiben der Aussenflüssigkeit Reinheit der Cultur an. Der Apparat ist leicht zu reinigen und hält lange vor. Cxapleifski {Köln). Cesaris-Deinel, A., Ueber das verschiedene Verhalten einiger Mikroorganismen in einem gefärbten Nährmittel (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXVI, 1899, No. 18, 19, p. 529—539 m. 2 Tfln.). XVII, 1. Referate. 97 Cesaius-Dejiel hatte früher^ Leberbrühe zur Differeiitialdiagnose zwischen Typhusbacillus und Bacterium coli angegeben. Letzterer biUlet darin bereits nach 6 Stunden, zuweilen auch früher, reichlich Gas unter diffuser Trübung, welche mehrere Wochen bestehen bleibt, während der Typhusbacillus ohne Gährung nur in Form kleiner, schnell zu Boden sinkender Flocken wächst, so dass die Cultur nach einem bis 2 Tagen transparent mit reichlichem, geballtem, flockigem Nieder- schlag erscheint. Diese Reaction ist von Gorbunoff^ modificirt, in- dem er die Leberbrühe mit Lakmustinctur neutral bis zu violetter Amethystfärbung versetzt. In dieser Lakmusleberbrühe färbt Bacterium coli in 24 Stunden bei 37 '^ die Hüssigkeit roth unter lebhafter Gäh- rung, während der Typhusbacillus die Flüssigkeit ohne Gährung ent- färbt und als bläulicher Niederschlag zu Boden sinkt. — Jetzt hat Verf. an solchen Culturen in den folgenden Tagen noch weitere Verände- rungen beobachtet: „Die Bacterium coli-Cultur, die nach 24stündigem Verbleiben im Thermostaten bei 37 '^ roth gefärbt erscheint, verliert an den folgenden Tagen ihre Farbe, um sich dann wieder, und zwar violett zu färben , während die Typhusbacillencultur , die sich nach 24 Stunden entfärbt, am zweiten Tage eine deutliche rosa Färbung annimmt und dieselbe dann beibehält." Die violette Färbung der Colieultur erfolgt dabei von oben, die rosige Färbung der Typhus- bacillencultur in toto. Es ergab sich hieraus also auch für ältere Culturen der beiden Arten ein bleibendes Differenzirungsmittel. Genauere Versuche lehrten, dass die GoRsuNOFF'sche Reaction mit den nachfolgenden Veränderungen nur dann gelingt, wenn nicht weniger als 20 Procent Leber zur Brühe verwendet werden, und um so schneller erfolgt, je mehr verdünnt die Brühe ist. In verdünnter Leberbrühe wird die Flüssigkeit nach kurzer Röthung mit Gährung entfärbt und ist schon nach 24 Stunden farblos, durch Typhusbacillen aber nach kurzdauernder Entfärbung schon nach 24 Stunden rosa. Es handelt sich hier also um eine Inversion der GoRBUNOFF'schen Reaction, welche irreführen kann , falls man nicht die Reaction vor Ablauf der ersten 24 Stunden mit verfolgt und zu stark verdünnte Brühe verwendet. Constant bleibt aber auch in verdünnten Brühen, dass nach der Entfärbungsperiode durch Bacterium coli Violettfärbung von oben, durch Bacillus typhi dagegen diffuse Rosafärbung erzielt wird. Auch die Menge des Lakmuszusatzes ist für den Ablauf der 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 505. ■2) Wratsch 1899, No. 1. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 1. 98 Referate. XVII, 1. einzelnen Pliasen von Eiufluss. Für den Typus einer guten Leber- brülie giebt Verf. folgendes Recept: „Man nimmt 250 g frische Kalbsleber, zerschneidet sie in kleine Stücke und bringt sie auf 24 Stunden zur Infusion in ein Liter Wasser. Nachdem man aus- gepresst und liltrirt hat, lässt man die Flüssigkeit eine Stunde lang bei 100^ kochen, liltrirt wieder und fügt Pepton (10 g) und Salz (5 g) hinzu , kocht nochmals , filtrirt und neutralisirt mit einer nor- malen Sodalösung (gewöhnlich sind .3 cc von dieser Lösung erforder- lich, um den richtigen Alkalescenzgrad zu erhalten) ; hierauf hält man die Brühe eine halbe Stunde lang im Autoklaven bei 115^, filtrirt sie wieder und fügt 20 cc neutrale Lakmustinctur hinzu. Von dieser Brühe werden 10 cc in jedes der Röhrchen gegossen, die man dann eine halbe Stunde lang im Autoklaven sterilisirt." Impfung mit je einer Oese Bouilloncultur. Verf. hat auf diesem Nährmedium eine ■ganze Zahl bekannter Bacterienarten geprüft und darauf deutliche Unterschiede zwischen einander nahestehenden Arten, z. B. Cholera und Finkler-Prior, B. diphtheriae und B. pseudodiphtheriae gefunden. Anaerob gezüchtet entfärben Bacterium coli und Typhusbacillus die Lakmusleberbrühe in 24 Stunden, und die Entfärbung bleibt bestehen, so lange der anaerobe Zustand anhält. Vorher hat Bacterium coli Gährung und diffuse Trübung, der Typhusbacillus staubige Trübung, beide unter Röthung bewirkt. Bei Zutritt der atmosphärischen Luft zu den anaeroben Culturen holen diese die Veränderungen der aeroben nach. [Ref. möchte hierbei daran erinnern , dass Lakmus in ge- schlossenen Gefässen sich überhaupt leicht entfärbt.] Verf. resumirt zum Schlüsse : „Die Mikroorganismen rufen hinsichtlich ihrer biolo- gischen Producte in den Nährböden merkliche Veränderungen hervor, die sich durch geeignete Mittel erkenntlich machen lassen. Ein aus- gezeichnetes Hülfsmittel hierzu ist mit Lakmustinctur versetzte Leber- brühe. In diesem Nährmittel finden, je nach den darin gezüchteten Mikroorganismen , verschiedene , durch einfache äussere Betrachtung verfolgbare Modificationen in der Färbung statt , die uns die Dauer und Intensität der einzelnen Phasen, wie sie den auf einander folgen- den Modificationen entsprechen, genau anzeigen. Fast jeder Mikro- organismus hat ein eigenes Verhalten, wodurch er sich von anderen unterscheidet. Aber einige Mikroorganismen haben ein so charakte- ristisches eigenes Verhalten, dass sie schon dadurch allein von an- deren ähnlichen unterschieden und identificirt werden können. So zeigen das Bacterium coli und der Typhusbacillus ein absolut ver- schiedenes Verhalten, das sich, besonders in den letzten Phasen der XVII, 1. Referate. 99 Rcactiou als specitiscli ansehen lässt. Die Mikroorganismen lassen sich bei Zi'iclitung in diesem gefärbten Nährmittel auch durch die Anordnung, Form und Farbe des sicli bildenden Satzes von einander unterscheiden. Im allgemeinen lässt sich behaupten, dass die ge- färbten Sedimente nach einem durchschnittlichen Zeitraum von 15 Tagen seit Ablauf der Cultur absolut steril sind." (Auf 2 Farben- tafeln sind schematisch die Farbenveränderungen der Lakmusleber- brühe an auf einander folgenden Tagen übersichtlich dargestellt.) Cxaplewski (Köln). Müller, Fr., Ueber das Reductions vermögen der Bacte- rien (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXVI, 1899, No. 25, p. 801—817). MtJLLER hat die Reductionserscheinungen , welche in gefärbten Nährböden an sich und durch Bacterien erzeugt auftreten, in einer ein- gehenden Arbeit behandelt, auf deren interessante Details hier nicht näher eingegangen werden kann. Die Resultate fasst er selbst in folgende Sätze zusammen: „1) Bei der Auswahl von Farbstoffen zur Erkennung des Reductionsvermögens der Bacterien sind solche von bekannter Constitution zu bevorzugen [Methylenblau, essigsaures Ros- anilin. Ref.]. 2) Unter den die Nährböden zusammensetzenden Sub- stanzen äussert beim Kochen Agar starkes , Bouillon dagegen ge- ringeres Reductionsvermögen. 3) Da bei Verwendung von gewöhn- lichen Reagenzgläschen zur Erkennung des Reductionsvermögens der Bacterien die Nährböden ihre reducirenden Eigenschaften bei ge- wöhnlicher und Körpertemperatur und Benutzung von Methylenblau and Agar gar nicht, bei nach der oben geschilderten Methode au- gefertigten Nährböden mit essigsaurem Rosanilin erst nach Wochen äussern können, so ist diese Art der Beobachtung sicherer als die Verwendung von Gährkölbchen. Letztere Methode besitzt den Vorzug, dass man mit ihr das Reductionsvermögen der die Nährböden zu- sammensetzenden Substanzen schon bei gewöhnlicher Temperatur und zwar in dem geschlossenen Schenkel des Gährkölbchens erkennen kann. 4) Die Reduction der Farbstoffe findet ausserhalb des Bacterien- leibes statt. 5) Dieselbe wird hervorgerufen durch von den Bacterien ausgeschiedene Stoffwechselproducte. 6) Diese Stoffwechselproducte wirken nicht nur direct nach ihrer Ausscheidung, sondern noch längere Zeit nachher reducirend, werden aber allmählich durch den Sauerstoff der Luft reducirt. 7) Alle Bacterien, aerobe und anaerobe, können geeignete Farbstoffe reduciren; da die ausgeschiedenen reducirenden 100 Referate. XVII, 1. Substanzen wahrscheinlich verschiedener Natur sind, können sich die Keductionsprocesse nicht nur quantitativ, auch qualitativ unterscheiden. 8) Viele Bacterien sind im Staude , während des Lebens Farbstoffe in sich aufzunehmen ; die farbstoffbildenden lassen in der Regel eine Farbstoffaufnahme aus den [gefärbten. Ref.] Nährböden nicht er- kennen ; dasselbe ist der Fall bei Bacillus anthracis, den Heubacillen und Proteusarten." — Verf. rechnet übrigens auf 500 cc Nährboden 5 Tropfen (12 Tropfen = 1 cc) einer Methylenblaulösung und essig- sauren Rosanilinlösung 1 : 100, 6 cc concentrirter wässeriger Lakmus- lösung, .5 cc einer Indigocarminlösung 2 : 100. Dass die Indigcarmin- nährböden sich im Dampf entfärbten, ist dem Ref. unverständlich, da er nach Kitasato's Angaben sehr schöne haltbare Indigcarmiunähr- böden hergestellt hat. Oxaplewski {Köln). Welcke, E. , Eine neue Methode der Geis sei färbung (Arch. f. klin. Chirur. Bd. LIX, 1899, H. 1, p. 129 — 143). Welcke beschreibt eine neue Geisselfärbungsmethode mit Hülfe von Silbersalzen und Verstärkung, welche die van ERMENGHEM'sche Methode ersetzen soll. Verf. ging von dem Gedanken aus , da die Bacterien gegen Metallsalze sehr empfindlich sind , die gebildete Metallsalzverbiudung in der Bacterienzelle in eine gefärbte Ver- bindung zu überführen uud so die Bacterienleiber sammt Geissein sichtbar zu machen. Versuche, solche gefärbte Verbindungen durch Nachbehandlung mit Schwefelwasserstoff lösung , Ammoniak , Zinn- chlorid, Tanninlösung, Formalin oder durch Belichtung bei mit essig- saurem Blei, Sublimat, Osmiumsäure oder salpetersaurem Silber vor- behandelten Präparaten zu erzielen, lieferten keine befriedigenden Ergebnisse. Daher kehrte er das Verfahren um, Hess zuerst Formal- dehyd, Aldehyd, Pyrogallol und dann Silbernitrat etc. wirken. Hierbei erwiesen sich Silbersalze am besten. Nach diesem Princip konnte er durch Taunin und Nachbehandlung mit Silberoxyd-Ammouiaklösung bei Spirillum volutans und einem grossen Bacterium brauchbare Geissei- färbung erzielen, welche noch besser wurde, als er vor dem Silber- oxydammoniak die von Löffler und Bunge angegebenen Eisengallen- beizen verwendete. Die Geisselu waren hiermit bei allen beweglichen Bacterien gelb bis dunkelbraun darstellbar. Der Versuch einer Ver- stärkung mit Hülfe von Anilinfarben misslang. Er versuchte daher die gebildete Silbertannatverbindung in metallisches Silber über- zuführen. Da diese Verbindung aber ziemlich beständig ist, gelang der Versuch weder durch Erhitzen noch durch photographische Ent- XVII, 1. Referate. 101 Wickler, sondern erst, nachdem er sie in das weniger beständige Clilorsilber dnrch Bebandeln des Präparats mit Sublimatlösung- über- geführt : Jetzt tritt durch Behandhing mit Metol- resp. Rodinal- entwickler eine fast schwarze Färbung durch Reduction ein, die aber auch noch nicht tiefschwarz genug war. Volle Schwarzfärbung wurde dann durch wiederholtes Behandeln mit der Silberoxyd- Ammüuiaklösung (um das Quecksilber im Präparat durch Silber wie- der zu ersetzen) und erneute Reduction mit den genannten Ent- wickler erzielt. Bei vergleichenden Versuchen mit der neuen und der alten LöFFLER'schen Methode, welche mit correspondirenden Hälften durch- schnittener beschickter Objectträger ausgeführt wurden, zeigte sich die neue Methode der LöFFLER'schen überlegen, lieferte statt matter farbenkräftigere Bilder ohne Niederschläge und ohne Correcturen durch Alkali- resp. Säurezusatz zu bedürfen. Es zeigte sich ferner, dass dieselben guten Resultate noch mit einer 5fach dünneren Beize und ohne Erwärmen (welches Löffler vorschreibt) erhalten wurden, wenn die Beizung dafür länger, 10, 15 bis 20 Minuten, je nach der Bacterienart dauerte. Hierdurch wurde die Beizung schonender, die Färbung tiefer und es wurden damit häufiger gute Präparate er- zielt als beim LöFFLER'schen Verfahren. Trotzdem blieb das Gelingen unbeständig. Auf den ge- lungenen Präparaten waren die Geissein deutlich und kräftig gefärbt, ferner auf allen, auch den misslungenen Präparaten die Bacterien- leiber gleich tief gefärbt. Verf. kam dadurch zur Vermuthung, dass die Geissein auf den misslungenen Präparaten entweder schon bei Beginn der Färbung auf dem lufttrockenen Prä- parat nicht mehr vorhanden waren oder während der Färbeprocedur zerstört wurden. Er prüfte daher syste- matisch alle Factoren, welche für eine solche Zerstörung verantwort- lich gemacht werden konnten: A. Variation des Bacterienmaterials. 1) Herkunft von verschiedenen Nährböden (Agar, Gelatine, Serum, Bouillon), 2) Alter der Cultur, 3) Art der Anfertigung des Trocken- präparates : a) einfacher Aufstrich direct von der Cultur, b) Bacterien- suspension in Wasser, c) schnelles oder langsames Austrocknen. — B, Variation der Beizung. 1) LÖFFLER'sche oder BuNGE'sche Beize, 2) alte oder frische Beize , 3) wechselnde Zusammensetzung nach Tannin und Eisensalzgehalt , 4) Alkali- oder Säurezusatz , 5) Con- centration, 6) Temperatur, 7) Dauer der Einwirkung auf das Trocken- präparat. — C. Variation der Silberoxyd- Ammoniaksublimat-Entwick- 102 Referate. XVII, 1. lungsflüssigkeit nach Temperatur, Concentration, Dauer der Ein- wirkung. Die verwandte Cultur soll nicht altersschwach sondern jung sein. Am wenigsten Niederschläge geben Culturen auf gutem Agar, doch ist eine dem Bacterium günstige Agarzusammensetzung an- zustreben, z. B. Milchzuckeragar für B. cj^inogenus, ZETXNOw'scher Spirillenagar für grosse Spirillen. „Man wird am besten zur Be- arbeitung schreiten, sobald sich ein Belag gebildet hat, den man ohne den Nährboden zu verletzen abstreifen kann," Verf. überträgt den Inhalt einer massig grossen Platinöse in ein ührschälchen mit Brunnenwasser (welches die Bacterien weniger schädigt). Um Tempe- raturstürze zu vermeiden , stellt er dabei die Cultur aus dem Brut- schrank in Wasser von 37 ^^ und das Ührschälchen auf ein Töpfchen mit warmem Wasser. Beim Stehen mehren sich die Zahl der ab- gefallenen Geissein und der geissellosen Bacterien. Schnelles An- trocknen ist erforderlich ; bei grösseren Tropfen werden häufig nur die schnell angetrockneten Randparthien gut. Beim Geisselzerfall sieht man am häufigsten massenhaft abgefallene Geissein. In einigen Fällen zerfliessen die Geissein noch an den Bacterien zu einer homogenen Masse, seltener zerfallen sie in hinter einander gelagerte Körnchen als Uebergang zu einem Zerfall in körnigen Detritus. Die Art der Fixirung , ob in Flamme oder in Alkoholäther , war ohne wesentlichen Einfluss , doch wurden bei zu starker Erhitzung die Geissein zersprengt. Durch die Beizen von Bunge und von Löffler zerfielen sowohl bei heisser als kalter Beizung in vielen Fällen die Geissein durch Corrosion körnig, wodurch entweder grössere Kügel- chen im Geisselfadeu oder ein freiwerdender feiner Detritus entsteht. Die Schuld schien an zu starker Concentration der Beizen zu liegen, da Verf. diese Corrosion bei 4- bis .5fach verdünnter Beize nur sehr selten sah. Noch verderblicher wirkte erwärmte Beize. Ferner schien ein zu hoher Eisengehalt (mehr als 2'0 g Eisenchloridtinctur auf 20*0 heissgesättigte Tanninlösung, die körnige Zerstörung noch bei stärkerer Verdünnung zu begünstigen. Schon 3 Tage alte Bunge- sche und LöFFLER'sche Beizen gaben gute Resultate , ältere Beizen schienen weniger Niederschläge zu erzeugen. Ferner konnte Verf. bei einer ganzen Zahl Bacterien „sowohl nach Alkali- als auch Säurezusatz zur Beize in breiteren Grenzen, als sie die Löffler- schen Zusätze einschliessen , gute Bilder erlangen," so dass er in dem jeweiligen Aciditätsgrade nicht mehr ein so bedeutungsvolles Moment sehen will. XVII, 1. Referate. 103 Um „die Absterbeerscheimingen beim Antrocknen möglichst ab- zukürzen und dadurch eine Hauptquelle der Geisselzerstöruug zu verstopfen", tödtete er die Bacterien vorher ab, indem er die Wasser- suspension schnell in ein Gläschen mit 3 bis 4 cc 4procentiger Formol- lösung oder einproceutiger Osmiumsäure goss und umschüttelte. Ge- räth von dieser Mischung ein Präparat, so geräth auch jedes folgende sowohl nach der neuen als nach der LÖFFLER'schen Methode (bei Proteus und Cholera noch nach 8 Wochen; später trat Zerfall der Geissein ein). „Damit war bewiesen, dass das Problem der Geissei- färbung weniger in der Art der Beizung und Färbung, als vielmehr darin zu suchen ist, wie man die Bacterien mit unversehrten Geissein als Trockenpräparat auf den Objectträger bringt." Ganz reine ent- fettete Objectträger sind unerlässlich und werden durch langsames 12maliges Durchführen durch die Flamme erzielt. Die Methode wurde an 19 Arten mit bestem Erfolg geprüft. Verf. beschreibt den Gang der Methode wie folgt: „1) Be- reitung einer gut gedeihenden, möglichst jungen Agarcultur (nicht über 24 Stunden), 2) Bereitung absolut sauberer und gut abgebrannter Objectträger, 3) unter Vermeidung von Temperaturstürzen Bereitung einer Suspension des Bacteriums in Wasser. Eine Platinöse voll Cultur in ein Uhrschälcheu voll Wasser aus der Wasserleitung. Nach gehöriger Vertheilung 4) Auftragen auf die abgekühlten Gläser mittels kleinster Oese von dünnem Draht. Schnelles Ausbreiten, 5) Fixiren des lufttrocknen Präparates durch 3- bis 4maliges Durchziehen durch die Flamme des Bunsenbrenners , so dass die Glasränder noch gut anzufassen sind, 6) nach dem Erkalten 20 Minuten langes Einwirken von kalter Beize, 7) sehr sauberes Abspülen mit ganz sanftem Wasserstrahl, 8) Absaugen der Flüssigkeit von der Glasunterfläche, den Angriffspunkten der Pincette und dem Glasende, 9) Einwirkung der Silberoxyd - Ammoniaklösung unter Erwärmen bis zur Dampf- bildung, bis sieh die Stelle des Präparates deutlich bräunt (2 bis 3 Minuten) , Abspülen und Absaugen wie vorhin. Man muss sich bei der Einwirkung der Silberlösung vor dem partiellen P^introcknen des Präparates hüten , weil beim Erhitzen an der eingetrockneten Stelle Zersetzung des Silbersalzes und dadurch Niederschlag ent- steht, 10) Eintauchen in die einprocentige Sublimatlösuug eine Viertelminute, 11) sehr sauberes Abwaschen, Absaugen, 12) zweite Einwirkung der Silberoxyd -Ammoniaklösung bis zur leichten Bräu- nung des Präparates 1, 2 bis 3 Minuten, 13) Abspülen, Ab- saugen wie oben, 14) Rodinal- oder Metol- Entwickler, eine Viertel- 104 Referate. XVII, 1. minute Abspülen, Trocknen. Bei leiclit darziistelleudeu Arten kann man von der zweiten Silbereinwirkung aljsehen und gieicli nach der Sublimatbehandluug abspülen und entwickeln." Czaplewski {Köln). Scheurlen, Die Verwendung der selenigen und tellurigen Säure in der Bacteriologie (Zeitscbr. f. Hygiene u. Infectionskr. Bd. XXXIII, 1900, H. 1, p. 135—136). ScHEURLEN wüuscbte ZU Milzbrandscbutzimpfungeu durch Erhitzen bei 65^ abgetödtete Milzbrandculturen zu verwenden, scheiterte dabei aber zunächst an der Sporenbilduug der Milzbrandbacillen. Da er damals glaubte — eine Ansicht, die er seitdem aufgegeben — • dass Milzbrandbacillen aiif gewöhnlichem Fleischpeptonagar bei Anaero- biose keine Sporen bilden, das Wachsthum dabei aber für praktische Zwecke zu spärlich ausfiel, versuchte erbeiAnaerobiose das Wachs- thum zu steigern, indem er den Milzbrandbacillen wie im Blute statt des freien atmosphärischen Sauerstoffs, „eine andere dem Oxyhämo- globin ungefähr ähnlich leicht gebundene Sauerstoffquelle" zur Ver- fügung stellt. Er probirte daher selenige Säure resp. deren Salze, da er von früher wusste, dass bei diesen der Sauerstoff sehr leicht abgegeben wird, und zwar unter Abspaltung von rothem pulver- förmigem Selen, Wurden 10 cc Fleischpeptonagar mit 1 bis 3 Ösen einer 2procentigen wässerigen, sterilen Lösung von selenigsaurem Natrium versetzt, so wurden die Colonien der Milzbrandbacillen und sämmtlicher untersuchten anderen Bacterien durch das reducirte Selen mehr oder weniger intensiv roth, „so dass sie alle einer ziegelrothen, alkalischen Prodigiosuscolonie glichen". Mikroskopisch Hess sich nach- weisen, dass das reducirte Selen die Bacterien dabei dicht um- lagert, auch liess eine deutliche Körnung einzelner Bacterien darauf schliessen, dass diese Reduction bereits in den Bacterien erfolgt. Eine Beförderung des Wachsthums wurde aber nicht erzielt, viel- mehr im Gegentheil eine Behinderung. Analog färbten sich die Colonien bei Versuchen mit telluriger Säure schwarz. Die Verfolgung dieser Untersuchungen wurde von Oberarzt Dr. Klett übernommen. Cxajüewski {Köln). Unger, E., u. Portuer, E., Der We r t h d e s H a r n n ä h r b o d e n s für die Typhusdiagnose (Münchener Med. Wochen- schr. 1899 No. 51, p. 1737, m. 1. Fig.). ÜNGER und Portner haben in den Berliner Krankenhäusern XVII, 1. Referate. 105 ..Am Urbau" und „Moabit'' Piorkowski's Angaben über dessen llarnnährbödeu einer Nachprüfung unterzogen, Ueber den benutzten Harn bemerken sie , dass Piorkowski einen Harn vorschreibe , der nach zweitägigem Stehen im Brutschranlc alkalisch geworden ist [siehe folgendes Referat]. Zu stark alkalischer Harn sei zu reich an Krystallen, und könne dabei das Wachsthum der Bacterien völlig gehemmt sein. Es genüge, sauren Harn 10 bis 15 Stunden bei 37^ C. stehen zu lassen und leicht alkalisch zu machen. Die Röhrchen dürfen nachher nur bei 100^ C. sterilisirt werden, da die Platten sonst häutig bei 22" C. flüssig werden. Die Platten sollen überhaupt bei 22" C. aufbewahrt werden, Ueberschreiten von 23" C. bewirkt Verflüssigung. Im allgemeinen konnten die Verff". die Angaben Piorkowski's über das Wachsthum von Typhus und Bacterium coli in etwa 17 Stunden bestätigen. In 9 von 31 klinisch sicheren Typhen sahen die Vertf. die für Typhusbacillen charakteristischen Colonien erst nach wiederholter Aussaat. Nach weiterem Wachsthum auf Harngelatine bei 22 ^ C. entwickelten sich die kreisrunden Coli- colonieu schneller als die gefaserten Typhusbacillencolonien. Auch diese blieben aber meist entgegengesetzt Piorkowski's Angaben nur selten im Wachsthum gehemmt. „In der Regel nimmt der Körper der ge- faserten Colonien etwa nach 36 Stunden die gelbbraune Farbe der Colicolonien au, bekommt oft haarzopfähnliche Gestalt und dehnt sich bedeutend aus, während die Ausläufer sich nur wenig mehr ver- längern. -Sie werden aber zum Theil breiter und gekörnt und bilden oft um den Körper ein dichtes Flechtwerk." Anderseits bekommen auch die Colicolonien nach 36 Stunden hier und da kuopfartige An- schwellungen und unregelmässige Begrenzungen , so dass sich die Unterschiede mehr verwischen , ausnahmsweise kann auch das Bacterium coli kurzge faserte Colonien bilden. Also auch auf Harnuährböden kann das Bacterium coli im Aus- sehen mit dem Typhusbacillus übereinstimmen. Auf Grund ihrer Untersuchungen heben die Verff". für den Gebrauch des PiORKOwsKi'scheu Culturverfahrens zu diagnostischen Zwecken folgende Punkte hervor: „1) Fehlen gefaserte Colonien in mehreren Aussaaten, so liegt kein Typhus vor. 2) Zahlreiche lang gefaserte Colonien sind für Typhus beweisend. 3) Kürzer gefaserte Colonien sprechen im Verein mit klinischen Zeichen für Typhus, sind aber ohne sie nicht zu verwerthen. Sicherheit bringt erst die weitere bacteriologische Prüfung." Im allgemeinen bezeichnen sie den Harn- nährboden als wesentlichen Fortschritt, da man damit die Rein- 106 Referate. XVII, 1. cultureu aus dem Stuhl iu viel kürzerer Zeit als früher (in 2 bis 3 Tagen) uud mit viel grösserer Sicherheit erhalten könne. Sie fanden die Bacillen frühestens am 2. Krankheitstage uud um so reichlicher, je stärker die Krankheitserscheinungen waren. Nach der Entfieberung nehmen die Bacillen an Zahl ab und sind in der Regel am 8. bis 10. fieberfreien Tage nicht mehr nachweisbar. Bei Recidiven sind sie aber wieder in Masse, mitunter in Reincultur nachweisbar. Anderseits konnten bei einer fieberfreien sich wohl- befindenden Kranken noch 5 Wochen nach Fieberabfall Typhusbacillen im Stuhl nachgewiesen werden. Aus Roseolenblut (5 Fälle) konnten Typhusbacillen nicht gezüchtet werden. Dagegen wurden sie aus dem Harn von Typhuspatieuten auf Piorkowski's Harngelatine mit Leichtigkeit gezüchtet , uud zwar so reichlich gefaserte Colonien, wie solche aus dem Stuhl selten erhalten wurden. In einem trüben leicht alkalischen Urin wurden massenhaft lebhaft bewegliche typhus- ähnliche Stäbchen ohne vorliegende Anzeichen einer Nierenerkrankung gefunden. Die Cultur ergab Typhusbacillen und Micrococcus ureae liqnefaciens. Auf älteren Platten bilden Typhusbacillen und Coli oberflächliche Colonien von der bekannten Weinblattform mit Nabel. Bei Typhus- bacillen lässt sich im Centrum öfters noch der ursprüngliche gefaserte Bau erkennen, und sie entsenden vom Rande Ausläufer, während Coli- colonien bei durchfallendem Licht violett irisiren. In Stichculturen wuchs Typhusbacillus entsprechend Wittich's Angaben „als grau- weisser Faden mit äusserst feiner seitlicher Strichelung," während der Stich von Bacterium coli viel umfangreicher ist und sich scharf absetzt. (Eine gute Abbildung im Text giebt junge und ältere Typhus- und Colicolonien vortreiflich wieder.) Czapleivski (Köln). Piorkowski, Zur Arbeit: „Der Werth des Harnnähr- bodens für die Typhusdiagnose" von Dr. Ernst Unger und Dr. Ernst Portner. (Münchener Med. Wochenschr. 1900, No. 3 p. 87). PiORKOwsKi greift die Arbeit von Unger und Portner au. Er habe nie gesagt, dass man den Harn im Brustschrank alkalisch machen solle; er habe nur empfohlen,^ normalen Harn einige Tage bei Zimmertemperatur stehen zu lassen, bis derselbe leicht alkalische Reaction angenommen hat. Der folgende Satz, dass zu stark alka- ') Vgl. Vereinsbeilage No. 44 d. Deutschen Med. Wochenschr. 1899. XVII, 1. Referate. 107 lischer Uriu reich au Krystallen wird, und dass das Waclistlmm der Bacterieii dabei völlig- gehemmt sein kann, gebe nur die Ansicht der beiden Autoren wieder. Er habe ferner (1. c.) darauf hingewiesen, dass künstlich herbeigeführte Alkalescenz nicht zu empfehlen ist, „weil hierbei der Typus der Ausfaseruug nicht so charakter- istisch ist. Dadurch sei es wohl auch bedingt, dass die Autoreu in 9 Typhusfällen erst bei wiederholter Aussaat die Typhusbacillen- colouieu fanden, während ihm selbst bei einigen 40 Fällen niemals eine sterile Aussaat vorkam, er aber auch die Typhusbacillen stets bei erster Aussaat erhielt." Ausserdem hätten die Verfasser von ihm zu Un- recht behauptet, dass nach seiner (Piorkowski's) Ansicht „alle mit Ausläufern versehene Colonien , auch die kürzer gefaserten , dem Typhusbacillus angehören, Colicolonien dagegen, stets in kreisrunder Gestalt auftreten", und weist darauf hin, dass er^ bereits früher er- klärt habe: „Die Ausfaseruugeu der Typhusbacterien sind deutlich zu differeuziren von anderen Ausstülpungen, die mehr höcker- artig sind und es höchstens bis zu kleinen Stacheln bringen, die mit- unter den Colibacterien eigen sind." Die Bestätigung der Autoren betreffend die Angaben Wittich's über das Verhalten von Coli- bacterien und Typhusbacillen in Harngelatinestichculturen bedeuteten nur eine Bestätigung seiner früheren Angaben, wie Wittich selbst angiebt. Czaplewski (Köln). TVittich , Beiträge zur Frage der S i c h e r s t e 1 1 u n g der Typhusdiagnose durch culturellen Nachweis auf Harngelatinenährböden (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXVI, 1899, No. 13, p. 370—396). Wittich hat die PiORKOwsKi'sche Methode zur Züchtung der Typhusbacillen aus dem Stuhl einer Nachprüfung unterzogen. Die PiORKOWSKi'schen Vorschriften wurden genau eingehalten, nur dass er später das Stehenlassen des Harns bis zur eingetretenen Alkale- scenz mit Nutzen durch künstliche Alkalisiruug mit lOproceutiger Sodalösung ersetzt, wodurch der Nährboden leichter zu sterilisiren war. Sehr wichtig ist des Verf.'s Beobachtung, „dass bei Leuten, die sicher nicht an Typhus litten,, der Stuhl nicht selten ganz die gleichen Wachsforraen , aus beweglichen Stäbchen bestehend , ent- halten kann. Es war in dem Wachsthum dieser Colonien absolut keine Differenziruug gegenüber den oben beschriebenen Typhuscolonien ^) Sitzungsber. des Vereins f. inn. Med. vom 30. X. 1899. 108 Referate. XVII, 1. möglich, so dass wir auuehmen müssen, dass der Bacillus der Coli- gruppe unter noch zu ermittelnden Umständen sein gewöhnliches Wachsthum auf Harngelatine aufgeben, und das der Typhusbacillus annehmen kann, wenn wir nicht die etwas gekünstelte Annahme ver- treten wollen, dass es sich in diesen Fällen wirklich um Tj^phus- bacillen gehandelt hat, sie aber eine Infection nicht bewirkt haben/' Diese fraglichen Bacillen gaben aber schwache Indolreaction, brachten Milch zur Gerinnung und entwickelten Gas. Als Verf. statt Harn- gelatine in parallelen Versuchen eine einfache Nährgelatine vom gleichen Procentgehalt versuchte, schien es, als ob derselbe die Harn- gelatine zu ersetzen berufen wäre , da die Colonien gleichartig auf- traten. Seine Schlüsse fasst Verf. in folgende Sätze zusammen : „I. Der Harngelatinenährboden Piorkowski's ist nicht geeignet, lediglich aus dem Wachsthum der Colonien schon den Nachweis der Typhuscolonien zu ermöglichen. H. Als werthvoller Nährboden in diagnostischer Hinsicht dürfte er jedoch darum zu betrachten sein, da bei gleichzeitigem Eintreten der bekannten chemischen Reactionen die Typhusdiagnose gesichert erachtet werden darf, so erscheint be- sonders auch eine Frühdiagnose möglich. III. Der Bacillus der Coli- gruppe geht unter noch nicht bekannten Bedingungen auf diesem Nährsubstrat ein verschiedenes Wachsthum ein. AVährend meist eine runde, leicht zu charakterisirende Form wächst , können auch von Typhus nur durch die chemischen Reactionen zu unterscheidende, mikroskopisch jedoch mit Typhus identische Wuchsformen gebildet werden." Cxaplewshi (Köln). Clirschmaiin , H. , Zur Untersuchung der Roseolen auf Typhusbacillen (Müncheuer med. Wochenschr. 1899, No. 48, p. 1597—1598). CuRSCHMANN, wclchcr früher gegenüber den Angaben von Neu- haus -^ über gelungene Züchtung von Typhusbacillen aus Roseolen wie viele andere Forscher einen ablehnenden Standpunkt einnahm, hat die Frage auf Grund der neueren positiven Angaben Neufeld's '^ aufs neue in Angriff genommen und kommt auf Grund eigener Be- obachtungen zur Bestätigung der NsuFELD'schen Angaben. Unter Roseolen versteht er „jene hyperämisch - papiüösen , scharf um- schriebenen kleinen Efflorescenzen", „die in der zweiten Hälfte des 1) Berliner klin. Wochenschr. 1886, No. 6, 24. 2) Zeitschr. f. Hygiene u. Infectionskr. Bd. XXX, p. 498. XVII, 1. Referate. 109 ersten oder zu Beginn der zweiten Woche an bestimmten Stellen des Körpers, nameutlicli am Rumpf, auftreten, nach 3, höchstens 10 Tagen spurlos verschwinden und fast nur während der fieber- haften Zeit oder bei Nachschüben und Recidiven sich zeigen". Wenn man andere gelegentlich bei Typhus sich auch zeigenden rothen Fleckchen, so die als „Roseola follicularis" kürzlich bezeichneten aus- nimmt, so glaube er, dass bei anderen Infectionskrankheiten der Roseola typhosa äusserlich gleiche Efflorescenzen nur sehr selten zur Beobachtung kämen. Aehnliche kaum unterscheidbare Hautverände- rungen habe er nur noch in einzelnen Fällen von Miliartuberculose und Cerebrospinalmeuingitis gesehen. Für den Typlmsbacillennachweis in den Roseolen bediente er sich der NEUFELü'schen Methodik. Er müsse nach seinen Erfahrungen (20 Fälle, davon 14 positiv) „den Typhusbacillenbefund in den wirklichen Roseolen für einen nngemein häufigen, in bestimmten Stadien vielleicht regelmässigen halten". Dass seine Resultate nicht ganz so günstig wie die Neufeld's sind , er- klärt er daraus, dass er mitunter die Roseolen in zu späten Stadien und statt o bis 5 Roseolen nur eine bis höchstens 2 anschnitt. Seine eigenen früheren negativen Befunde und die anderer Forscher seien wohl durch unzureichende Methodik bedingt gewesen. Die neuen Befunde seien theoretisch und praktisch von der grössten Wichtigkeit. Die Identificirung der Typhusbacillen erfolgte nach den alten Me- thoden [Milch- und Traubenzuckerprobe, Petruschky' scher Versuch] und mit Hülfe der Agglutination. Ckaplezvski (Köln). Mankowski, A., Ein Verfahren zum schnellen und leich- ten Unterscheiden von Culturen des Typhus- bacillus vom Bacterium coli (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXVH, 1900, No. 1, p. 21). Mankowski hat, anknüpfend an die RoTHBERGER'schen Versuche^ ein neues Verfahren zur Unterscheidung von Typhusbacillen und Bacterium coli auf gefärbten Nährböden ausgearbeitet. Dasselbe geht von den Beobachtungen aus, dass auf neutralen Nährböden Bacterium coli die Reaction viel schneller und stärker alkalisch macht als Typhusbacillen (bei denen sogar zu einem Zeitpunkt deutlich saure Reaction beobachtet werden kann), und dass das Bacterium coli auch viel stärkere Reduction bewirkt als der Typhusbacillus. Verf. lässt nun die Culturen auf ein Farbengemisch von alkalischem Säure- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 504. 110 Referate. XVII, 1. fuchsin und Indigocarmin wirken , welches „ursprünglich blau , resp. violettblau , unter dem Einfluss des Wachsthums von Typhusbacillen himbeerfarbig (carmoisinroth), unter dem des Bacterium coli dagegen anfangs blaugrün und späterhin ganz farblos wird." Die Mischung besteht aus zwei Lösungen A (einprocentige Kalilauge mit Säurefnchsin gesättigt, bis die ganze Lösung eine dunkle, schwarzbraune Farbe annimmt) 2 cc und B (gesättigte wässerige Indigocarminlösung) 1 cc -{- 22 cc Wasser. Hiervon wird zu einem streng neutralen (da es sonst an sich die Farbe beeinflussen kann) Nährsubstrat tropfen- weise zugesetzt, bis sich dasselbe blau oder violettblau färbt. Dabei ist es von Nutzen , zu dem fertigen Substrat im Reagenzglas noch einen Tropfen der Indigcarminlösung zu geben, um es noch blauer zu färben. Als Nährsubstrat ist Agar-Agar mit 0*3 bis 0'5 Procent Glukose zu verwenden. Zu den Versuchen dienen Schrägculturen (Reaction in 36 bis 72 Stunden). Momentan lässt sich die Reaction erhalten, wenn die Farbmischung mit feiner Pipette auf die Ober- fläche von 2 bis 3 Tage alten Agarculturen von Bacterium coli oder Bacillus typhi geträufelt wird. Die Typhuscultur färbt sich dabei namentlich im oberen Theile roth, die Colicultur grünlichblau, worauf bald Entfärbung eintritt. Auch mit Cultursuspensionen der betreffen- den Bacterien in Reagenzgläsern lässt sich die Reaction durch Zu- satz der Farbmischung erzielen. Tritt die Reaction nicht sofort auf, so entsteht sie momentan durch Erwärmen. ^ Cxaplewshi {Köln). Mankowski, A., Ein neues Nährsubstrat zur Isolirung von Typhusbacillen und des Bacterium coli com- munis. Ein Beitrag zur Differentialdiagnose des Bacterium coli und des Bacillus typhi ab- dominalis (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXVII, 1900, No. 1, p. 23). Mankowski empfiehlt als Nährsubstrat zur Difterenzirung von Bacterium coli und Bacillus typhi ein Pilzdecoct mit 1*5 Procent Agar-Agar, 1 Procent Pepton und 0*5 Procent Chlornntrium. Hierzu erwiesen sich essbare und giftige Pilze in gleichem Maasse brauch- bar. Nach Kochen und Klärung mittels Hühnereiweiss stellt dies ^) Verf. hat leider gar nicbt erwähnt, wie sich die Coli-ähnlichen Bacillen der Reaction gegenüber verhalten. Dies wäre viel wichtiger, da ja die Unterscheidung des echten Bacterium coli vom Bacillus typhi keine Schwierigkeiten macht. XVII, 1. Referate. 111 Pilzagar eine feste durcbsiclitige , dunkelbraune Masse von neutraler Reaction mit deutlich wahrnehmbarem Pilzgeruch dar. Das Bacterium coli wächst rascher und in Form eines silberweissen und trockenen Häutchens, und nach 24 Stunden findet im Reagenzglas eine Gährung mit Gasbildung [wohl in Stichcultur ? Ref.] statt. Die Typhuscultur entwickelt sich dagegen langsamer ohne Gährung und Gasbildung „und hat das Aussehen eines durchsichtigen, glänzenden, feuchten Streifens". Wird dieser Pilzagar mit dem von Verf. angegebenen Säurefuchsiu- Indigogemisch gefärbt, so verwandeln Typhuscolonien die dunkelviolette Masse in eine rothe, das Bacterium coli dagegen dieselbe in eine blass-grünliche und entfärbt sie dann. Auf dem Pilzagar soll diese Reaction schärfer sein als auf gewöhnlichem mit der Mischung gefärbten Agar. Ausserdem soll dieser Nährboden ein schlechtes Substrat für andere Bacterien sein und bis zu einem gewissen Grade electiv für das Bacterium coli und den Typhus- bacillus. Cxcipleivski {Köln). Ulima, Die Schnellfärbung des NEissER'schen Diplo- coccus in frischen, nicht fixirten Präparaten (Arch. f. Dermatol. u. Syphilis Bd. L, H. 2, 1899, p. 241 —242). So einfach und praktisch auch die bisher benutzten Färbungs- methoden des Gonococcus waren, wünschte Verf. sie doch nach zwei Richtungen hin weiter auszubilden : einmal, um die Präparate färben zu können, ohne sie fixirt zu haben, zweitens, um mittels der Färbung die Gonokokken von anderen Bacterien unterscheiden zu können. Der ersten Anforderung entspricht vollkommen die Färbung mit dem für vitale Färbung von Ehrlich angegebenen Neutralroth (GrIjeler, Leipzig) nach folgender Methode : Die Objectträger werden mit einer alkoholischen (statt des Alkohols kann mau auch Essigsäure ver- wenden) 0*5- bis einprocentigen, neutralen Lösung benetzt und ge- trocknet. (Man kann auch ein Körnchen des Farbstoffes, wie es bei der Blutuntersuchung üblich ist, auf den Objectträger legen und darauf das mit Eiter versehene Deckgläschen drücken.) Nach Be- darf nimmt man auf ein Deckgläschen ein kleines Tröpfchen Eiter, legt es auf den so vorbereiteten Objectträger, drückt an und unter- sucht sofort das Präparat. Ist die nöthige Menge des Farbstofi'es richtig getroffen, so entsteht kein Niederschlag, und die Gonokokken sind fast die ersten körperlichen Elemente , die gefärbt erscheinen. Die in manchen Zellen ebenso schnell sich färbenden kugeligen Ele- 112 Referate. XVII, 1, mente können zu Irrthümern nicht Veranlassung geben , wenn man die Unregelmässigkeit ihrer Grösse beachtet. Die mit Neutralroth färbbaren Granulationen der Leukocyten werden gelb gefärbt. Was die zweite Anforderung anlangt, so kann Verf. zwar das Neutralroth nicht als ein nie versagendes Specificum für Gonokokken betrachten, da er in einigen Fällen Eiter getroffen hat, in welchem mit diesem Farbstoff auch andere Bacterien gefärbt wurden. Doch behauptet er, dass in der Eegel nur die Gonokokken gefärbt erscheinen, auch dort , wo er mit Controllfärbuug verschiedene andere Bacterien in Menge nachweisen konnte. 'Ö^ ScMefferdecker [Bonn). Plato, J., üeber Gonokokkenf ärbung mit Neutralroth in lebenden Leukocyten (Berliner kliu. Wchschr. 1899, No. 49, p. 1085). Plato macht, veranlasst durch eine Mittheiluug Uhma's,^ kurze Mittheilungen über seine bisherigen selbstständigen Erfahrungen mit Neutralrothfärbung bei Gonokokken. Zur Färbung benutzt er ganz dünne Neutralrothlösung (1 cc kalt gesättigte wässerige Neutralroth- lösung und 100 cc physiologische Kochsalzlösung). Wird eine Oese mit einem kleinen Tropfen frischen Gonorrhoeeiters versetzt und im hängenden Tropfen oder nicht fixirten Präparat untersucht, so färbt sich ein Theil der iutracellulären Gonokokken tief roth, vielfach ohne dass sich irgend ein anderer Bestandtheil der Zellen mit färbt; nur selten färben sich gewisse Kugeln leuchtend roth, die zur Verwechs- lung keinen Anlass geben können. Die specifischen Granulationen werden dabei leicht gelb gefärbt, die Kerne bleiben meist ungefärbt. Neben gefärbten können ungefärbte Gonokokken liegen. Bei An- regung amöboider Bewegungen der Leukocyten können schon gefärbte intracelluläre Gonokokken sich entfärben, wenn sie dabei aus dem körnigen Protoplasma in den homogenen Randsaum der Leukocyten gelangen. Er glaubt daher nicht, dass sich bloss abgestorbene oder absterbende Leukocyten färben. Theilungen intracellulärer gefärbter Gonokokken und Eigenbewegung derselben hat Verf nicht gesehen. Zellen mit wenig Gonokokken zeigen meist lebhaftere Bewegungen als mit Gonokokken vollgestopfte ; letztere haben meist auch gefärbten Kern. Bei anderen gonokokkenälmlichen Kokken hat Verf. nicht so schnelle Färbung mit Neutralroth gesehen wie bei Gonokokken. ^) Vgl. das vorige Referat. XVII, 1. Referate. 113 Ex tr a c elliilä r e Gonokokken färben sich im hängenden Tropfen selbst nach tagehmgem Aufenthalt darin mit der dünnen Neiitral- rothlösung nicht. Dagegen lassen sich mit stärkerer Neutralroth- lösimg (20 cc der kalt gesättigten Neutralrothlösung auf 100 cc Wasser) in fixirten Präparaten sowohl intra- wie extracelluläre Gono- kokken tief roth färben , während die Kerne schwächer gefärbt bleiben, so dass sie die Gonokokken nicht verdecken. Czaplewski (Köln). '! Spirig, W. , Die Strepthothrix- (Actinomyces-) Natur des Diphtheriebacillus (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXVI, 1899, No. 18, 19, p. 540—541.) Spirig beobachtete in alten, lange (bis ein Jahr und länger) stehenden Culturen von Diphtheriebacillen in einigen Röhrchen Colo- nien, welche central oder am Rande der Colonieform sich anschliessend kreideartige feine Auflagerungen zeigten. Er fasst dieselben als ein weiteres Entwicklungsstadium — das der Mycelbildung ^ der Diphtheriecolonie auf. Mikroskopisch fanden sich neben typischen Keilstäbchen kokkenartige Bildungen verschiedener Grössetheils frei, theils in nicht mehr färbbaren Fäden, daneben spärlich homogene, unseptirte und unverzweigte Mycelfäden. Auf frischem Löffler- Serum entstanden daraus recht dichte Fadengeflechte mit Fragmen- tation und Spirulineubildung ohne Verzweigung und ohne Septirung. Aechte Sporen mit Sporenfärbung waren nicht nachweisbar. Verf. glaubt es mit einer Streptothrixformation zu thun zu haben und verweist auf eine spätere ausführliche Publication. Czaplewski {Köln). Prettner, M., Die Zuverlässigkeit der STRAUSs'schen Methode (Centralbl. f. Bacteriol. Abth. 1, Bd. XXVI, 1899, No. 18, 19, p. 503). Prettner erklärt die STRAuss'sche Methode der intraperitonealen Impfung von rotzverdächtigem Material in die Bauchhöhle von männ- lichen Meerschweinchen für das beste diagnostische Mittel bei Rotz ; „immer dringen bei dieser Impfmethode die Bacillen in das Hoden- gewebe ein und verursachen, auch wenn sie nur wenig virulent oder in geringer Zahl vorhanden sind, doch immer die typische Hoden- schwellung längstens am 3. bis 4. Tag nach der Injection." Bei ^) Soll wohl heissen Hyphenbildung. Ref. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 1. 114 Referate. XVII, 1. intraperitoneler lufectiou von 1 cc Boiiillouciiltur von Agarculüir 1. Gen. stammend, schwellen die Hoden bereits in 24 Stunden an; die Schwellung erreicht ihr Maximum am 3. Tag. Die Meerschweinchen sterben meist am 5. bis 6. Tage und überleben nie den 8. Tag. Dabei kann bereits am 2. Tage der Rotzbacillus leicht aus den Hoden gezüchtet werden. Durch mehrfache schnelle Passage kann die Virulenz sehr gesteigert werden, wenn man nie die Eiterbildung abwartet. Eine alte Glyceringelatinecultur rief zwar keine Infection, wohl aber (wahrscheinlich toxische) vorübergehende Hodenschwellung hervor. Bei Impfung mit Eotzmaterial kann im Gegensatz zu Impfung mit Reinculturen die Infection viel chronischer verlaufen. Aus käsigen Herden lässt sich dann aber der Rotzbacillus doch noch cultiviren, wenngleich bei mikroskopischer Untersuchung nur sehr wenige Eotz- bacillen nachweisbar sind. Czajileivshi {Köln). D. Botanisches. Pleiige, H., Ueber die Verbindungen zwischen Geissei und Kern bei den S c h w ä r m e r z e 1 1 e n der M y c e - 1 z e n und bei F 1 a g e 1 1 a t e n ; und über die an Metazoen aufgefundenen Beziehungen der F 1 i m m e r a p p a r a t e zum Protoplasma und Kern (Verhandl. des naturhist.-med. Ver. Heidelberg N. F. Bd. VI, 1899, 3, p. 217 m. 1 Tti.). Plenge, welcher bei Bütschli arbeitete, ist zu sehr interessanten Befunden über die Verbindungen zwischen Geissei und Kern gekom- men. Als Ausgangsmaterial dienten sich aus Mycetozoenschwärmern entwickelnde Schwärmzellen aus Heuinfus. Durch gewisse Färbungen auf einen an der Basis der Geissei ins Innere der Schwärmerzelle fortgesetzten birnförmigen Körper aufmerksam geworden, suchte er diese Verhältnisse zuerst am lebenden Object zu studiren und verfuhr dabei wie folgt : „Ein in absolutem Alkohol einige Tage aufbewahrtes, möglichst dünnes Deckglas wird sauber abgetrocknet, dann zwischen den Fingerspitzen mit einer Spur reinen Glycerins gerieben bis fast zur Trockne und mit einem sauberen weichen Tuche vorsichtig gerei- nigt. Es gelingt auf diese Weise, eine äusserst dünne und gleich- massige Schicht aus einem Tropfen CulturÜüssigkeit herzustellen, indem XYII, 1. Referate. 115 man die überschüssige Flüssigkeit abgiesst." Die Schwärmerzellen gleichen vollständig den als Mastigamöben beschriebenen Protozoen. Auf die nähere Schilderung der beobachteten Structurverhältnisse kann hier nicht eingegangen werden. Interessant ist die Beobachtung, dass mitunter die schlagende Geissei ihren Platz im Protoplasma wechselte, und dass an der Stelle, wo sie vordem gewesen, ein längere Zeit stehen bleibendes Pseudopodium zurückblieb. Weitere Aufschlüsse ergaben gefärbte Präparate von abgetödteten Schwärmern, wobei er schliesslich nach einem Hinweis von Lister folgendermaassen verfuhr : Den durch Osmiumdämpfe oder Vermischung mit einer Fixir- flüssigkeit abgetödteten Tropfen liess er soweit abdunsten, bis nur noch eine ganz kleine Spur Flüssigkeit darin zurückblieb. Dann kamen die Deckgläschen oder Objectträger für 24 Stunden in eine Schale mit absolutem Alkohol (mit Jodzusatz, falls vorher Sublimat verwendet wurde). Von Fixirflüssigkeiten waren am besten Osmiumsäure in Lösung oder als Dampf, kaltgesättigte Sublimatlösung in Wasser oder O'öprocentiger Kochsalzlösung, HERMANN'sche Flüssigkeit und Pikrin- schwefelsäure, weniger gut Pikrinessigsäure, Alkohol oder verdünnte Chromsäure (letztere besser mit einigen Tropfen einprocentiger Osmium- säure). Die Deckgläschen wurden stets mit Wachsfüsschen gestützt. Die besten Färbungsresultate ergab die Anwendung der Heidenhain- schen Färbungsmethode mit 1*5- bis 2procentiger Eisenalaunlösung und halbprocentigerHämatoxylinlösung in Wasser (dazwischen Abspülen mit destillirtem Wasser gegen Niederschläge.) ControUe unter dem Mikroskop. Anilinfarben gaben durch Farbstoffniederschläge zu leicht zu Täuschungen Anlass. In der Eisenalaunlösung erscheint der birn- förmige Körper der Schwärmerzellen hellgelblich glänzend und wird nach Zusatz der Hämatoxylinlösung schwarz mitsammt der Geissei. Man kann hier die Färbung unterbrechen oder, wenn Alles tief schwarz geworden ist, durch Differenziren mit schwächerer Eisenalaun- lösung die Details herausarbeiten. Untersuchen ohne grossen Unter- schied in Wasser oder Canadabalsam. Man sieht dann die Geissei ziemlich dunkel gefärbt, an der Körperoberfläche in einem etwas dunkleren Knöpfchen endigend. Daran schliesst sich, oft ziemlich gleichmässig mittelstark gefärbt, das im Leben als helles Bläschen erscheinende Gebilde als ein birnförmiger Körper mit seinem ver- jüngten Ende an. Dasselbe ist als kugelförmiger Kern mit einem zur Geisseibasis führenden Verbindungsstück aufzufassen. In ihm liegt ein grosser Kernbinnenkörper (gut vom halben Durchmesser des Kerns oder mehr). Mitunter lässt sich ein dunkler gefärbter 8* 116 Referate. XVII, 1. Achsenfaden von der Geisseibasis bis an den Kernbinnenkörper ver- folgen. Auf weitere Structnrdetails muss hier verzichtet werden. Feinere Striicturverhältnisse der Geissei konnten nicht nachgewiesen werden. Dieselbe war meist gleichmässig gefärbt. — Bei einigen Flagellaten wurden weniger prägnante Bilder enthalten. Verf. giebt eine ausführliche Besprechung von etwa vergleichbaren Befunden aus der Literatur. Ueber die Deutung des erhaltenen Bildes drückt sich Verf. vorsichtig aus, weist aber auf die Beziehungen hin, welche zwischen den Geisselapparateu der Protozoen in den Schwanzachsen- fäden von Spermatozoen (Eisner 1874) bei Pflanzen und Thieren (Henneguy und Lenhossek 1898) und Wimperapparaten der Flimmer- zellen der Metazoen zu bestehen scheinen. Geissein und Wimpern könne mau wohl mit einem gewissen Rechte als gleichwerthige Gebilde ansehen, ob aber auch die Knötchen an der Geisseibasis mit den « Basalkörperchen der Flimmerzellen verglichen werden dürfen, konnte er nicht mit Sicherheit entscheiden. Cxapletvski (Köln). Zumstein, H., Zur Morphologie und Physiologie der Euglena gracilis Klebs (Pringsheim's Jahrb. f. wiss. Botan. Bd. XXXIV, 1899, p. 149—198). Die Resultate der genannten Arbeit liegen im allgemeinen den Interessen dieser Zeitschrift fern. Ich begnüge mich mit Erwähnung der vom Verf. beobachteten und nach folgender Methode tingirten Leukoplasten. Man fixire das Material mit Chromessigsäure (nach Strasburger) ^ und färbe nach flüchtiger Abspülung mit sehr ver- dünnter wässeriger Lösung von Gentianaviolett. Man kann alsdann die Präparate auf dem Objectträger langsam antrocknen lassen und in Canadabalsam einschliessen. Küster (München). Lagerheim, G., üeber ein neues Vorkommen von Vibri- 01 den in der Pflanzenzelle (Ofversigt af k. Svenska Vet.-Akad. Förhandlingar 1899, No. 6). Zellenorgane, welche oftenbar den von Swingle in Florideen ge- fundenen und als Vibrioiden bezeichneten Inhaltskörpern nahe stehen, hat Verf. in den Zellen von Ascoidea rubescens beobachtet. Sie sind am leichtesten in alten , fettfreien Zellen nachzuweisen , da sie in den jüngeren oft von Fetttröpfchen verdeckt werden. Die Vi- brioiden liegen meist in grosser Zahl im Plasma und sind in älteren ^) Strasburger, E., Botanisches Prakticum, 2. Aufl., p. 353, XVII, 1. Referate. 117 Zellen parallel zur Zellenlängsachse orientirt, sie sind schwach licht- brechend , optisch isotrop und erinnern in ihrer Form an die der Bacterien. — Zur ihrer Färbung sind die Triphenylmethanfarbstoffe die geeignetsten , und zwar Fuchsin , Diamantfuchsin , Methylviolett, Gentianaviolett, Dahlia und Erythrosin ; gute Färbungen Hessen sich ferner mit Orseillin, Jodgrün, Safranin, Cyanin und Magdalaroth er- zielen. Ungeeignet sind die Thiazine, Ptlanzenfarbstotte, wie Hämat- oxyliu und Orcein. Empfehlenswerth ist Ziel's Carbol- Fuchsin so- wie Ehrlich's Anilinwasser-Gentianaviolett, wenn man bei Anwendung des letzteren die Präparate mit Jod- Jodkalium nachbehandelt. Ruthe- niumroth färbt die Vibrioiden rosenroth, Jod gelb. Gegen Säuren und Alkalien verhielten sich (bei Untersuchung von Alkoholmaterial) die Vibrioiden widerstandsfähig, durch Eau de Javelle wurden sie zerstört. Mit Millon's Reagens Hess sich zwar keine Färbung er- zielen, die früher genannten Reactionen sprechen aber gleichwohl für die plasmatische Natur der Vibrioiden. „Sowohl in dieser wie in anderen Hinsichten zeigen die Vibrioiden eine so grosse Ueberein- stimmung mit den ZiMMERMANN'schen Nematoplasten, dass sie an die Seite dieser zu stellen sind, wenn man sie nicht direct damit identi- ficiren will." Küster {München). Schutt, F., Centrifugales Dickenwachsthum der Membran und extramembranöses Plasma (Pringsheim's Jahrb. f. wissensch. Botan. Bd. XXXIII, 1899, p. 594—690). Die vorliegende Arbeit beschäftigt sich mit dem feineren Bau der Membranen und der Existenz extramembranösen Plasmas bei Peridineen, Diatomeen und Desmidiaceen, die Verf. auf Grund der Uebereinstimmung im Bau der Zellhäute als Plakophyten zusammen- fasst. — Als mikrotechnisch interessant entnehmen wir der Arbeit folgende Einzelheiten : Die Membran der Plakophyten ist durchbohrt von zahlreichen feinen Poren, die dem Cytoplasma den Austritt aus dem Zelleu- gehäuse gestatten. Bei den Peridineen gelingt der Nachweis des extramembranösen Plasmas dadurch, dass mau durch schwach wir- kende Reizmittel die Zelle zum Ausstossen des Cytoplasmas nöthigt. Setzt man vom Deckglasrand aus Formalin in sehr verdünnter Lösung zum Präparat, so tritt eine allmähliche Schädigung der Peridineen- zellen ein, die sich zunächst in Contraction der Chromatophoren, später in der Bildung wasserheller, kaum sichtbarer, feiner Streifen neben der Zelle ausspricht. Mit verdünnter Lösung von Gentianaviolett 118 Referate. XVII, 1. lassen sich die Streifen färben nncl hiernach als Bündel von sehr feinen, langen Fäden erkennen, die alle von der Membran ihren Ur- sprung nehmen. — Es gelang übrigens auch, durch Einwirkung von Gentianaviolett allein bereits die Zellen zum Ausspinnen der Fäden zu bringen, wodurch wenigstens klar wird, dass die Bildung der Fäden keine specifische Wirkung des Formalins ist. — Hinsichtlich der Substanz der Fäden ist ihre plasmatische Natur als wahrscheinlich anzunehmen. An einer als Cyclotella socialis bestimmten D i a t o m e e beob- achtete Verf. eigenartige Büschel von Fäden, deren mikrochemische Identificirung Schwierigkeiten machte. Ihre Indiftereuz gegenüber Alkohol, einprocentiger Essigsäure und rauchender Salzsäure schloss ihre Krystallnatur aus. Durch Eau de Javelle schienen sie nicht angegriffen zu werden, auch nach 12stündiger Einwirkung von 20procentiger Kalilauge waren sie noch zu erkennen. Safranin und Hämatoxylin färbten sie nicht merklich. Eiweisskrystalle und plasma- tische Gebilde sind daher ebenfalls ausgeschlossen, Versuche mit Chlor- zinkjod bewiesen ferner, dass sie auch nicht aus reiner Cellulose bestehen. Auffällig ist ihr starkes Lichtbrechungsvermögen. „In Styrax, das viel stärker lichtbrechend ist als die Diatomeenschaleu und darum als besonders gutes Medium zur Beobachtung derselben dient, sind sie fast unsichtbar; sie müssen also eine stärkere Licht- brechung haben als die verkieselten Diatomeenschalen." — Zwischen gekreuzten Nicols (mit Gypsplättchen Roth I Ordnung) lassen sie trotz ihrer Feinheit Doppelbrechung erkennen. — Die fraglichen Gebilde stellen demnach wohl eine eigene Cellulosemodification dar, die sich von der Substanz der Diatomeenhäute mindestens durch Abwesenheit der Kieselsäure unterscheidet. Zur Färbung extramembranöser Plasmaklümpchen verwandte Verf. Hämatoxylin. Küster {München). Nestler, A., Die Blase nzellen von Antithamnion Plu- m u 1 a (E 1 1 i s) T h u r. und Antithamnion c r u c i a t u m (Ag.) Näg. (Wissensch. Meeresunters, herausgeg. v. d. Commission zur Untersuch, d. deutsch. Meere ; N. F. Bd. III, 1898). Die von früheren Autoren schon wiederholt beschriebenen „Blasenzellen" der im Titel genannten Algen zeigen Anilin- farbstoffen gegenüber ein in mehrfacher Hinsicht interessantes Ver- halten. — Methylgrün in einprocentiger Essigsäure vermischt mit XVII, 1. Referate. 119 dem g-leichen Quantum Chloralhydrat färbt iiacli kurzer Einwirkung die Blasenzellen und auch ihre jüngsten Entwicklungsstadien deutlich smaragdgrün , während die übrigen Zellen farblos bleiben. Arsen- freies AniUnblau (in Meerwasser gelöst) wird von den Blasenzelleu intravital gespeichert. Bei Anwendung sehr verdünnter Lösungen wird der intravital gespeicherte Farbstoff erst nach Zusatz verdünn- ter Säuren oder Chloralhydrat in den Blasenzellen sichtbar werden. Desgleichen wird auch Tannin von den Blasenzellen intravital ge- speichert ; Nachweis durch Zusatz von Eisenchlorid. — In den Blasen- zellen liegen häufig leiste nförmige Bildungen, über deren Natur der Verf. durch verschiedene Reactiouen Näheres zu ermitteln versucht hat. Bei Zusatz von destillirtem Wasser verschwinden die Gebilde sofort. Bei Zusatz von Jod in Meerwasser erfolgt Zersetzung des Zellinhalts. Lässt man zu einem in Meerwasser liegenden Prä- parat absoluten Alkohol zutreten, so werden die Leistengebilde un- sichtbar, die Blasenzellen füllen sich mit einer grauen, körnigen Masse. Ersetzt man den Alkohol wieder durch Meereswasser, so verschwindet der körnige Inhalt und an Stelle der Leistengebilde er- scheint, auch wenn die letzteren in Zweizahl vorhanden waren, nur eine einzige. Arsenfreies Anilinblau färbt die Leisten hellblau , die Membranen der Blasenzellen dunkelblau; Jodalkohol veranlasst gelb- braune Färbung, Salpetersäure Gelbfärbung. Nach mehrstündiger Einwirkung der MiLLON'schen Reagens färben sich die Leisten ziegel- roth. - — Die in Frage stehenden luhaltskörper bestehen offenbar aus eiweissartigen Verbindungen. Küster {München). Czapek, F., Zur Chemie der Z e 1 1 m e m b r a n e u b e i d e n L a u b- und Lebermoosen (Flora Bd. LXXXVI, 1899, p. 361—381.) Ueber das mikrochemische Verhalten der Mooszellmembrauen liegen bereits verschiedene Angaben vor. Gjokic ^ fand, dass die Holzstotf- reagentien an den Zellwänden der Moose keine Reaction veranlassen. Der Nachweis von Cellulose ist nach ihm mit Schwierigkeiten ver- bunden. Rüge ^ constatirte, dass die mechanischen Zellelemente erst nach Erwärmen mit Kalilauge Cellulosereaction geben. Kalte Kali- lauge erzeugte Gelbfärbung der Membranen, mit Eisenchlorid färbten 1) Oesterr. Botan. Zeitschr. 1895, No. 9. -) Rüge, Beitrag zur Kenntniss der Vegetationsorgane der Leber- moose (Flora 1893, p. 301). 120 Referate. XVII, 1. sie ' sich blauschwarz. Rüge schloss aus diesen Reactionen auf einen gerbstoffartigen Körper. Weitere liurze Mittheilungen über das mikro- chemische Verhalten der Äloosmembranen gaben Krasser, Correns und Kamerling. ^ Die Beobachtungen des Verf. ergaben Folgendes: „1. In der Regel erhält man bei den Muscineen keine directe Cellulosereaction der Zellwände, wohl aber in allen Fällen nach kürzerem oder längerem Kochen mit Natronlauge. 2. Sehr häufig geben die Zellhäute der Moose die MiLLON'sche Reaction oder eine schwarzgrüne Eisenreaction, sowie lebhafte Gelb- färbung mit kalter Natronlauge. Sehr oft schliessen sich MiLLON'sche Reaction und Eisenprobe gegenseitig aus, während sie in anderen Fällen an demselben Objecto neben einander zu erzielen sind." Die Membransubstanz, welche Färbung der Zellhäute mit dem MiLLON'schen Reagenz veranlasst, und zu deren Studium die Sphagnum- arten sowie Trichocolea Tomentella geeignetes Versuchsmaterial geben, lässt sich isoliren. Sie besitzt phenolartigen Charakter und wird darum vom Verf. als „Sphagnol" bezeichnet. Die gerbstoffartige Verbindung, die von Rüge zuerst beobachtet wurde, und welche in Mastigobryum trilobatum, in allen Gottschea- Arten, Leucobryum glaucum und Dicranum reichlich auftritt, lässt sich ebenfalls isoliren und wird vom Verf. als „Dicranumger b- s ä u r e" beschrieben. Es folgt eine eingehende Schilderung der Darstellungsverfahren und der chemischen Eigenschaften des Sphagnols wie der Dicranum- gerbsäure, und ein Verzeichnis der untersuchten Laub- und Lebermoose. Das Sphagnol ist in den Zellwänden offenbar in chemischer Bindung vorhanden. Die intensive Cellulosereaction der Membranen nach Extraction des Sphagnols weist darauf hin, dass in den Zell- häuten von Sphagnum ursprünglich ein Sphagnolcelluloseäther vorlag. Nach Sicherstellung des lladromalcellulosides - — „wir können analog der Benennung ,Glukosid' in solchen Fällen auch von ,C e 1 1 u 1 o s i d e n' sprechen" — haben wir einen zweiten Fall von aromatischen Cellu- loseresten in Zellmembranen hierdurch kennen gelernt. Sphagnol giebt mit dem LiEBERMANN'schen Reagenz röthlicli-braune Färbung, mit dem MiLLON'schen Reagenz kirschrothe, mit Hadromal plus Salz- säure ebenfalls rothe Färbung. • 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV. 1898, p. 125. -) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVI, 1899, p. 119 ff. XVII, 1. Referate. 121 Mit starker Nntroiilauge lässt sicli aus Spliagiiiim eine ansehn- liche Menge „Pektinsnbstanz" ausziehen. Die Dicranumgerbsäure ist vermuthlich ebenfalls in chlor- artig-er Bindung in der Zellmembran vorhanden , da es sich bei ihr um eine wasserlösliche Substanz handelt und trotzdem aus den Membranen durch kochendes Wasser unter gewöhnlichem Luftdruck keine Siniren von ihr extrahirt werden können. Die Zellwände der Protone mata verschiedener Laubmoose geben direct Cellulosereaction und enthalten nie Sphagnol oder Gerbsäure. Küster {München). Chalou, T., NouveUe serie d'experiences sur les colo- rations micro-chimiques des parois cellulaires (Bull, de Soc. Roy. de Botan. de Belgique t. XXXVI, fasc. 2, 1898, p. 12—28.) Die vorliegende Arbeit bringt eine Reihe von Detailangaben, aus welchen einige hier hervorzuheben genügen mag. Eine Reihe von Parallelversuchen mit Hämatoxylin und Benzo- purpurin unterrichtet über die Abweichungen der Tinctionsresultate, je nachdem die Präparate direct oder erst nach Vorbehandlung mit Eau de Javelle in die Farbstofflösung gebracht werden. Als empfehlenswerthe Methoden zu Doppel färbungen nennt Verf. folgende. Preussisch Blau und Safranin (nach Brun) : 1 g Preussisch Blau und 0*25 g Oxalsäure werden in einer geringen Quantität Wasser gelöst, die Lösung wird auf 100 cc verdünnt. Man belässt die Präparate 5 bis 10 Minuten in dieser Flüssigkeit und überträgt sie dann nach sorgfältiger Waschung mit destillirtem Wasser in eine Lösung von folgender Zusammensetzung: 0"50 g Alaun in 10 g Wasser, 0*50 g Safranin in 10 Alkohol gelöst und mit einander gemischt. — Aniliublau-Magentaroth (nach Barrett): die Schnitte werden zunächst mit einprocentiger Anilinblaulösung in starker Essigsäure und dann mit schwächerer, aber ebenfalls stark essigsaurer Lösung von Magdalaroth behandelt. Küster {Müncheji). Pollacci, P. , Intorno alla presenza deU'aldeide for- mica nei vegetati [Ueber das Vorkommen des Formaldehyds in den Pflanzen] (Atti. R. Ist. Botan. deirUniv. di Pavia N. S. vol. VI, 1899, p. 45—48). Die Arbeit bringt neue Angaben betreffend den Nachweis des 122 Keferate. XVII, 1. Formalclehytls in grünen, assimilirenden Pflauzeutbeilen. Am ausführ- licbsten wird die Farbenreaction bebcindelt, die sieb durcb Zusatz von Codein und Scbwefelsäure zu dem aus grünen Blättern ge- wonnenen Extract erzielen lässt. — Von einer mikr ocbemiscben Verwendung der vom Verf. genannten Reactionen ist in der vor- liegenden Arbeit niebt die Rede. Küster {München). Lidforss, B., lieber den Cbemotropismus der PoUen- scbläucbe (Ber. d. Deutseben Botan. Gesellscb. Bd. XVII, 1899, p. 236—242). Zur Untersuebung des Cbemotropismus der Pollenscbläucbe em- pfieblt Verf. den von Molisch ^ bereits benutzten Pollen von Nar- cissus Tazetta. Hiusicbtlicb der Metbodik folgte Verf. den Angaben MiYOSHi's - oder verfubr in der Weise, „dass eine Capillare mit einer noch flüssigen Gelatinelösung des zu untersucbenden Stoifes injicirt und dann nacb dem Erstarren der Gelatine in den mit Pollenkörnern besebickten Gelatinetropfen bineingebracbt wurde". — Verf. kommt zu dem Resultat, dass Eiweissstoffe im Stande sind, Pollenscbläucbe cbemotropiscli zu reizen. • Küster {München). Roseilberg, 0., Physiologisch -cytologiscbe Unter- suchungen über Drosera rotundifolia L. Upsala 1899, 126 pp., 8*^, m. 2 TU. Die Erwähnung der nachfolgenden Resultate des Verf. dürfte für unsere Zwecke ausreichen. Die Unterscheidung von Erythro- und Kyanophilie für die Kerne des Pollenkorns lässt sich nach den Erfahrungen des Verf. an Drosera rotundifolia nicht aufrecht erhalten. Nicht nur die beiden genera- tiven, sondern auch der vegetative Kern sind meist kyanopbil. Sogar unter den beiden generativen Kernen sind zuweilen Unterschiede zu bemerken, indem der eine kyanopbil, der andere erytbrophil ist. Wenn die Exinen von Pollenkörnern verschiedener Antberen sich bald roth, bald blau färben, so wird dieser Unterschied nacb Verf. auf vorüber- gehend alkalische, beziehungsweise saure Reaction der Häute zurück- ^) Molisch, H., Zur Physiologie des Pollens (Sitz.-Ber. d. k. Acad. d. Wiss. Wien, Math.-Naturw. Cl. Bd. CII, Abth. 1, 1893, p. 423; vgl. diese Zeitschr. Bd. X, 1893, p. 538). -) MiYOSHi , M. , Ueber den Cbemotropismus der Pilze (Botan. Zeitg. Bd. LH, 1894, p. 3—4; vgl. diese Zeitschr. Bd. XI, 1894, p. 106). — MiYOSHi verwandte mit Lösungen injicirte Blätter, Capillarröhrchen u. a. XVII, 1. Referate. 123 zuführen sein. Völlig ausgereifte Körner verhalten sich völlig gleich. Das ungleichartige Verhalten der Kerne zu Farbstoffen führt Verf. mit Strasburger auf ernährungsphysiologische Diiferenzen zurück. Fütterung der Drosera-Blätter bringt verschiedene cytologische Veränderungen — besonders in den Drüsenzellen — mit sich. Vor allem wird der Kern immer kleiner , während das Chromatin sich stetig vermehrt und zunächst in Form von Körnern an den Knoten- punkten des Liningerüstes sichtbar wird. Die Körner vereinigen sich allmählich zu kürzeren oder längeren Stäbchen, durch deren Verschmelzung bei anhaltender Eeizwirkung schliesslich ein einziger Faden entsteht mit reichlichen anastomosirenden Verästelungen. Der Xucleolus wird während des Verdauungsprocesses immer kleiner, die Kernmembran immer undeutlicher. Die Tapetenzellen sind vierkernig. Die erste Zelltheilung erfolgt durch Karyokinese, die zweite Theilung erfolgt karyokinetisch, wenn die ersten Tochterkerne rundlich, — amitotisch , wenn diese uieren- förmig gestaltet waren. Auch die Kerne der Tapetenzellen fand Verf. reich an Chromatin und dieses oft zu chromosomenartigen Klumpen vereinigt. Küster (München). Richter, 0., Ein neues Macerationsmittel für Pflanzen- gewebe (Oesterr. Botan. Zeitschr. Bd. LV, 1900, p. 5). Das von Maxgix angewandte Macerationsverfahren bestand darin, dass die Gewebeschnitte in schwaches, etwa lOprocentiges Ammoniak gebracht werden, nachdem sie 24 Stunden in einem Gemisch vou Salzsäure und Alkohol (1:5) gelegen haben. Aus der ursprünglich in Ammoniak unlöslichen Pektinsäureverbindung, welche die Mittel- lamelle zusammensetzen soll, wird nach Mangin durch den Säure- alkohol die Pektinsäure frei gemacht, die sich dann in Ammoniak löst. Im Gegensatz zu Mangin's Deutung stehen die Resultate des Verf. , welcher den Nachweis erbringen konnte , dass concentrirtes Ammoniak dir e et die Gewebe in ihre einzelnen Zellen zu zerlegen vermag. — Es kam in dreifacher Weise zur Anwendung: siedend, kalt und bei einer Temperatur von etwa 40 ^. Mit siedendem Ammoniak gelang völlige Maceration des Kar- toffelknollenparenchyms nach einer Minute. Die Zerlegung des Ge- webes war eine völlige , die Stärkekörner blieben gut erhalten. — Das Endosperm von Ricinus wurde mit 5 Minuten währendem Kochen völlig macerirt. Die Aleuronkörner mit Globoid und Krystalloi'd blieben gut erhalten und verschwanden erst bei Behandlung der Prä- 124 Referate. XVII, 1. parate mit Glycerin. — Steiigelstückclien von Cucurbita Pepo wurden 15 bis 20 Minuten gekocht. Die Siebröhren blieben gut erhalten, die Plattentheile klafften deutlich von einander, die Chlorophyll- körner nebst ihren Einschlüssen von Assimilationsstärke blieben eben- falls conservirt. Bei einer Temperatur von 40*^ wurde Ilolz von Taxus baccata in 4 Tagen, Holz von Diospyros Ebenum nach 11 Tagen völlig macerirt. Die humusartige Substanz des letzteren, die Mem- brankrystalle des ersteren blieben erhalten. Mit kaltem Ammoniak macerirte Verf. Kartoffelperiderm in 23 Tagen. In den Zellen fielen Sphärite einer nicht näher unter- suchten Substanz aus. Verf. giebt noch eine Reihe anderer Beispiele , welche die Leistungsfähigkeit des von ihm vorgeschlagenen Verfahrens und die Unschädlichkeit des Ammoniaks für die Inhaltskörper der Zellen be- weisen. Küster {München). E, 3Iineralogisch-Geologisches, Referent: Professor Dr. R. Brauns in Oiessen. Rosenbusch, H., Studien im Gneissgebirge des Schwarz- waldes (Mittheil. d. Grossherzogl. Badischen Geol. Landes- anst. Bd. IV, 1899, p. 9—48). Durch die Aufnahmen der Badischen Geologischen Landesanstalt und namentlich durch Sauer ist festgestellt worden, dass die Gueisse des Schwarzwaldes nach Habitus, stofflichem Bestände und Structur ebenso wie nach entwicklungsgeschichtlichen und genetischen Gesichts- punkten in zwei verschiedene Haupt-Gruppen zerfallen, in die Rench- gneisse, welche ursprünglich Sedimente, und in die Schapbachgueisse, welche ursprünglich Eruptivmassen waren. Eine dritte Gruppe, die Kinzigitgneisse, sind als contactmetamorphe Formen der Renchgneisse zu betrachten. Einzelne Sondertypen dieser Schwarzwaldgneisse sollen nun eingehender behandelt werden, und der Verf. macht mit der Untersuchung von Kohlenstoff- führenden Gneissgesteinen den An- fang. Besonders galt es, die Natur der kohligen Substanz zu er- mitteln, und die hierüber angestellten sehr iimfangreichen Unter- suchungen haben Folgendes ergeben: 1) in den Renchgneissen des Schwarzwaldes giebt es KohlenstoflI-führende krystalline Schiefer, deren XVU, 1. Referate. 125 kehlige Substanz wahrscbeinlicb organisch und jedenfalls zum Tbeil stickstoffhaltig ist, während nach der gelegentlich beobachteten hexa- gonalen Begrenzung der Blättchen daneben wohl auch Graphit vor- handen sein muss. 2) Die Kohlesubstanz dieser Gesteine war in irgend einer Form vorhanden, bevor dieselben ihren heutigen Mineral- bestand besassen. 3) Diese Kohlesubstanz ging spätestens während der Herausbildung des heutigen Mineralbestaudes in eine compactere Form, z. Th. auch in Graphit über und wurde von sämmtlichen sich bildenden Gesteinsgemengtheilen aufgenommen und eingeschlossen. 4) In diesen Gesteinen blieben nach Art der Knoteuglimmerschiefer wenig oder gar nicht veränderte Theile des ursprünglichen Bestandes erhalten, in denen die kohlige Substanz in äusserst feinstaubiger Ver- theiluug nicht in, sondern zwischen den Gemengtheilen liegt. R. Brauns. Fellentoerg, E. y. , u. Schmidt, C, Neuere Untersuchun- gen über den sogenannten Stamm im Gneisse von Guttannen (Mittheil. d. naturforsch. Gesellsch. in Bern, Jahrg. 1898, p. 81—93, m. 7 Tfln.). Im Jahre 1886 M'urde an der Grimselstrasse bei Guttannen im Gneiss ein Gebilde gefunden, das von vielen, auch competenteu Beur- th eilern für einen Stamm erklärt ist. Bei der grossen Wichtigkeit, die ein solcher Fossilrest im Gneisse hätte, muss aber die Bestimmung über allen Zweifel erhaben sein, was man bisher nicht behaupten konnte. Die Verff. haben nun eine erneute Untersuchung angestellt und namentlich auch Dünnschliffe von dem „Stamm" und seinem Nebengestein mikroskopisch untersucht, konnten aber durchaus keine Anhaltspunkte finden, welche für organischen Ursprung des Gebildes sprechen. Der vermeintliche Stamm erscheint als ein Einschluss von Amphibolit in Gneiss, der beim Faltungsprocess gewalzt worden ist. R. Brauns. Loewiusou - Lessing , F., Studien über die Eruptivge- steine (Compt. Rend. de la VII. Sess. du Congres Geolo- gique International. 1897 [St. Petersbourg 1899] p. 193 — 464 av. 4 plches.). Dieses Werk enthält a. den Versuch einer cliemischen Classification und Charakteristik der Eruptivgesteine, b. Beiträge zur Frage über die Differentiation und Krystallisation der Magmen, c. Classification und Nomenklatur der Eruptivgesteine. 126 . Referate. XVU, 1. a) Die Fragen, au deren Beantwortung es dem Verf. lag, sind folgende: 1. Giebt es bestimmte chemische Tj^en der Eruptivgesteine oder sind diese letzteren zufällige, willkürliehe Gemenge? 2. Existirt ein Zusammenhang in der Veränderlichkeit des Gehalts an verschie- denen Basen oder kann der Gehalt eines jeden Oxyds (natürlich in gewissen Grenzen) selbständig und unabhängig von bestimmten anderen Oxyden variiren? 3. Können die verschiedenen Gruppen der Eruptiv- gesteine auf Grund ihrer chemischen Zusammensetzung eine mehr oder weniger bestimmte Charakteristik erlangen? 4. Wäre es nicht möglich, in den chemischen Beziehungen der Eruptivgesteine ein Kri- terium zum Verständniss der Differentiation und der genetischen Be- ziehungen der Eniptivgesteine zu finden? Die erste Frage nach der Existenz von bestimmten chemischen Typen wird bejaht, die zweite Frage dahin beantwortet, dass es unter den Schwankungen im Gehalt an verschiedenen Oxyden solche giebt, die nicht unabhängig von einander sind , sondern sich gegenseitig bedingen, die dritte und vierte Frage wird bejaht. b) In dem zweiten Capitel werden die Ansichen über DiÖereu- tiationsvorgänge im Magma ausführlich erörtert und die weitere Ver- folgung dieser Erscheinungen und der Gesetze, welche hier herrschen, als wichtige uud interessante Aufgaben für die Petrographie der Eruptivgesteine bezeichnet. c) Die Classification der Eruptivgesteine muss von der chemi- schen Zusammensetzung ausgehen und die Eiutheilung der grossen Gruppen in kleinere Unterabtheilungen muss sich ebenfalls auf die chemische Zusammensetzung stützen. Die Structur, die mineralogische Zusammensetzung und die Bildungsweise sind für die Classification Merkmale zweiten Grades ; die Lagerungsform hat augenblicklich als classificatorisches Moment keine Bedeutung. Hieran schliessen sich Vorschläge zu einer rationellen Nomenklatur der Eruptivgesteine und den Schluss bilden Zusammeustelluugen ihrer chemischen Zusammen- setzung in Tabellen und graphisch auf Tafeln. B. Brauns. Becke , F., Der Hypersthen-Andesit der Insel Alboran (Tschermak's Mineral, u. Petrogr. Mittheil. Bd. XVIII, 1899, p. 525 — 555). Die Ergebnisse dieser Arbeit werden in folgende Sätze zu- sammengefasst : 1) Der Hypersthen-Andesit, welcher in Blöcken im Lapillituff der Insel Alboran auftritt, enthält Einsprengunge von Anorthit XVII, 1. Referate. 127 mit tiU bis 94 Proeent Anortliitg-elialt, die durch schwach ausgeprägte isomorphe Schichtung und schmale Aussenzoneu ausgezeichnet sind, Hypersthen, nach optischer Untersuchung mit 35 bis 50 Procent des Eisensilicates und diopsidähulichem Augit mit circa 25 bis 30 Procent der eisenhaltigen Verbindungen. 2) Die Basis enthält Mikrolithen von basischem Labrador, nur monoklinen Augit und Magneteisen und zeigt bei hyalopilitischer Structur ein fleckiges Aussehen, welches durch Ausscheidung grösserer Magnetitkryställchen in den hellen Flecken bedingt ist, während in der dunklen Hauptmasse die eisenhaltigen Ausscheidungen auf dem Globulitenstadium stehen bleiben. d) Die Grundmasse enthält einen merklichen Ueberschuss von SiOo , welcher bei krystalliner Entwicklung zur Quarzbilduug führt. 4) Der Hypersthen-Andesit von Alboran gehört einer extrem kalkreichen Untergruppe der Hypersthen -Andesite an, welche auch in anderen Andesitgebieten vertreten ist. Es wird vorgeschlagen, diese extrem kalkreichen Hj^ersthen-Andesite als natronarme Hyper- sthen- Andesite oder Alboranite von den normalen Hypersthen- Andesiten abzugliedern. Das andere Endglied der Hypersthen- Andesite bilden dann die natroureichen Hypersthen - Andesite oder Santorinite. Alle Hypersthen- Andesite, die Alboranite mit ein- geschlossen, sind saure Gesteine mit Si-Ueberschuss; dadurch unter- scheiden sich die Alboranite von den Labradoriten der Franzosen, welche nach Rosexbusch's Auffassung einen Uebergang zum Basalt vermitteln und chemisch durch niedrigeren SiO^- Gehalt, mineralogisch durch accessorische Olivinführung ausgezeichnet sind. B. Brauns. Loewinsou-Lessiug, F., Kritische Beiträge zur Systema- tik der Eruptivgesteine (Tschermak's Mineral, u. Petrogr. Mittheil. Bd. XVHI. 1899, p. 518—524 u. Bd. XIX, 1899, p. 169— 181j. In diesen Beiträgen erörtert der Verf. verschiedene auf die Systematik der Eruptivgesteine sich beziehende Fragen und beginnt hier mit der kritischen Durchmusterung von solchen neuen Gesteins- typen, die von ihm in seinen „Studien über die Eruptivgesteine" noch nicht berücksichtigt worden sind. Unter anderen will er den von F. Becke (siehe das folgende Referat) zu den Andesiten ge- rechneten Alboranit wegen seiner chemischen Zusammensetzung und seinem Mineralbestand als olivinfreien Hypersthen -Augitbasalt, den Santorinit als Hypersthen-Dacit bezeichnet wissen. R. Brauns. 128 Referate. XVII, 1. Becke, F., lieber Alborauit und Santorinit und die Grenzen der Andesitfamilie (Tschermak's Mineral, u. Petrogr. Mittheil. Bd. XIX, 1899, p. 182—200). Gegenüber der von Loewinson-Lessing vertretenen Ansicht (siehe vorhergehendes Referat) , dass die von dem Verf. zum Hypersthen- Andesit gerechneten Gesteine (Santorinit und Alborauit) als Hypersthen- Dacit (Santorinit) und olivinfreier Hyperstheu-Augit-Basalt (Alborauit) aufzufassen seien, wird hier gezeigt, in welcher Weise sich die Fa- milie der Hypersthen-Andesite von den Nachbarfamilien Dacit und Basalt auf Grund ihrer chemischen und mineralogischen Zusammen- setzung abgrenzen lässt. Zahlreiche Analysenresultate werden zu diesem Zwecke graphisch dargestellt und es ergiebt sich daraus in der Hauptsache Folgendes : Dacite. Mineralogische Zusammensetzung: Eiuspreuglinge von Quarz , Plagioklas (untergeordnet Sanidin) , in geringer Menge Biotit oder Hornblende oder Pyroxen. Verhältniss Ca : (Ca -[- Na -f- K) = 0*1 bis 0*5. Si- Atomzahl mit steigendem Ca-Verhältniss sinkend von 66 bis 60. Hypersthen-Andesite. Einsprengunge von Plagioklas, Hypersthen, Augit. Verhältniss Ca: (Ca -|- Na + K) = 0*2 bis 0*75. Si-Atomzahl sinkend von 62 bis 50. Zerfällt in drei Gruppen: San- torinit, normaler Hypersthen-Andesit, Alborauit. Feldspath-Basalt. Einsprengunge von Plagioklas , Augit, Olivin. Verhältniss Ca : (Ca 4- Na + K) = 0*4 bis 0*8. Si-Atom- zahl sinkend von 51 bis 44. R. Brauns. Becke , F. , Die Orientiruug der optischen Achse A in Anorthit (Tschermak's Mineral, u. Petrogr. Mittheil. Bd. XIX, 1899, p. 201—206 u. p. 243). Der Verf. hat wiederholte Messungen an Anorthit angestellt, um die zwischen seinen und Viola's ^ Resultaten bezüglich des Winkels (p der optischen Achse A bestehenden Differenzen aufzu- klären, fand aber immer nur seine früheren Beobachtungen bestätigt. Aufklärung giebt ein nachträglich eingegangener und von F. Becke mitgetheilter Brief von C. Viola , in dem C. Viola feststellt , dass in seiner Arbeit in der Interpretation dieses Winkels cp ein kleiner Fehler vorgekommen sei und dieser Winkel für die optische Achse A nicht — 72^, sondern — 62*' betrage. Ebenso muss es bezüglich der 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVI, 1899, p. 518. XVII, 1. Referjite. 129 von Viola reconstruirten Beobachtungen Klein's beisseu: cp == — 61*^. Nach dieser Verbesserung stimmen auch die von Becke und Viola nach ganz verschiedenen Methoden gefundenen Werthe für die op- tische Oricntirung- des Anorthit recht befriedigend überein. R. Brauns. Brauns, K., Beobachtungen über die Kry stallisation des Schwefels aus seinem Schmelzfluss (Neues Jahrb. f. Mineral. Beilagebd. XIII, 1899, p. 391.). Wenn man Schwefel auf einem Objectträger zwischen diesem und einem Deckgläschen sclunilzt und erstarren lässt, so krystallisiren, je nachdem der geschmolzene Schwefel massig oder stark erhitzt, schnell oder langsam gekühlt war, verschiedene Modificationen, die hier genauer beschrieben und in photographischen Aufnahmen be- sonders charakteristischer Präparate vorgeführt werden. Es wird unterschieden: 1) Rhombischer, oktaedrischer Schwefel, die bei ge- wöhnlicher Temperatur bis zu 92^ beständige Modification; kann sich bei langsamer Abkühlung des geschmolzenen Schwefels bilden. 2) Monokliner, prismatischer Schwefel, von Mitscherlich entdeckt, ist die oberhalb 95^ beständige Modification; bildet sich aus ge- schmolzenem Schwefel, wenn dieser noch einen Rest von unge- schmolzenem enthält oder wenn sich in ihm eine unbeständige Modi- fication gebildet hatte, die in der Wärme in die monokline über- gegangen war. Es sind immer leistenföi'mige durch Zwillingsbildung ausgezeichnete Krystalle. 3) Concentrisch-schaliger Schwefel, fein radialfaserige Aggregate mit concentrischen Rissen und starker Doppelbrecliung ; bildet sich spontan in unterkühlten Präparaten oder auch langsam wachsend in stark erhitzten und schnell gekühlten Schmelzen. Die Grenzfläche zwischen wachsendem und geschmolzenem Schwefel ist gerundet wie die Grenzfläche von zwei Flüssigkeiten. Diese Modification hat u. a. schon Bütschli in seinem Werk über Structuren kurz beschrieben, aber nicht als selbständig erkannt. Sie ist immer unbeständig, geht bei Zimmertemperatur in rhombischen, bei höherer Temperatur in monoklinen Schwefel (2) über. 4) Radial- strahliger, monokliner Schwefel, bildet radialfaserige Aggregate, die im polarisirten Licht ein diagonal liegendes schwarzes Kreuz geben; Doppelbrechung massig stark. Ensteht besonders leicht in stark unterkühlten Schmelzen bei plötzlicher Erschütterung; unbeständig wie die vorhergehende. 5) Radialfaseriger, rhombischer Schwefel, äusserst fein radialstrahlige Aggregate, die im polarisirten Licht ein scharfes Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 1. 9 130 Referate. XVII, 1. schwarzes Kreuz geben, dessen Arme mit den Schwingiingsrichtnng-en der Nicols zusammenfallen, Doppelbrechung schwach. Entsteht m stark erhitzten und schnell gekühlten Präparaten und ist ebenfalls unbeständig. 6) Trichitischer Schwefel, fein haarförmig gekrümmt, sehr vergänglich, entsteht nur in stark erhitzten und schnell gekühlten Präparaten, die nocli reich au zähem Schwefel sind. R. Bramis. Weiuschenk, E., Natürliche Färbungen der Mineralien (Tschermak's Mineral, u. Petrogr. Mittheil. Bd. XIX, 1899, p. 144—147). Verf. wendet sich gegen die Untersuchungen von K. von Kraatz- KoscHLAu und L. Wöhlek ^ und macht Folgendes geltend : Auch farblose Mineralien (Flusspath und Quarz) geben beim Glühen den „Geruch organischer Substanz'', riechen „empyreumatisch" oder nach „Phosphorwaserstotf", geben, im Sauerstoffstrom geglüht, Kohlensäure und Wasser , ihr Pulver färbt sich „unter Kohleaus- scheiduug" grau oder bräunlich, unter dem Mikroskop ist aber weder an dem rothen Flussspath des St. Gotthard, noch an dem tiefblauen von Wölsendorf eine Spur von opaker Substanz zu erkennen, und der dunkle Ton verliert sich sogleich bei Zusatz von einem Tropfeu Wasser. Auch pulverisirtes Fensterglas giebt, wie Rauchtopas und Amethyst, mit concentrirter Schwefelsäure eine braune Färbung, die aber bei Verdünnung der Säure wieder verschwindet; als Abscheidung von Kohle kann die Färbung daher nicht aufgefasst werden. Das Phosphoresciren kann in keinem Fall als Hinweis auf organische Substanz gelten. Aus den Untersuchungen von Wühler und Kraatz- KoscHLAU scheint dem Verf. nur das hervorzugehen, dass die Mehr- zahl der Mineralien in der Hitze flüchtige Stoffe als Einschlüsse enthalten, deren Beschaffenheit wir noch nicht kennen und deren Zugehörigkeit zu den organischen Körpern zum mindesten zweifelhaft ist ; ein Zusammenhang zwischen der leicht zerstörbaren Färbung der Mineralien mit organischen Farbstoffen ist noch nicht erwiesen. .^__ R. Brauns. 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVI, 1899, p. 125 u. 271. XVII, 1. Neue Literatur. 131 Neue Literatur, 1. Mikroskop und mikroskopische Apparate. a. Neue Mikroskope. Baker's D. P. H. microscope no. 1 (Journ. R. Microsc. See. 1899, pt. 6, p. 646). Berger's new microscope (Journ. R. Mcrosc. Soc. 1899, pt. 6, p. 649). Reichert's cbeap non-inclinable stand (Journ. R. Microsc. Soc. 1899, pt. 6, p. 647). Reichert's new microscope (Journ. Microsc. Soc. 1899, pt. 6, p. 644). Watson and Son's school microscope (Journ. R. Microsc. 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Ap. = 0'17) 6 das schwarze Kreuz durchschneidende, farbige (gelb, orange, rotli, violett, blau, grün) Ringe zeigte, liess schon mit AA (num. Ap. = 0*30) deren zahl- reiche, nach aussen blasser und undeutlich w^erdende erkennen, w'äh- rend eine 0*5 mm dicke mit AA , je einer älteren BB (num. Ap. = 0*45) und CC (num. Ap. = 0'60) je 5, 8 und zahlreiche ergab. Eine 9 mm dicke Quarzplatte zeigte mit AA die Mitte des Achsen- bildes fast glatt grün, dann 3 die am ersten Ringe beginnenden dunklen Kreuzesarme durchschneidende, mit BB 7 und mit CC zahl- reiche nach Aussen abblassende Farbenringe. Eine zweite 1 mm dicke Platte liess bei weisser Mitte erst mit BB einen, mit CC drei breitere Ringe erkennen, während die Kreuzesarme auch in dem Mittelfeld deutlich , w^enn auch etwas blasser als nach Aussen hin hervortraten. Von den schwächer brechenden Krystallen konnten beim Saphir mit BB zwei, mit CC fünf, beim Apophyllit (Fundort Tirol) mit BB noch eben der innerste , mit CC dieser und der breite helle Zwischenraum zwischen ihm und dem zweiten Ringe er- kannt werden. Höhere numerische Aperturen führten nicht w^esent- lich weiter. Eine rechts und eine links drehende Quarzplatte über einander gelegt, zeigten das Innere des bekannten Achsenbildes der Airy- schen Spiralen recht schön, und es nahm dasselbe mit BB und CC entsprechend an Ausdehnung zu. Nach Einschaltung eines Viertel-Glimmerplättchens unter -j-45^ treten an allen Platten deutlich die den positiven oder negativen Charakter anzeigenden Verschiebungen der Ringe mit den beiden Schattenpunkten auf. Eine ähnliche Veränderung des Achsenbildes bewirkt ein in gleicher Weise eingeschaltetes Gypsplättchen von loO Dippel: Beobachtung der Achsenbilder. XYII, 2. Roth 1. Ordnung jedocli in Folge des entgegengesetzten optischen Charakters des Gypses mit um 90*^ gedrehter Richtung der Schatten- punkte. 2. Parallel zur optischen Aclise geschliffen. Zwei mit gekreuzten Achsen über einander gelegte Quarzplatten zeigten unter 0° orientirt und bei Verwendung der drei genannten Objectivsysteme zwischen den Armen des dunklen Kreuzes je 1, 2 und .3 hyperbolische Curven. Bei Drehung der Platten um 45" verschoben sich die Kreuzesarme um den gleichen Winkel und er- gaben so ein Bild, wie es in den grösseren Lelirbüclieru der Physik (MuELLER-PouiLLET z. B.) Öfter dargestellt wird. IT. Zweiachsige Krystalle. 1. Senkrecht zur Mittellinie geschliffen. An einer Platte des salpetersauren Kalis oder des kohlensauren Bleies (Achsenwinkel 5^ 18') sieht man schon mit Objectivsj-stem. Ü' m ?-^<\VJV ' \\W 2. 3. Figur 2 und 3. Achsenbilder des kohlensauren Bleies unter 0" und orientirt. Objectiv AA\ Condensor 1-20. 45" I XVII, 2. Dippel: Beobachtung der AchsenbiUler. 151 ÄÄ einen ausreichenden Umfang gewährende Achsenbilder mit den geschlossenen, je einen der beiden Pole umgebenden, sowie einer Anzahl der beide Pole zugleich umschliessenden lemniscatischen Cur- ven. Diese werden bei einer Orientirung unter 0^ oder 90 ^^ von einem dunkeln Kreuz durchsetzt, dessen senkrecht zu der Verbin- dungslinie der Pole stehender Arm gleichbreit, der mit dieser dahin gehende an den Polen schmal beginnend und nach beiden Seiten hin verbreitert erscheint (Figur 2), während bei der Orientirung unter + 45*^ die Kreuzesarme in zwei, diu'ch die Pole gehende, hyperbolische, 4. Achsenbild des Aragonits unter 0" orientirt. Objectiv BB-^ Conden- sor 1-20. Achsenbild des Baryts unter +45*' orientirt. Objectiv C C\ Conden- sor 1-20. sich nach beiden Seiten verbreiternde Büschel übergehen (Figur 3). Beim Aragonit (Achsenwinkel 18° 18'), bei welchem man mittels des Objectivsystemes ÄÄ nur die Hälfte des innersten Ringes um die Pole an dem Rande des Sehfeldes erblickt, wird zur Erzielung eines ausreichenden Umfang besitzenden Achsenbildes, wie es in der nebenstehenden Figur 4 dargestellt ist, das Objectivsystem BB er- fordert. Für Borax (Achseuwiukel 28° 42'), Baryt (Achsenwinkel 37° 42') und Krystalle mit etAva gleichem Achsenwiukel reichen wie aus der beistehenden Abbildung (Figur 5) des dem letztgenannten Objecte angehörigen Achsenbildbruchstückes hervorgeht, Objectiv- systeme mittlerer Brennweite bis zur num. Ap. von etwa 0*70 nicht 152 Dippel: Beobachtung der Achsenbilder. XVII, 2. melir ans und muss mau schon zu solcheu vou kurzer Brennweite und von 0*80 und höherer num. Ap. übergehen, um einen oder einige wenige geschlossene Ringe um die Pole sichtbar zu machen, während für Krystalle von noch grösserem Achsenwinkel, wie Feldspath, Gyps u. a. selbst bei numerischen Aperturen Aon 0'90 bis 0"95 nur noch der mittlere Theil des Achsenbildes mit Bruchstücken oder dem Be- ginn der diesem zunächst gelegenen, dann auch sehr breiten, nur die niederen Interferenzfarben zeigenden Curven übersehen werden kann (Figur 6)."^ \ ^ 6. Achsenbild des GHmiuers unter +45'^ orientirt. ObjectivApochrümatimm-, Condensov 1-20. Achsenbild des Bar.yts unter — 45"' orientirt. Objeetiv CC\ halbkugelige Linse. Etwas grösseren Umfang der Achsenbilder Aon Krj^stallen mit Achsenwinkeln von 28 bis 30^ und darüber erzielte ich mit der halb- kugeligen, nahe an die Tischebene gerückten Linse, wie dieselbe ein älteres mit Polarisationsapparat versehenes Stativ von Hartnack besitzt und zwar sowohl mit dem Analysator über dem Objeetiv fdie ältere HARTXACK'sche Verwendungsweise) als über dem Ocular. ') Bei Verzicht auf ein ungetrübtes, von den oben genannten Ab- bildern freies Sehfeld und wenn man sich mit einzelnen Theilen — z. B. den geschlossenen Ringen um die Achsen — der Achsenbilder begnügt, kann man allerdings bei tiefer Einstellung des Mikroskopobjectives weiter gehen. Derart erzeugte Bilder können aber hier nicht in Betracht kommen. XVU, 2. Dippel: Beobachtung der Achsenbilder. 153 Ein A^ergleicli der Figuren 5 luid 6 mit den Figuren 7 und 8, welche von je derselben Krystallplatte und mit je demselben Objec- tivsystem aufgenommen wurde, Avird ohne weiteres über den Gewinn an Umfang der Achsenbilder das Erforderliche ergeben. 2. Senkrecht zu einer der optischen Achsen geschliffen. An verhältnissmässig starlc brechenden enge Curven bedingenden Platten, so z. B. an einer etwa 3 mm dicken Platte des Zuckers treten schon bei Beobachtung mittels der Objectivsysteme AA und . w 8. 9. Achsenbild des Glimmers unter — 45'^ Achsenbild des Ghmmers unter — 45° orientirt. Objectiv Apochromat4mm; orientirt. Objectiv Apochromat4mra; halbkuo-elis'e Linse. Condensor 1*40. BB Achsenbilder von vöUig ausreichendem Umfange mit je 7 bis 12 geschlossenen Ringen um den Pol auf. Gemäss der geschilderten, unter Verwendung der beschriebenen .,Concentrationslinsen" erlangten Ergebnisse bleiben bei schwächer brechenden, in dünne Platten geschliffenen einachsigen, wie bei über 18 bis 20^ hinausgehende Achsenwinkel besitzenden zweiachsigen Krj^stallplatten die Achsenbilder in Bezug auf ihren Umfang hinter denen, welche in dem Nörrembekg' scheu Polarisationsmikroskope be- obachtet werden können, mehr oder minder zurück. Es wird also das Beobachtungsgebiet, soweit eben möglichst vollständige Achsen- bilder in Betracht kommen, noch in gewisse Grenzen eingeschlossen. 154 Dippel: Beobachtung der Achsenbilder. XVII, 2. Diese Beschränkung fällt jedoch fort, wenn an Stelle der vorge- dachten Beleuchtnngssysteme oder Beleuchtungsliusen das den neuen grossen und auch manchen mittleren Mikroskopen in der Eegel bei- gegebene AßBE'sche Belenchtungssystem von 1'40 num. Ap. und zwar bei sehr engen Ringen einachsiger oder bei Achsenwinkeln von über 25^ zweiachsiger Krystalle in Verbinüung mit stärkeren Objectiv- systemen von O'SO bis 0-95 num. Ap.^ zur Anwendung kommt. Es werden dann die Achsenbilder, wie ein Vergleich der Figuren (5 und 8 mit der Figur 9 darthut, in ansehnlich vergrössertem Um- 10. 11. Figur 10 und 11. Unter 0^' und -j- 45'' orientirte Achsenbikler eines Perl- mutterpliittchens. Objectiv E Zeiss: Condensor 1-40. fange zur Anschauung nnd je nach der steigenden num. Ap. der Objectivsysteme denjenigen, welche das NüRREMBERo'sche Polarisations- mikroskop gewährt, sehr nahe gebracht. Die Beobachtung selir schwach brechender einachsiger Krystalle , Avie solcher zweiachsigen mit grossem, 70 bis 80*^ betragenden Achsenwinkel liefert jetzt ganz ^) Immersionssj'steme ohne Imraersionsflüssigkeit verwendet, bringen die num. Ap. nahe an l'O heran, können also, wo Trockensystem von über 0-85 bis 0-90 num. Ap. fehlen, Ersatz dafür leisten. Gehen jedoch deren Brennweiten unter 3 mm hinab , dann müssen zur Vergrösserung der Achsenbilder mit sehr engen Curvensystemen Oculare mit fünf- bis siebenfaclier Vergrösserung für das Hülfsmikroskop in Gebrauch genommen werden. I XVII, 2. Dippel: Beobaelitung der Achsenbilder. 155 befriedig-ende Ergebnisse. So sieht man z. B. mittels eines Objectiv- systemes von 0'87 num. Ap. bei der vorgedachten Platte des Apo- phyllit, dessen innerer Ring einen Durchmesser von 2'5 mm besitzt, noch 4 Ringe und den folgenden hellen Zwischenraum (in Nörrem- BERG noch den 5. Ring am Rande), die beiden Pole beim schwefel- sauren Kupfer von je 5, beim doppelten chromsauren Kali von je 3 Ringen umgeben, beim Seignettesalz die ersteren am Rande. Zudem sind die Bilder im gewöhnlichen Mikroskop lichtstärker und farben- schöner, und man kann dieselben, was bei sehr engen Ringsystemen wünschenswerth ist, nach Bedarf vergrössern ^. Welche Ergebnisse bei organischen Präparaten erlangt werden, das mag folgendes Beispiel zeigen. Ein auf der einen Fläche eben geschlitfenes , sehr dünnes Perlmutterplättcheu (Achsenwinkel etwa 12^) giebt einmal unter 0^, dann unter 45*^ orientirt, Bilder, welche etwa denen einer sehr dünnen Salpeterplatte zu vergleichen sind (Figur 10 und 11), Avährend die lemniscatischen Curven in Folge der nicht ganz ebenen anderen Fläche etwas verzerrt er- scheinen. Bei der beschriebenen Beobaclitungsweise zeigt sich insofern ein Unterschied gegenüber der mittels des NöRREMBERG'schen Polarisations- mikroskopes, als in dem Mikroskope bei kleineren Bruchstücken diese entsprechend der Brennweite des Objectivsystemes vergrössert als solche abgebildet werden und die Riugsysteme nur über das einen grösseren oder kleineren Theil des Sehfeldes einnehmende Bild des be- tretfenden Plättchens verbreitet erscheinen, während in jenem auch bei kleinen Splittern das ganze Sehfeld — allerdings nach dem Rande hin mit verschwommenen Curven — von dem Achsenbilde eingenommen wird. Dieser Umstand ist indessen nicht wesentlich störend und beeinflusst weder die Bestimmung des positiven oder negativen (.'ha- rakters, noch die mikrometerische Messung des Achsenwinkels. ^) Die beigegebenen Figuren sind, da ich im Besitze des früher von der ZEiss'schen Werkstätte angefertigten AnBE'schen Analysatoroculares (Oc. 2) bin, bei einen Abstände von 250 mm mit der Camera lucida entworfen. [Eingegangen am 7. März 1900.] 156 Hartwicli: Ueber ein neues Mikrometerocular. XVII, 2. Ueber ein neues Mikrometerocular, Von Prof. Dr. C. Hartwicli in Zürich. Hierzu zwei Holzschnitte. Die gewölinliclieii Ociilarmikrometer , deren Maassstab auf ein Glasplättcheu ein^iTavirt oder pliotograpliirt ist , das man auf das Diaphragma des Oculars auflegt, leisten gute Dienste, wenn das zu messende Object sich bezüglich der Farbe von der Umgebung, also der Beobachtungsüüssigkeit, von den nicht zu messenden Theilen des Objects deutlich unterscheidet , d. h. wenn das Object dunkler oder wenigstens scharf umschrieben ist. Wenn es irgend möglich ist, wird man sich wohl daran gewöhnen, nicht die von dem Object ein- genommenen Theilstriche des Mikrometers zu zählen, was, wenn das Object nicht völlig gleichmässig ist, recht ermüdend sein kann, son- dern man überzeugt sich, welcher Theilstrich des Mikrometers sieh am Anfange und Ende des Präparats befindet und findet die vom Object eingenommene Zahl der Theilstriche dann durch Subtraction. Ist das Mikroskop mit einer Einrichtung zum Verschieben des Objectes versehen, so gestaltet sich die Sache am einfachsten, indem mau das Präparat an den ersten Theilstrich anlehnt und dann die Grösse mit leichter Mühe abliest. Sehr viel ungünstiger nun gestaltet sich die Sache, w^enn man genöthigt ist , anhaltend in einem grösseren gefärbten Präparat ein- zelne, in der Färbung nur wenig abweichende Elemente (z. B. Bast- fasern oder Secretzellen in einer braunen Rinde) zu messen. Man muss dann die Theilstriche direct über dem zu messenden Object zählen und , wenn das überhaupt möglich ist , so ermüdet es doch bald ausserordentlich, da das Object gefärbt und meist nicht ganz gleichmässig gefärbt ist, wodurch das Erkennen der Theilstriche weiter erschwert Avird. Oft genug geht das aber wegen zu starker Färbung des Präparates überhaupt nicht, und ich habe mir dann so zu helfen gesucht, dass ich den einen Rand des zu messenden Ob- jectes auf den ersten Theilstrich des Mikrometers einstellte und den XVII, 2. Hart wich: lieber ein neues MilcrometerucuLir. 157 anderen , der den entgegengesetzten Rand bezeichnet , dadurch er- mittelte , dass ich diesen Rand des Objeetes ins Auge fasste , bei unbewegtem Auge den Tubus hob, bis das Präparat ganz undeutlicli wurde und nun den Theilstrich zu erkennen suchte , der dem ge- nannten Rand des Objeetes entsprach. Audi wenn man dabei recht sorgfältig zu Werke geht und eine gewisse Uebung erlangt hat, so bleiben Irrthümer nicht ausgeschlossen, und man muss deshalb jede Messung mehrfach wiederholen. Ich sagte mir, dass es nützlich sein würde, ein Mikrometer zu besitzen , welches gestattet , den abzulesenden Theil der Scala zu fixiren und den Abstand dann nach Entfernung des Objeetes, also durch Heben des Tubus, bequem abzulesen. Nach ei- nigen Besprechungen hat mir die mechanische Werkstätte der Herren Zulauff und Zschokke in Zürich ein Messocular con- struirt, das meinen Zwecken völlig entspricht und von dem ich annehme , dass es auch manchen anderen Mikroskopi- kern, die genöthigt sind, häufig Messungen unter ungüustigen Bedingungen auszuführen, will- kommen sein wird. Das Instru- ment lässt im Innern auf dem Mikrometer die gewöhnliche Theilung in 50 Striche erkennen und ausserdem zwei den Tlieil- strichen gleichlaufende Fäden (Figur 2). Bei der gegenwärtigen Constructiou ist der nach links stehende Faden (Figur 2 a) unbeweg- lich und läuft über den ersten Theilstrich des Mikrometers; der zweite Faden (Figur 2 h) ist vermittels der an der linken Seite des Instrumentes (Figur 1) sichtbaren Mikrometerschraube bew^eglich. Dieser letztere Faden kann dem ersten bis auf den Zwischenraum zwischen- dem ersten und zweiten Theilstrich des Mikrometers ge- nähert werden , also der kleinsten mit dem Mikrometer messbaren Grösse. Anderseits kann man ihn mit der Mikrometerschraube bis an das Ende der Scala bringen. Die Messung wird nun so aus- geführt, dass man das zu messende Object mit dem einen Rand an 1. 158 Hart wich: Ueber ein neues Mikrometerocular. XVII, 2. den feststehenden Faden bringt und den anderen, beweglichen Faden mit der Mikrometerschraiibe auf den anderen Rand einstellt. Auch bei stark gefärbten Objecten ist der über das Object weggieitende Faden gut zu erkennen. Dann wird der Tubus etwas gehoben, bis das Object verschwindet und zwischen den beiden Fäden abgelesen. In dieser Construction ist das Instrument berechnet für den Gebrauch in einem Mikroskop, dessen Tisch mit einer Vorrichtung zum Verschieben des Präparates versehen ist, so dass es keine Mühe macht, das Object an den ersten , festen Faden zu bringen. Bei einem einfacheren Stativ ohne die ge- nannte Vorrichtung macht das einige Mühe, da die Bewegung mit der Hand ausgeführt werden muss. Die Herren Zulauff und ZscHOKKE fertigen daher das Instrument auch SO an, dass beide Fäden beweglich sind. Das Aeussere desselben und die leichte Hand- habung desselben wird dadurch nicht beeinträchtigt. Es befindet sich dann an den Fortsätzen jederseits des Instrumentes (Figur 1) eine Mikrometerschraube, von denen jede einen Faden in Bewegung setzt. In der zuerst beschriebenen Construction kostet das Ocular 40 Franken, in der zuletzt genannten 48 Franken. Es functionirt tadellos. [Eingegangen am 22. .Juli 1900.] XVII 2. Albii'clit: Eine neue Construction eines Mikrotoms. 159 Eine neue Construction eines Mikrotoms mit scliiet'er EV)ene mid miunterbrochen wirken- der Mikrometerschraube von der Firma C. Keichert in Wien. Von Dr. H. Albrecht in Wien. Hierzu ein Holzschnitt. Das von der Firma C. Reichert in Wien coustruirte neue Mikrotom erscheint einer Besprechung werth zu sein, weil es einige wichtige Vortheile in der Construction gegenüber den gebräuchlichen Schlittenmikrotomen besitzt. Dieselben bestehen vor allem darin, dass der Objectschlitten nicht lose auf einer schiefen Ebene, sondern in einer festen Führung zwischen zwei sogenannten Schwalben- schwanz förmigen Metallschieuen läuft, und dass die Mikrometer- schraube, wenn sie abgelaufen ist, durch eine recht einfache und sinnreiche Vorrichtung, derart um 180*^ umgelegt werden kann, dass daraus eine Art von ununterbrochener Wirkung derselben re- sultirt. Das Mikrotom ist aus Gusseisen angefertigt, daher von ent- sprechender Schwere und Stabilität und besitzt eine Bahnläuge für den Messerschhtten von 28 cm. Der auf drei tadellos gearbeiteten, vorspringenden Schienen laufende Messerschlitten ist ebenfalls schwer und mittels einer Handhabe vollkommen sicher, gleichmässig und leicht zu führen, so dass eine Hebung desselben beim Schneiden harter Objecte nicht möglich ist. Der Objectschlitten ist 7 '5 cm lang, solid gebaut und bewegt sich auf einer schiefen, nur 12',5 cm langen Bahn, welche mit der horizontalen Ebene einen Winkel von 15*^ bildet. Er läuft, wie schon oben erwähnt, in absolut sicherer und fester Führung zwischen zwei Metallschienen und bewegt sich vermöge der Steilheit seiner Bahn verhältnissmässig nur langsam, d. h. in Projection auf die Horizontale in kurzer Strecke nach vorwärts. 160 Alb recht: Eine neue Construction eines Mikrotoms. XVII, 2. Die Objectklammer ist leicht in den drei Richtimgen des Raumes — in der verticalen durch Zahn und Trieb — verstellbar nnd kann ausserdem durch einfache Lockerung einer Schraube (d) höher oder tiefer gestellt oder auch vollständig entfernt und durch eine andere Klammer oder z. B. durch einen Gefrierapparat ersetzt werden. Die Mikrometerschraube ist fix, d. h. sie braucht nie aus ihrer Schraubenmutter herausgenonnnen zu werden. Kaeh der groben Ein- stellung des Objectes erfolgt die feinere mittels der Mikrometer- schraube durch eine ähnliclie Einrichtung, wie sie auch bei anderen Mikrotomen construirt ist. Die Mikrometerschraube trägt nämlicli eine kreisförmige Scheibe, deren Peripherie eine genaue Zahnein- theilung besitzt. An diesem Zahnrade ist ein in Grade eingetheiltes Kreissegment (h) verschieb- und verstellbar, so dass damit die Anzahl der Zähne (und zwar ein bis 10 Zähne; ein Zahn = 1 //) eingestellt XVII, 2. Albrecht: Eine neue Construction eines Mikrotoms. ißi werden kann. Durch lieben des Griti'es (^bei /«fj, wobei das obere Ende des Kreissegmentes an eine quere Metallleiste stösst, die als Anschlag- dient, wird das Zahnrad gedreht und damit die Mikro- meterschraube weiterbewegt, so dass automatisch immer dieselbe Schnittdicke resultirt. Ist nun die Mikrometerschraube ganz abge- laufen, so kann sie in einem kreisförmigen Ausschnitt der verticalen Schiene des Mikrotoms in bequemer, einfacher Weise um ISO*' um- gelegt w^erden und ihren Weg nun aufs neue beginnen, indem jetzt die andere Spitze der Mikrometerschraube dem Berührungspunkte mit dem Objeetschlitten zugewendet ist. Daraus resultirt eine un- unterbrochene Wirkung dieser Schraube. Um nun den Contact mit der Mikrometerschraube in dieser neuen Stellung zu ermöglichen, muss allerdings der Objeetschlitten um 25 mm zurückgeschoben w^erden. Die dadurch entstandene ge- ringe Höhendifferenz (etwa 7 mm) zwischen Messerschneide und Schnittebene des Präparates kann nun aber leicht mittels Triebes {Tr) ausgeglichen werden. Bei vollständiger Ausnützung der Mikrometerschraube können (300 bis 700 Schnitte von je 10 t^i Dicke angefertigt werden. Da- bei hat das Object, wie schon bemerkt, einen Weg von 25 mm zurückgelegt und sich um etwa 7 mm gehoben. Führt man nun das Umlegen der Mikrometerschraube um ISO*' durch, so kann neuerlich dieselbe Anzahl von Schnitten angefertigt werden. In praktischer Hinsicht bewähren sich die im Vorstehenden kurz hervorgehobenen Constructionsvortlieile nach meinen Erfahrungen be- sonders dadurch, dass auch von grösseren und harten, schwer schneidbaren Objecten mit vollkommener Sicherheit gleich- massige und recht dünne Schnitte (von 8 bis 12 fi Dicke bei entsprechend guter Einbettung) angefertigt w^erden können. Jede Hebung oder jedes Herausspriugen des Messer- oder Objectschlittens in Folge grösseren Widerstandes beim Schneiden harter Objecte ist dabei vollkommen ausgeschlossen. Auch bei Anfertigung von Serienschnitten leistet das Mikrotom in jeder Beziehung entsprechende und durch die ununterbrochene Wirkung der Mikrometerschraube sehr bequeme Dienste. Die leichte Möglichkeit des Austausches einer Objectklammer durch eine andere oder durch einen Gefrierapparat ist ebenso von nicht zu unterschätzender Wichtigkeit. Trotz der massiven Aus- führung des Instrumentes ist die Führung des Messerschlittens eben- so wie die Handhabung der ganzen Construction eine sehr leichte. Zeitschr. f. wisa. Mikroskopie. XVII, 2. H 162 Müller: Eine Drehscheibe als Diapositivträger, XVII, 2. Sowohl in Paraffin wie in Celloidin eingebettete übjecte können auf dem Mikrotome in gleich tadelloser Weise geschnitten werden, und zwei von den im Vorstehenden beschriebenen Mikrotomen, die seit einiger Zeit im Wiener pathologisch-anatomischen Institute in Verwendung stehen, haben sich in jeder Hinsicht durchaus bewährt. [Eingegangen am 26. März 1900.] [Aus der Anatomischen Anstalt zu Tübingen.] Eine Drehscheibe als Diapositivträger für Projectioiisapparate. Von Dr. Friedrich Müller, II. Prosector. Hierzu zwei Holzschnitte. Bei der Vervollkommnung der Projectionsapparate in neuester Zeit ist ein Theil verhältnissmässig wenig berücksichtigt worden, der für ein sicheres Functioniren doch nicht unwichtig ist, nämlich der Diapositivträger. Während man am Mikroskop zahlreiche Neue- rungen, die zu einer bequemen Handhabung förderlich sind, erdacht und angebracht hat, ist der Diapositivträger so ziemlich auf der Stufe stehen geblieben, auf der er anfangs stand. In allen bekannteren Apparaten besteht der Träger aus einer seitlich verschiebbaren Platte mit Ausschnitten und Schienen für die Diapositive. In manchen Fällen ist die Vorrichtung nach Behrens' Vorschlage vorhanden, welche es ermöglicht, die eingesetzten Platten so zu drehen, dass sie entweder längs oder quer stehen. Ausser- dem können durch entsprechende Einsätze Platten verschiedener Grösse verwendet werden. Was den letzteren Punkt, die Plattengrösse, betrifft, so muss die Verschiedenheit in den benutzten Formaten als sehr bedauerlich XVII, 2. Müller: Eine Drehsclieibe als Diapositivträger. 1(",,3 bezeichnet werden. Das Einsetzen der verschiedenen Rahmen ist bei der herrschenden Dunkelheit umständlich und zeitraubend, so dass die Projection bei Benutzung mehrerer Formate in hohem Grade erschwert wird. Sehr dankenswerth und erwünscht ist desshalb die Anregung, welche ein einheitliches Format für alle wissenschaftlichen Diapositive vorschlägt, zumal das in Vorschlag gebrachte eine schon in vielen Instituten gebräuchliche Grösse ist, nämlich 8*5 :10 cm. Am Tübinger Institut ist dieser Anregung sofort entsprochen und das alte Format 9:12 cm verlassen worden; es werden nur noch Platten 8*5 : 10 hergestellt und benutzt. Entscheidet man sich so für eine bestimmte Grösse , so wird damit schon eine wichtige Vereinfachung erreicht. Bereits vorhandene grössere Platten können wohl in den meisten Fällen durch Beschneiden auf 8"5 : 10 gebracht werden und bleiben brauchbar, in anderen Fällen wird man sich durch Verkleinern helfen. In der Annahme, dass dieses „Vereinsformat" bald allgemeinen Eingang findet, werde ich von der Verschiedenheit der Plattengrösse absehen und bei der Beschreibung unseren für das angegebene Format (8'5:10 cm) eingerichteten Apparat zu Grunde legen. Uebri- gens können Aenderungen in dieser Beziehung mit Leichtigkeit angebracht werden. Die bisher gebräuchlichen Diapositivträger functioniren bekannt- lich in der Art, dass der Schieber bald nach der einen, bald nach der anderen Seite bewegt wird, so dass einmal diesseits, einmal jenseits des Objectivs ein Diapositiv eingesetzt werden kann. Das hierbei nöthige Hinweggreifen über das Objectiv ist umständlich, aber auch unsicher, weil man nicht genügend mit dem Auge die Manipulation übersehen kann. Bei Apparaten, die nur zur Demon- stration von Diapositiven bestimmt und desshalb im Raimi nicht be- schränkt sind, mag diese Art des Wechseins der Diapositive bei genügender Uebung befriedigen. Bei den combinirten Apparaten dagegen, welche gleichzeitig für die Projection von mikroskopischen Präparaten und von Diapositiven eingerichtet und, wenn in einem Hörsaal aufgestellt, wohl meistens von einem Kasten umgeben sind, wird man, um nicht zu grosse Dimensionen zu bekommen, mit dem Raum sehr sparen. Bei dem neuesten, für unser Institut gelieferten Apparat von Zeiss ist der Kasten so eng, dass ein Wechseln der Diapositive mittels des beigegebenen Trägers nach alter Art geradezu ein Kunststück ist. In dieser Nothlage kam ich auf den sehr naheliegenden Ge- ll* 164 Müller: Eine Drehscheibe als Diapositivtriiger. XVII, •>. danken, die Diapositive auf einer Drehscheibe anzubringen und sie durch Drehung- derselben nach einander durch den Lichtkegel zu bewegen, und mit Erlaubniss meines Chefs, des Herrn Professor Froriep, Avurde unter meiner Controlle von dem Mechaniker des Instituts, Hausmeister Zeeb, der entsprechende Apparat ausgeführt. Die Einrichtung ist folgende (Figur 1): Auf einem je nach den räumlichen Verhältnissen gestalteten auf die optische Bank passenden Träger T ist eine Scheibe, deren Grösse ebenfalls in jedem Falle zu bestimmen ist (hier 38*0 cm Durchmesser), um eine horizontale Achse Ä drehbar. In der Scheibe betinden sich 4 runde Ausschnitte (in Figur 1 und 2 punktirt angegeben) von 13*5 cm Durchmesser für das Format 8"5 : 10 cm, derart angeordnet, dass ihre Mittel- punkte bei einer Drehung der Scheibe nach einander die optische Achse des Apparates tretfen-, jedesmal wenn diese Stellung für einen der Ausschnitte herbeigeführt ist, schnappt eine Haltevor- riclitung H in eine Rast ein. Auf dieser Scheibe sind concentrisch zu den Ausschnitten 4 kleinere runde Platten, die wir Wechselplatten nennen wollen, von lö'O cm Durchmesser, zwischen je 3 Eollen B (Figur 2) leicht drehbar angebracht ; dieselben tragen den Ausschnitt E und die Schienen für je ein Diapositiv. Der Ausschnitt muss XVII, Müller: Eine Drehscheibe als Diapositivträger. 165 li-eiiaii in der Mitte der Platte liegen, so dass seine Mitte mit dem Mittelpunkt des entsprechenden runden Ausschnittes der Drehscheibe ziisammentnllt; durch Fassen des Knopfes K (Figur 2) kann jede dieser Wechselplatten leicht um ihren Mittelpunkt gedreht und ihr Aussclniitt beliebig in senkrechter oder wagerechter Lage eingestellt werden, wobei die Federhemmung FF' für die richtige Stellung sorgt. Der Ausschnitt der Platten ist viereckig mit abgerundeten Ecken und jederseits 5 mm kleiner als das Diapositivformat, so dass die Grösse 7'5 : 9 cm beträgt. Zum Festhalten der Diapositive dienen an den Längsseiten Schienen ^S mit Federn zum Andrücken des Diapositivs gegen die Platte, an der einen kurzen Seite eine Leiste L, an der anderen ein au einer Feder befestigter Stift St^ welcher beim Einschieben unter das Plattenniveau zurückgedrückt werden kann und nach Richtigstellung des Diapositivs ein Zurückfallen nach dieser Seite verhütet. Iß6 Müller: Eine Drehscheibe als Diapositivträger. XVII, ä. Vor dem Beginn einer Projectionsserie werden die ersten 4 Diapositive in der gewünschten Reihenfolge in die 4 Wechsel- platten der Drehscheibe eingesetzt. Sobald das dritte Bild zur De- monstration gelangt, befindet sich das als erstes projicirte Diapositiv, da es dem demonstrirten gegenüberliegt, den Händen des Bedienenden bequem zugänglich, der Wechsel beginnt und kann fernerhin nach jeder Vierteldrehung der Drehscheibe in unendlicher Reihe wieder- holt werden. Die Diapositive werden dabei nicht umgekehrt ein- gesetzt, sondern in der Lage, in welcher man dieselben sehen will. Es ist dies ein gewisser Vortheil, da beim Bedienen des Apparates durch ungeübte Personen ein falsches Einstecken Aveniger leicht vor- kommen wird als sonst. Durch die zweimalige Weiterdrehuug der grossen Scheibe wird dann das Bild um zwei rechte Winkel gedreht und somit in die Stellung gebracht, in der es projicirt werden muss. Der ganze Apparat ist in Messing ausgeführt, das durch Beizen geschwärzt wurde, doch kann natürlich ebensogut anderes Metall z. B. gewalztes Aluminium u. dergl. benutzt werden. Da er hier vom Institutshausmeister mit den vorhandenen Hülfsmitteln der An- stalt angefertigt wurde, so darf wohl angenommen werden, dass nach den hier gemachten Angaben jeder geschickte Mechaniker nach ge- gebenen Maassen den besonderen Verhältnissen entsprechend einen brauchbaren Apparat liefern kann. Bei uns hat sich die A'orrichtung in der Zeit, seit sie benutzt wird, so gut bewährt, dass man sie wohl mit gutem Gewissen empfehlen kann. Eingegangen am IG. März 1900.] XVII, 2. Schiefferdecker: Ueber gläserne Farbtrögo. 1G7 lieber s'läserne Fai*btröo:e. Von Prof. P. Schiefferdecker in Bonn. Hierzu ein Holzschnitt. Bekanntlich hat man seit einigen Jahren vielfach Farbtröge aus Steingut in Gebrauch genommen, um eine Anzahl von Objectträgern mit darauf geklebten Schnitten gleichzeitig färben zu kijnnen. Diese Farbtröge sind in letzter Zeit auch mit einem ganz gut schliessenden Deckel geliefert worden, so dass sie schon eine recht brauchbare Vor- richtung geworden waren. Ein Nachtheil dieser Steinguttröge ist in- dessen der, dass die Farbstoffe leicht durch die Glasur in das Innere der Masse eindringen imd nicht wieder daraus zu entfernen sind. Dieser Uebelstand hatte mich schon seit längerer Zeit bewogen, den Händlern gegenüber den Wunsch auszusprechen, dass derartige Farb- tröge aus Glas hergestellt werden möchten, doch wurde mir stets erwidert, dass das nicht anginge. Im letzten Winter hat nun die Firma Martin W^allach Nachfolger, Cassel, endlich derartige Farb- tröge herstellen lassen und liefert dieselben zu einem annehmbaren Preise. Sie hat mir ein Paar solcher Tröge zur Begutachtung zu- gesandt, und ich bin gern bereit, über dieselben hier kurz zu be- richten. Wie die beistehende Abbildung zeigt, sind die Farbtröge 168 Schiefferdecker: Ueber gläserne Farbtröge. XVII, 2. in ihrer Gestalt ganz ähnlich denen aus Steingut , doch kann man noch mehr Objectträger (10) auf einmal in ihnen färben. Dieselben sind mit einem Deckel versehen, und wenn dieser auch, wie das bei ge- gossenem Glase natürlich ist, nicht genau schliesst, so ist der Abschluss doch hinreichend, dass man wässerige Farbflüssigkeiten mehrere Tage lang bei Stubenwärme stehen lassen kann, ohne eine wesentliche Ver- dunstung zu bemerken. Die Tröge sind für Objectträger englischen Formats bestimmt; um sie indessen auch für solche von Vereins- format gleichzeitig benutzen zu können, werden besondere Einsätze mitgeliefert, durch welche die Länge des Troges in angemessener Weise verkürzt wird. Auch diese sind völlig aus Glas hergestellt und lassen sich ganz gut reinigen. Um die Tröge auch für alko- holische Farblösungen resp, für Alkohol , Chloroform etc. zu be- nutzen, liefert die Firma etwas grössere Glaskästen mit breitem Rande und auf diesen aufgeschliftenem Glasdeckel , in welche die Farbtröge bequem hineingesetzt werden können. Es dienen diese grösseren Glaskästen also als feuchte Kammern und würden, nament- lich wenn man ihren Boden mit Fliesspapier bedeckt, welches mit der betreffenden Flüssigkeit getränkt ist, wohl auch für emptindliche alkoholische Farblösungen, wie z. B. Orcein in saurer Lösung voll- kommen hinreichend sein. So scheint mir nach den vorläufig aller- dings nur kurzen Proben, die ich angestellt habe, dass diese Glas- tröge in der That einen Fortschritt darstellen und wohl empfehlens- werth sind. Der Preis derselben ist massig. Es kostet ein Farbtrog mit Deckel ohne Einsätze 1*65 M., die Einsätze das Paar 0*80 M., die feuchte Kammer 1'80 M. [Eingegangen am 17. März 1900.] XVU, ■_'. Wilson: A new System of obtaining directing-marks. ißg A new System of obtaining directing-marks in microscopical sections for l)Ui'poses of reconstruction by wax-plate moclelling. By J. T. Wilson, Professor of Anatomy, Uuiversity of Sydney, N. 8. W. In most cases where many metliods bave been proposed for the accomplisliment of the same object, it may be taken as tolerably certaiii tbat neue of the procediires advocated are snfficiently free from objectiou to entirely displace rival Systems. Numerons plaus have been put forward for the production of reliable directing-planes and directing-lines in paraffin blocks for seetioning, since the first introduction of Born's System of wax-plate modelling. And it is no doubt true that, if the details of these methods be carried out , a correct result will , in most cases , be attained. Objectiou may, however, be taken to each of these methods in turn from some particular point of view, Some of them sutfer from lack of accuracy ; some ouly aim at a partial attainment of the end in view, i. e. of a complete graphic reconstruction ; others are ap- plicable only to special cases ; whilst others, scientifically conceived, and capable of great accuracy, are somewhat cumbrous, difficult and tedious, requiring not only special apparatus of more or less delicate construction but not a little dexterity in manipulation. The present writer is not presumptuous euough to suppose that the method he is about to describe is destined to displace all others, and to solve the problem of combining in one method the desiderata of accuracy and reliableuess together with simplicity, couvenience and rapidity. Yet is seems to him that the method now presented offers certain advantages , more especially to the unsophisticated worker, which Warrant its publication, in the hope that beginners like him- self in the work of plastic reconstruction may have some of their difficulties at least minimised. 170 Wilson: A new System of obtaining clirecting-marks. XYII, :i. ]So Claim is here set up for any special originality in tlie con- ceptioii of tlie method. Tliis is little more tliau a moditication. tliough not a wliolly luiimportant one, of tlie improved method re- cently described by Born and Petkr, ^ wliicli suggested itself to tlie writer wliilst engaged in carrying out the Operations of the latter method. The System of Boiix and Peter is without doubt very perfect in its way. Its practica requires first of all the possession of a plate of metal , or , preferably, of glass , provided with a series of specially constructed grooves , for the purpose of producing npon one face of the paraffin block a series of parallel ridges, accurately perpendicnlar to the proposed plane of sectiou. Such a plate may not be readily procnrable by every worker. - But in an}^ case, its ntilisation does not obviate the necessity for the further Operation of coating the directing plane and its ridges with a layer of extraneons pigment , and of iixing this layer by a subsequent process of lac- quering. It is, of course, the more or less serrated outlines of this amorphous pigment-layer which form the actnal directing-marks in each section, and whose delineation upon the snrface of the wax- plate forms the directing guide diiring the process of snperimposition of the ciit-out plate-models, It is an advantage of the method now to be described , that the lines of direction , instead of being generated by the superad- dition of extraneons amorphous pigment to the paraffin block, are coustituted by actnal definite Strands of organised material embedded in the substance of the paraffin block itself, and in the dosest and most intimate relation to the object to be reconstructed. The poss- ibility of utilising such Strands, embedded in close i)roximity to the object to be sectioned and reconstructed, was suggested by the fact of the sufficiency, for many of the more simple cases of reconstruct- ion , of the intrinsic structures of the object itself as directing guides, such as a tolerably straight notochord, or the contours of various axially runniug parts , if perpendicnlar to the sectional plane. The question thus arose whether, in cases where no such M Born, G. , u. Peter, IL, Zur Herstellung von Richtebenen und Pichtlinien (Zeitschr. f. wiss. Mikrosk. Bd. XV, 1898, p. 31). '-) A very fair glass plate, engraved with Born-Peter grooves, and by means of which a very good ridged paraffin block is obtained, was made for rae by the assistant in the Physiological Laboratory of the Uni- versity of Melbourne, who iinppens to be a very skilful glass-engraver. I XVII, "2. Wilson: A now System of ubtuiniiig directing-iuarks. 171 marks nre availahle in tlie object itself, it miglit not be possible to supply tlie (loficiency by enibedding along witli it certain perf'ectly straisilit organic filaments, since the modern techniqne of section- mounting- enables ns to ensure tlie maintenance of the accurate re- lative Position of sections of tliese to eacli other and to the sections of the object to be reconstructed. Slender and elongated bundles or Strands of nerve fibres, fixed and blackened in osmic acid, seemed likely to atford material ad- mirably snited to the end in view. In order to utilise these, however, it was esseutial to ensure the embedding of such Strands of tissue so that they should be perfectly straight, perfectly parallel to one another, and perfectly at right angles to the plane of section of the paraflin block; — in short, to ensure the assimilation of the linear disposition of such embedded Strands as closely as possible to that of the parallel lines of colour which result from fiUing up with pigment the parallel Scratches produced by a „Ritzer" on the face of a paraffin block prepared for reconstruction by one of the older methods. It is claimed that these conditions are practically satisHed by the procedure detailed below. It may be contended that it is impossible thus to obtain that degree of inathematical straightness and exactitude attainable by the use of the „Kitzer", or by the Born -Peter ridges. But there is certainly to be gained a degree of accuracy amply suflicient for all genuine biological reciuirements, and it is open to question whether the conditions of paraffin section-cutting and mounting will permit of substantially greater accuracy by any method whatsoever. For the rest it is sufficient to add that the practical value of the method liere advocated has been already borne out by actual experience of its working. The simplicity and reasonableness of its underlying principle, along with its practical convenience ad read- iness, are held to justify its present pul)lication. Materials: — Some of the long aud slender root-bundles of the human cauda equina will be found to be admirably adapted for the purpose of embedding as directing-strands. The intraspinal roots of the fifth sacral and coccygeal nerves are very long and fine, but, if more delicate Strands are desired, it is quite easy to separate finer individual bundles from other nerve-roots. The entire absenee of any branching, aud their uniform calibre, in addition to their delicacy, are features which render such Strands especially favourable for the purpose. 172 Wilson: A new System of obtaining directing-marks. XVII, 2. Portions of such bimdles of, say, 10 or 12 eentimetres in lengtli, are to be suspended each by a thread tied to one end, at- taching- at tlie same time to tlie other end a weight just sufficient to keep tlie Strand perfectly straigbt, even wben immersed in fluid, but witbout undue and uunecessary stretcbing. The pieces with the weights attached are uow to be hung up in a vessel containing a 1 percent Solution of osmic acid in order at ouce to fix the nerve and to blacken the myelin of the libres. They are then to be passed in similar fashion through alcohols an xylol, and, still suspended vertically, they are next to undergo Infiltration with paraftin in a test-tube or other vessel in a paraffin oven. ^\"hen properly infil- trated, the vertical weighted Strands are to be lifted carefully out and allowed to solidify. There may thus be very easily obtained a stock of lengths of perfectly straight nerve filaments which are rigid enough for careful handling, and these should be preserved in a straight condition until required. For the purpose of eiubedding there are required a glass base- plate and two of the usual Naples L-shaped embedding-bars (Ein- bettungsrahmeu). The glass base-plate is of simpler construction tlian the Born-Peter plate and may without difficulty be constructed in the laboratory from plane-surfaced glass. It may conveniently be of such dimensions as to enable it to replace temporarily the glass stage of the dissecting-microscope in ordinary use, but it should not be more than 2 or 3 mm thick, in order to minimise parallax in future procedure. It should have plane surfaces, and it is con- venient to have drawn or engraved on the central part of its upper surface a rectaugular quadrilateral outline, with sides measuring 2 cm (i. e. similar to that on the Borx-Peter plate). This outline should be blackened. On the under surface of the glass cor- responding to the area enclosed by this outline, a series of deeply engraved lines should be ruled and subsequently blackened. These lines are to be accurately parallel to two of the sides of the quadri- lateral figure on the upper surface, as well as to one another, and it may be fouiul preferable to have them at alternating intervals from one another of one and two millimetres, respectively. The embedding-bars (of either metal or glass) must be truly rect- augular throughout, and with plane surfaces, as with the method of Born and Peter. The length of tlieir arms should correspond to the di- mensions of the quadrilateral engraved on the base-plate, i. e. 2 cm as above stated; but it may be pointed out that these dimensions XVn, •-'. Wilson: A new System of obtaining directing-marks. 17;5 are purely a matter of conveiiience and may be varied at will; whilst a substaiitial accuraey of surface is imperative. If a pair of accu- rate embedding-bars are already in the possession of tlie worker, tlie obvious plan is to make the quadrilateral outline on tlie base- plate of such dimensions as will correspond with the embedding-bars placed in position. Method : — Before proeeeding to embed the object, the glass base-plate is to be placed npon a snpport which will perniit of its being subsequently heated from below up to the melting point of the paraffin. The base-plate and embedding-bars should be thoroughly cleansed, though here there are, of course, no troublesome grooves requiring careful treatment, as in the Born-Peter plate. The faint- est trace of glycerin riibbed over after cleaning plate and bars, will facilitate Separation of tlie paraffin block. One of the lengths of blackened and paraffin-infiltrated nerve- strand may now be taken and laid carefully down, without bending it, on a tlat piece of glass. Two portions, of such a length as to permit them to project slightly beyond the limits of the space en- closed by the embedding-bars (thus about 2*5 cm long), are now to be chopped otf with a razor-edge, cutting vertically down lipon the glass surface. They are then to be lifted up, still without bend- ing them, and laid down on the upper surface of the glass base- plate, pushing them gently into position so as to bring them to lie accurately coiucident with two of the parallel blackened lines visible on the uuder surface of the base-plate, at either one, two or three millimetres interval as may be preferred. More than two Strands may, of course, be utilised if desired, but for most purposes the sections of two Strands will prove quite adequate as directing marks for the orientation of the wax plates. For certain simple cases even one Strand may be sufficient, but as a rule two should be employed to give proper security. Having placed the two Strands carefully in position over the parallel lines chosen, the base-plate is now to be heated up from below to the melting-point of the paraffin in order to teraporarily fix the Strands in position. And now^ is the time to rectify any slight unevenness of the filaments caused by previous handling. This is easily done by gently pushing with the point of a needle, while the Strands lie flaccid in the melted coudition, until their co- incidence with the engraved parallel lines on the imder surface of the glass is quite perfect. 174 Wilson: A new System of obtaining directing-marks. XVII, 2. The soiirce of heat is uow removed from imder tlie glass, aud as soou as the Strands liave again solidified and thus become adherent to the glass, one of tlie embedding-bars is placed with one arm exactiy aloug one of the side-lines of the quadrilateral outline of the base-plate (or indeed any one of the parallel lines will do), and with its other arm crossing at right angles to the series of parallel lines, and sliglitly overlapping the projectiug ends of the nerve- strands lying along these. The subsequeut embedding will be so carried out that this cross arm of the embeddiug-bar will limit the basal plane of the future paraftin block, correspouding to, or parallel with, the plane of sectioning. The other L-shaped embedding-bar niay now be placed in position, without disturbing the first-laid one, and also slightly overlapping the other ends of the nerve-strands. A moderate weight, say of about a kilo, and best in the shape of a metal plate, is to be laid upon the upper surfaces of the em- bedding-bars, and the under surface of the base-plate is once niore heated up to the melting-point of tlie paraftin , and either again allowed to cool, or the process of embedding carried out forthwith. This weighting of the embedding-bars, while the base-plate is beiug heated up, ist to allow of a complete llattening out of the ends of the Strands of tissue which are overlapped by the bases of the em- bedding-bars. The nerve filaments, if suitable ones have been chosen for the process, are so delicate that, when thus gently flattened out under pressure, their thickness is inappreciable and does not afFect the perpendicularity of the surfaces of the embedding-bars. ^ ^) If, however, tbis quite inappreciable amount of tiattened-out material beneath the embedding-bars^ be yet objected to as wrong in princlple and dangerous in practice, another method of ensuring the stability in position of the nerve filaments during tlie subsequent process of embedding, may be resorted to. After obtaining perfect coincidence of the nerve Strands with the orientation lines on the glass, and before placing the embedding- bars in Position, both ends of the nerve-strands (cut so as not to project beyond the limits of the embedding-area, and melted on the glass) are covered by two small and moderatcly thin pieces of lead, such as printers' space-types, and these are pressed down temporaril)^ by means of a small weight resting upon thera while the base-plate is being heated up. The small pieces of lead are now left undisturbed in position close to the limits of the embedding-area; the embedding-bars are placed in position around the area; and the embedding of the object is carried out with the former still in situ. The small lead blocks can easily be picked out from the surface of the block of paraffin before trimming it for the microtome. This expedient somewhat reduces the available space on the floor of the XVII, "2. Wilson: A new System of obtaining directing-marks. 175 Tlie einbeddiug-cliamber is now complete, witli the embedding- bars in position enclosing- an embedding-area with plane glass floor, across wliich there Stretch two perfectly straiglit Strands of blackened nerve, fixed in position at eitlier end, and perfectly parallel to the sides, and perpendiciilar to the ends, of the embedding-chamber. The process of embedding the object to be reconstructed may now be carried out in the usiial way. The glass plate, however, niust be heated up to the melting-point of the paraffin, preferably by imniediate embedding after the previous heating, or by heating np anew. Only two heatings of the base-plate are really uecessary, viz. one to allow of the preliminary careful orientation upon, and lixation to the base-plate, of the directing iilaments; and a second to allow of the weighting and Hattening out, i. e. the permanent tixation, of the ends of the directing Strands. It may be found possible to combine these stages, by omitting the intermediate cooling, but it is safer to have the filaments initially glued down before attempting to more permauently secure the ends. The orientation of the object itself with reference to the direct- ing Strands must of course be carried out after the embedding Chamber is filled with melted paraffin ; and for this purpose the base-plate may be trausferred to the glass stage of the dissecting- microscope, as suggested by Born and Peter. The floor of the Cham- ber must, however, remain warm until the orientation of the object is effected. Subsequent cooling of the Chamber should be carried out rapidly and cautliously by means of iced water; and cupping of the block should be prevented as far as possible by careful additions of paraffin drops and manipulation with heated needle. Regarding these raanip- ulations nothing need be added to the Instructions of Born and Peter. By foUowing the directions above detailed a paraffin block is obtained, the siirfaee of which (in contact with the glass base-plate, and forming a „directing plane") has , embedded just beneath it, two perfectly straight blackened Strands of nerve, with the object itself embedded in very definite and intimate relations to these. In this method a ,,directing-plane" becomes of little or no importance once the directing filaments have been definitively laid down. What remains of importance is the existence of two directing Strands at embedding-chamber, but otherwise gives rise to no real inconvenience. As a practical measure the writer believes it, however, to be superfluous. 176 Wilson: A new System of obtaining directing-marks. XYII, 2. riglit angles to the ends of the parallel-sided rectangular block, one of which ends is destined to form the base of the paraffin object- block which is to be mounted lipon the prepared paraffin-table of the object-holder of the microtome. The cementing upon the latter of the basal plane of the object-block raust be eifected in such mauner as^not to destroy the parallelism of the two surfaces. A crucial groove may be ciit in one of the surfaces to be apposed, and super- heated paraffin run in between the apposed faces in the manner recommended by Born. Auy trimming and recoating of the block which may be necessary may now be carried out in the usual or any desired way, so long as the directing Strands are preserved in their original relations to the object. The foUowing advantages may be claimed for the method just described: — (1) No special apparatus is required but such as is presumably to hand in any biological laboratory. Even the glass base-plate may be prepared by meaus of the ordinary engraving dia- mond if need be. (2) None of the Operations described requires any special dexterity, and all of them may be successfiilly accom- plished at once by any-one. The sureness and certainty of the process are such that it is hardly possible to fail. (3) Yery little extra expenditure of time is necessary beyond that required for or- dinary embedding; that is, after a stock of prepared nerve has once been laid in. So little extra time and trouble are implied that there could be little objection to making the embedding of directing Strands a routine procediire in the case of those classes of material for which reconstruction may at any time turn out to be desirable. (4) The actual directing marks in each section are brought as close as may be chosen to the object, and may be in actual contact with it if that be desired. (5). Whenever the embedding has taken place the importance of the directing plane disappears , the only plane reraaining of importance in the paraffin block being the future base of the object-block. (6) The necessity is wholly avoided for any scratching ot the paraffin block by a ,, Ritzer"', or for the alternat- ive Born-Peter ridges. (7) There is no necessity for the filling up of Scratches or for the coating of ridges with amorphous colour, or for any superaddition of colour, lacquer, or any foreign ^ibstance whatever. (8) Each section bears its directing marks in the shape of two (or more) circurascribed black spots possessing all the defin- iteness and determinateness which belong to organised structures, (9) The directing Strands cause no inconvenience during either pre- XVII,-. Wilson: A ncw System ot" obtaining ilirecting-iuarks. 177 paratioii oi' tlic block or duriiig sectioniug, aiid their axcs are to all intents aiul piirposes as accuratel}^ perpeudiciilar to tlie plane of sectiou as are tlie coloured ridges of the directing plane of the paraflin block prepared by the Born-Peter method. 10) It is obvious tliat, on the same principle, directing filaments may be introduced into celloidiu bloeks; but experiments in tliis direetion are not yet completely carried out. For those who already possess a Born-Peter grooved plate, a very fair alternative to the method described in this paper woiild consist in using the Born-Peter plate with the grooves on the npper surface as described by these authors 5 previously, however, laying in two or more of the grooves such fine prepared nerve-strands as are utilised in the metliod above described, and melting them down in the grooves prior to embedding. If the embedding bars are so placed as to overlap the ends of the grooves a little, the retention of the Strands in the grooves during the process of embedding will be absolutely ensured. Two (ore more) of the ridges produced in Casting a Born-Peter block will then each contain a solid core cou- sisting ot a blackened nerve-bundle, and the subsequent processes of coloration of the ridges and the directing plane are rendered un- necessary, since the superimposition of the outlines of the sections of the nerve-strands amply suftice for directing marks. On the other hand the directing marks are necessarily more remote from the em- bedded object than if the method described in the foregoing pages were foUowed. Sydney, New South Wales, 12th. February 1900. [Eingegangen am 15. März 1900.] Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 2. 12 178 Grosser: Mikroskopische Injectionen mit Eiweiss -Tusche. XV'II, 2. [Aus dem I. Anatomischen Institute in Wien.] Mikroskopisclie Injectionen mit Eiweiss -Tusche. Von Dr. Otto Grosser, Prosector in Wieu. Hierzu Tafel I. Die grossen Yortlieile kaltflüssiger mikroskopischer lujections- massen gegenüber den warmflüssigen sind so einleuchtend, dass heute sämmtliche Lehrbücher der Histologie neben den alten Verfahren mit Erwärmung diese neueren Massen aufgenommen haben. Viele Prä- parate, namentlich histologische Structuren, vertragen das Einlegen in Wasser und die Erwärmung nicht, und wo man gezwungen ist, feine Kanülen zu verwenden, sind die warmflüssigen Massen über- haupt äusserst unbequem, da sie in der Kanüle sehr leicht erstarren. Aber auch die gewöhnlich angegebenen kaltflüssigen Massen lassen nur eine sehr beschränkte Auswahl in den Fixinmgsflüssig- keiten zu — Alkohol oder allenfalls MüLLFR'sehe Flüssigkeit; moderne Fixationsverfahren (Sublimat, Pikrinsäure, Osmiumgemische etc.) sind ausgeschlossen, von Entkalkung und complicirten Färbungsverfahren nicht zu sprechen, da die Farbstoffe der Massen zerstört werden. Der einzige Farbstoff, der hievon eine Ausnahme macht, ist Tusche, die K. Taguchi warm empfiehlt. ' Doch hat dieselbe den einen Nachtheil , dass sie aus isolirten Körnchen besteht , die, wenn auch nicht aus den kleineren, so doch aus den etwas grösseren Gefässen ^) Taguchi, K., Ueber Icalte Injcction mit japanischer Tusche (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XXXI, 1888, p. 565, wo auch die sehr spärliche Lite- ratur angegeben ist. Vgl. auch diese Zeitschr. Bd. V, 1888, p. 503). — Auch HocHSTETTER , F. , Ucber eine Methode der Darstellung der Form- verhältnisse gewisser Hohlraum- und Gangsysteme des embryonalen Körpers (Diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 18Gir.) hat Tusche zur Injection von Hohl- räumen bei Embryonen verwendet; doch interessirt an seinem Verfahren weniger die Art der Masse, als die geistreiche Ausnutzung der pliysika- Uschen Vorgänge in capillaren Räumen. XMl, 2. Grosser: Mikroskopische Injectionen mit Eiweiss-Tuseho. 179 leicht heransfalleu uiitl beim Sclineiden über die Schnittfläche ver- streut werden können. Es lag daher nahe, nach einem Bindemittel für die Körnchen zu suchen, und als solches ist, wie ich glaube, ge- wöhnliches flüssiges Hühnereiweiss ^ ganz besonders geeignet. Das Verfahren ist folgendes : Das Eiweiss wird vom Dotter getrennt, wie zur Darstellung von Aufklebe-Eiweiss mit einem Stabe kurze Zeit geschlagen und dann 12 bis 24 Stunden durch trockenes Filtrirpapier tiltrirt. Zusatz von Campherstückchen ist vortheilhaft, weil sich dann das Filtrat einige Tage brauchbar erhält; Thymol ist weniger zu empfehlen. Mit dem Filtrat wird dann, wie dies Taguchi für seine wässerige Masse beschreibt, ein Stück Stangen- tusche auf einem feinen Reibsteine oder einer matten Glasplatte an- gerieben, wobei man zweckmässig immer nur einige Tropfen auf die Glasplatte giesst und verreibt, bis die Masse da, wo sie in ganz dünner Schicht ausgestrichen ist, dunkelgrau und etwas dickflüssiger wird oder, nach Taguchi, bis sie „auf dünnes gutes Löschpapier getropft, zusammenhält und keinen grauen Ring um den Tropfen ent- stehen lässt." Die Concentration darf nicht zu weit getrieben wer- den, weil sonst das Bindemittel zu fein vertheilt wird, um die Körn- chen noch zusammenzuhalten, und beim Schneiden doch Streuung eintritt. Diese kleineu angeriebenen Mengen werden direct in der Spritze gesammelt. Als solche verwende ich einfach eine kleine Schrau- benspritze mit feinen Kanülen, wie für feine TEicHMANN-Injectionen. Auf der Tuschstange selbst darf die Flüssigkeit weder während noch nach Beendigung des Anreibens eintrocknen, da man dadurch spröde, abspringende Häufchen erhält, welche die Spritze oder ein Gefäss verstopfen könnten; doch lässt sich dies leicht durch Abwischen der Stange mit einem feuchten Tuche vermeiden. In der Fixirungsflüssigkeit gerinnt nun das Eiweiss und bildet mit den Tuschkörnchen einen compacten, tief schwarzen Körper, der auch aus den dicksten angeschnittenen Gefässen nicht herausfällt, sich durch Abpräpariren der Gefässwand sogar isoliren lässt, in Wasser sich nicht löst oder quillt und auch auf sehr feinen Schnitten noch homogen schwarz erscheint. ') Joseph (57. .Jahr.-Ber. Schles. Ges. Vaterl. Cultur 1880, p. 198, cit. nach Lee und Mayer, Grundzüge der mikroskopischen Technik 1898) verwendet Eiweiss mit Carmin zur Injection von Invertebraten. Doch ist diese Masse natürlich gegen Reagentien empfindlich, da Carmin leicht entfärbt wird. 12* 180 Gri'osser: Mikroskopische Injectionen mit Eiweiss -Tusche. XYII, 2. Die einzige Fixirungsflüssigkeit, welche nicht zweckentsprechend ersclieiut , ist eine reine ForraoUösung , da in derselben die Masse tagelang flüssig bleiben kann ; dagegen ist MtJLLEit'sche Flüssigkeit oder Pikrinsäure mit Formolzusatz sehr wohl zu verwenden. Der Zweck, welcher mit dieser Methode verfolgt wurde, und für den sie auch gut geeignet erscheint, war die Injection frisch getödteter kleiner Thiere , von der Grösse einer Maus und darunter, deren Gefässe vom Herzen resp. der Aorta aus gefüllt wurden, und die dann nach Abheben der Haut im ganzen tixirt wurden. Der Schädel, das Becken etc. kann dann entkalkt und in Serien zerlegt werden. Für solche Injectionen braucht man nur sehr wenig Masse (z. B. für eine kleine Hufeisennase, von welcher Art der grösste Theil der bei- gegebenen Bilder stammt, nur einige Tropfen), sodass die Arbeit des Anreibens nicht zu mühsam erscheint. Mit dem Filtrate aus dem Eiweiss zweier Eier kann man leicht sechs bis acht Hufeisennasen injiciren ; für grosse Stücke wäre das Verfahren allerdings zu langwierig. Da eine Eiweisslösung die Grundlage der Masse bildet, so übt dieselbe auf die Gefässe gar keinen Reiz aus, und das Objeet kann lebenswarm injicirt werden, ohne dass die Arterien sich contrahiren. Jede Injection ist bis zu einem gewissen Grade launenhaft, und mau wird nicht erwarten, immer eine in allen Theilen gleichmässig gute Füllung der Gefässe zu erzielen. Namentlich gewisse Organe machen der Injection Schwierigkeiten; sonderbarerweise ist es mir zum Beispiele nie gelungen , eine brauchbare Füllung der lebens- warmen Leber, sei es von der Arterie, einer der Venen oder dem Gallengauge, zu erzielen, auch wenn die Leber gleich nach der In- jection ganz schwarz aussah. Mau gewinnt den Eindruck, dass die noch lebenden Leberzellen der Masse das Eiweiss entziehen , und dass die Tuschkörnchen ganz uuregelmässig niedergeschlagen wer- den. Dagegen geben besonders das Gehirn, das Gehörorgan, die Niere, Fettgewebe und Musculatur, Knochenmark und Zahnpulpa gute Bilder. Beifolgend gebe ich einige nicht retouchirte Photographien nach Schnitten von Objecten , die lebenswarm von der Aorta ascendens aus injicirt, dann im ganzen in ZENKEii'scher Flüssigkeit, Pikrin- Sublimat oder MüLLER-Formol fixirt, zerlegt, in Phloroglucin-Salpeter- säure entkalkt und in Celloidin eingebettet geschnitten wurden. Die Schnitte vertragen , da Tusche fast reiner Kohlenstoft' ist , jede Art der Weiterbehandlung, Färbung, Differenzirung nach Weigert etc. XVII, 2. Stepanow: Celluidinschnitte vermittels Anethols. isi Erklärung der Abbildungen. Sämmtliche Bilder sind mit Zeiss' Apochromaten ohne Ocular unter Anwendung- eines Methylenblaufilters auf g-ewöhnlichen Trockenplatten auigen(unraen, und zwar Figur 1, 2, 4 und 6 mit Objectiv 16 bei etwa 40facher, Figur 3 und 5 mit Objectiv 4 bei löOfacher Vergrösserung. Figur 1 bis 5 nach Prcäparaten von Rhinolophus hipposideros. Figur 1. Lamina spiralis Cochleae. Aus einer Frontalserie durch den ganzen Schädel. Pikrin -.Sublimat nach Rabl, Phloroglucin- Salpetersäure, Stückfärbung mit Cochenillealaun, Celloidin. Schnittdicke 20 /x. Figur 2. H5qDophysis cerebri. Aus einer Frontalserie durch den ganzen Schädel. ZEXKER'sche Flüssigkeit, Phloroglucin-Salpetersäure, Cel- loidin, Schnittfärbung mit liämatoxylin-Eosin. Schnittdicke 20 fu. 1. p. lobus posterior, 1. a. lobus anterior, o. sph. os sphenoidale, b. ph. bursa pharyngea. Figur 8. Quergestreifte Musculatur im Längsschnitt (M. temporalis). Aus einer Sagittalserie, Behandlung wie beim Object der Figur 1. Vergr. 150. Figur 4. Grosshirnhemisphären an der Mantelkante. Serie der Figur 1. pl. eh. plexus choroideus ventriculi tertii. Figur 5. Fettläppchen (Winterschlafdrüsengewebe) an der Schädel- basis. Serie der Figur 3. Vergr. 150. Figur G. Dritter unterer Mahlzahn der linken Seite von der grossen Hufeisennase (Rhinolophus ferrum equinum). Schmelz abgefallen. Mülleu- Formol, Phloroglucin-Salpetersäure, Stückfärbung mit Cochenillealaun, Cel- loidin. Schnittdicke 30 ^. [Eingegangen am 12. März 1900.] Lieber die Anfertigung feiner Celloidinschnitte vermittels Anethols/ Von Dr. E. M. Stepanow, Privatdooent in Moskau. Im Lehrbliche der Bacteriologie von Heim (2. Aufl.) wird im Kapitel über die Einbettuugsmittel an erster Stelle des Anethols, - das sehr warm empfohlen ■ wird, Erwähnung gethan. Für das Ge- ^) Nach einem in der Physiologischem Gesellschaft zu Moskau am 6. April 1900 gehaltenen Vortrage. '-) Von Schimmel in Leipzig; Schmelzpunkt =26**. 182 Stepanow: Celloidinschiiitte vermittels Anethols. XVII, 2. frierverfaliren ist dasselbe eigentlich zuerst im Jahre 1892 von KüHXE ^ in die Praxis eingeführt und von beiden Autoren in fast gleicher Weise geübt worden, Avobei dieselben ausschliesslich frisches Anisöl von bester Qualität empfahlen , da altes , von Sauerstoff ge- sättigtes, einen niederen Erstarrungspunkt besitzt. Meine Versuche mit Anethol (von Schimmel in Leipzig) an ge- eigneten , nicht bröckeligen Objecten ergaben vorzügliche Resultate. Das ganze Verfahren ist leicht , einfach , gewissermaassen selbst elegant und eignet sich vorzüglich für klinische Untersuchungen, be- sonders wenn man einige, die Entwässerung und I m b i - birung des Oels beschleunigende Mo di fi cat i onen vor- nimm t. Die Entwässerung geht viel rascher von statten , wenn man an Stelle des absoluten Alkohols sich des A n i 1 i n ö 1 s , in welchem sogar die aus TOprocentigem Alkohol übertragenen Objecte in einer bis 2 Stunden aufgehellt und genügend entwässert werden, bedient. Wenn das Object schon durchsichtig , kommt es in zwei Portionen Benzol (Toluol, Xylol) für eine bis anderthalb Stunden und dann in flüssiges Anethol zu liegen. Bei solchem Verfjxhren erfolgt das Eindringen des Oels viel rascher als aus Alkohol , in etwa 6 Stunden. Die schon in 95procentigem Alkohol entwässerten Prä- parate bringt man in Benzol, wo sie in 2 bis 3 Stunden sich auf- hellen, und zuletzt in Anisöl. Die für die Gefriermethode verwend- baren Messer müssen nach dem Modell von Jung keilförmig und im JuNG'schen Messerhalter befestigt sein (Heim). Nöthigenfalls kann man das in Anethol eingebettete Object direct in Paraffin einschliessen. In diesem Falle müsste man es nur in flüssigem Anethol aufthauen lassen, in Xylol-Paraffin übertragen etc. Leider ist es unmöglich, bröckelige Präparate in Anethol ohne Celloi'din zu schneiden. Es drängt sich die Frage auf, ob man nicht Celloidin-Objecte mit Anethol durchtränken und sie dann im gefrorenen Zustande schneiden könnte. Müsste man nicht auf diese Weise viel feinere Schnitte als aus Celloidin allein bekommen? Die Hauptschwierigkeit beim Ueber- tragen von Celloidin-Präparaten in Anethol besteht in der Eigenheit des Celloidins, sich in absolutem Alkohol zu lösen. Es müssten somit andere Entwässerungsmethoden herangezogen werden, unter welchen ich nur die zweckmässigsten aufführen will : ') KtJHNE, H., Anisöl als Einbettungsmittel beim Gebrauche des Gefrier- mikrotoms (Centrulbl. f. Bacteriol. Ed. Xll, 1892, No. 1, p. 28; vgl. diese Zeitscbr. Bd. IX, 1892, p. 329). XVII, "2. Stepiinow: Celluidinsclinitte vonnittels Anethols. 183 1) Entwässerung- durch zweimal 24 Stunden währende Ein- wirkung von grossen Quantitäten 95proeentigen Alkohols und an- haltendes Durchtränken mit Anethol (bis zu 24 Stunden). 2) Viel zweckmässiger und rascher ist das Uebertragen der Objeete nach 24 Stunden aus 95grädigem Alkohol in Benzol (Xylol, Toluol) , bis sich dieselben ganz aufhellen (eine bis 2 Stunden) und dann erst in Anethol für 6 bis S Stunden , da das letztere die Präparate viel leichter aus Benzol als aus Alkohol durchtränkt. 3) Das allerbeste Mittel zur Entwässerung der Celloidin-Prä- parate, selbst aus TOgrädigem Alkohol, ist Anilinöl: in einer bis 2 Stunden ist das Präparat vollkommen aufgehellt, das Anilinöl wird in zwei Portionen Benzol extrahirt (eine bis 2 Stunden) und alsdann in Anethol eingebettet (G bis 8 Stunden). Auf diese Weise erhält man sehr gute Schnitte , nur schrumpfen die Objeete im Anilini»! etwas zusammen, besonders wenn sie im letzteren etwas zu lange liegen bleiben , doch lassen sie sich beim Einfrieren wieder leicht glätten durch vorsichtigen Druck auf das Object mit einem Spatel. Entwässerung durch Anilinöl und Einbettung in Anethol variirt für Präparate von 3 mm Dicke zwischen 6 bis 8 Stunden. 4) Folgendes Verfahren der Entwässerung währt etwas länger, zieht aber kein Zusammenschrumpfen der Präparate nach sich. Statt reinen Anilinöls nimmt man ein Gemisch von 1 Th. Anilinöl mit 1, 2, 3 Th. Nelkenöl oder Eugenol. Je mehr Nelkenöl vorhanden, desto länger dauert die Aufhellung der Präparate (2 bis 3 Stunden), Nelken- mit Anilinöl gemischt löst kein Celloidin. Der weitere Verlauf der Bearbeitung ist wie sub 3. Die nach der neuen unten an- zuführenden Methode in Celloidin eingeschlossenen Präparate können ohne vorhergehende Entwässerung direct in Anethol über- tragen werden. Das Befestigen der Celloidin-Präparate auf dem Objecttisch und die Entfernung des Anethols geschieht in der für einfache Präparate geläufigen Weise. Bei diesem Verfahren erhält man sehr dünne, bis zu 2*5 /.t dicke Schnitte (Mikrotom von Schanze). Bei zu starkem Gefrieren rollen sich die Schnitte ein ; übrigens entfaltet sich der grösste Theil derselben beim Uebertragen aus Alkohol in Wasser ohne besondere Beihilfe. Von entschiedenem Eiufluss auf die Schnittdicke ist die Vollkommenheit der Celloidin- einbettung : je sorgfältiger dieselbe, desto dünner die Anetholschnitte. Es gilt als Regel, dass die Celloidin-Präparate fast doppelt so dünne Schnitte mit Anethol als ohne dasselbe ergeben. Falls die Ein- 184 Stepanow: Celloidinsclinitte vermittels Anethols. XVII, 2. bettiing in Celloidin uiclit vollkommen gelungen, lässt sich oft die unangenehme Nothwendigkeit — das Präparat umzubetten — durch Anetholbehandhmg vermeiden. Auf diese Weise lassen sich viel dünnere Schnitte aus Celloidin , als das bislang möglich gewesen (5 und nach Lee 7'5//), erzielen. Beim Zusammenschmelzen von 2 Th, Paraffin von 40^ mit 1 Th. Anethol erhält man eine amorphe Masse , deren Erstarrungspunkt bei etwa 35*^ liegt. In diese Masse kann man die gründlich ge- härteten und mit Benzol imprägnirten Celloidinpräparate nach Durch- tränken derselben in einer Lösung, die aus gleichen Theilen des Ge- misches und Benzol besteht, einbetten. Je nach der Grösse des Präparates kommt dasselbe (im Thermostat bei 37^) in beide Me- dien 6 bis 12 Stunden zu liegen. Dann bringt man rasch das Object in ein mit den Lösungen gefülltes Papierkörbchen und lässt es er- kalten. Nach Entfernung von allem Ueberflüssigen mit einem Messer legt man das Präparat in einen Tropfen Anethol auf den Objecttisch ; jetzt lässt man es rasch gefrieren und schneidet es mit einem schräg gestellten Messer. Die Schnitte müssen während des Schneidens mit einem Pinsel geglättet werden. Will man die Schnitte auf einem Objectträger befestigen, so bringt man sie in destillirtes Wasser, wo sie meist von selbst sich glätten; dann überträgt man sie in einem Tropfen Wasser auf einen reinen Objectträger^; das weitere Ver- fahren ist das gleiche wie beim Aufkleben von Paraffinschnitten mit destillirtem Wasser. Nachdem die Objectträger mehrere Stimden im Brütofen bei einer Temperatur, die etwas niedriger als der Schmelz- punkt der Misclmng, gelegen, löst man das Anethol und Paraffin mit Benzol auf, spült die Objectträger mit 90grädigem Alkohol ab, färbt sie etc. Bei diesem Verfahren lassen sich bei einer verhältnissmässig niedrigen Temperatur (37") noch dünnere Schnitte als aus Anethol — etwa 2 ju — ■ erzielen und , was noch wichtiger , es gelingt ein Aufkleben d e r S c h n i 1 1 e a u f d e n b j e c 1 1 r ä g e r. Uebrigens sind die Versuche mit diesem Gemisch noch lange nicht abgeschlossen. ^) Nach Heim's Vorschlag bediene ich mich zum Reinigen der Object- träger eines Gemisches von Alkohol und Salmiak zu gleichen Theilen. [Eingegangen am 20. Juni 19()().] X\ll, :2. Stepanow: Eine neue Einbettung'suiethodo in Cclloidin. 185 Eine neue Einbettungsmetliode in Celloidin/ Von Dr. E. M. Stepauow, Privatdocent iu Moskau. Die gewölinliclie Eiiibettimg'smethode in Celloi'din erfordert trotz all ilirer guten Eigenschaften sehr viel Zeit (5 bis 7 Tage) und ist dem kleinsten technischen Versehen gegenüber sehr empfindlich, so dass man oft genug nicht sicher sein kann, ob die vorgenommene Einbettung aucli gelingen wird. Diese Schattenseiten veranlassten micli, uacli einem anderen, rascher nnd sicherer zum Ziele führenden Einbettungsverfahren zu suchen. Nachdem ich eine ganze Reihe von Versuchen a) mit der Centri- fuge (ohne Erfolg) und b) in fliessendem Celloi'din (mit verhältniss- mässig gutem Resultate) angestellt, beschloss ich, eine Lösung von Celloidin in Nelkenöl mit Aether anzuwenden. Die Lösung des Celloidin in Nelkenöl (oder in Eugenol) geht nur langsam von Statten; nimmt man jedoch Oel und Aether zu gleichen Theilen, so erfolgt die Lösung beim Schütteln des Ge- misches ziemlicli schnell. Es ist nothwendig, dass der Aether von guter Beschaffenheit sei (spec. Gew. ^^ 0'720), und dass das Celloidin in feinste, gut getrocknete Hobelspähne vertheilt werde ; dem Gemisch muss etwas absoluter Alkohol zugegeben werden. Die Be- schatfenheit des Oels ist weniger wichtig, doch ist gereinigtes jeden- falls besser (von GrIjeler iu Leipzig). Die Mischung cousumirt relativ grosse Quantitäten von Celloidin. Wenn später die Lösung in Folge der beginnenden Concentration nur schwierig vor sich geht, bedarf es einer weiteren Zugabe von noch 2 bis 3 Th. Aether. Auf Grund meiner Erfahrung ist eine Mischung von 1 Th. Oel und 3 bis 4 Th. Aether zu gewöhnlichen Zwecken ausreichend ; Celloidin muss so viel hinzugegeben werden , bis die Lösung dicker als Glycerin wird. Als „normale" bezeichne ich eine solche Lösung, welche folgende Zusammensetzung hat: ^) Nach einem im Physiologischen Verein zu Moskau am (». April 1900 gehaltenen Vortrage. 18(3 Stepanow: Eine neue Einbettungsmethode in Celloi'din. XVII, 2. Celloidinspähne, feinste, gut getrocknete l'o g Nelkenöl (oder Eugenol) ö'O cc Aether 20-0 „ Alkohol, absolut, tropfenweise, bis . . . 1*0 „ Je absoluter der Aether, desto grosser der Alkoholzusatz. 1*0 cc dieser Lösung enthält mehr als 6 Procent Celloidin, was der schwäcli- sten gewöhnlichen Celloidinlösung entspricht. Nach Verdunsten des Aethers und Alkohols enthält jedes Cubikcentimeter Oel 0*3 reines Celloidin, also etwa 30 Procent — mithin eine Menge, die grösser ist als in der concentrirtesten gewöhnlich gebrauchten relloidinlösung (12 bis 13 Procent). Für die Herstellung von ganz besonders feinen Schnitten kann die Concentration sehr leicht und einfach durch Zusatz zur Normal- lösung von Celloidinspälmen vermittels Aether (und Alkohol) bis 35 Procent und noch mehr erhöht werden. Das Einbettungsverfahren mit dieser „normalen" Lösung ist wie folgt : Das in Alkohol gut gehärtete, entwässerte und durch Abtupfen mit Filtrirpapier vom Spiritusüberschuss . befreite Object kommt in ein mit einem Glasstöpsel versehenes Fläschchen, das 4 bis 5 cc Nelkeuöl-Aether-Celloidinlösung enthält, und bleibt in demselben je nach der Grösse und Durchtränkungsfälligkeit des Gewebes 3 bis 6 und noch mehr Stunden liegen. Sodann öffnet man das Fläsch- clien und bringt es zum alhuälilichen Eindicken der Lösung auf 4 bis G Stunden unter ein umgekehrtes Glas oder eine Glocke, die nicht hermetisch schliessen. Nun giesst man die so eingedickte Masse sammt dem Präparat in ein kleines frei hängendes Filter aus sehr feinem Seidenpapier , lässt es ganz offen oder bringt es, um eine womöglich vollkommene Einbettung zu erhalten , unter eine nicht hermetisch schliessende Glasglocke. Noch zweckentsprechender ist es für ein schnelleres Eindicken, das Filter an einen warmen und trockenen Ort hinzustellen. Je nach der Eindickung der Masse auf dem Boden des Filters beginnt das trübe und gelb gewordene Präparat sich aufzuhellen. Je ausgesprochener die Aufhellung des Präparates und das Eindicken der Masse, desto besser die Ein- bettung. Es ist nothwendig, das erforderliche Quantum von Flüssig- keit genau zu bestimmen, damit selbst beim stärksten Verdunsten das Präparat aus der Flüssigkeit nicht hervorragt, weil sonst die Schnitte nicht ganz glatt werden. Bei ungenügendem Flüssigkeits- quantum giesst man etwas von einer normalen Nelkenöl -Celloidin- lösung hinzu und wartet das lundicken ab, was 4 bis G Stunden in X\'1I, 2. Stcpannw: Eine neue Einbettuns'sniethode in Clelloidin. IST Aiispriu'li niiiunt. Wenn die Einbettung vollendet, öffnet man das Filter und trennt das Object mit Nadel oder Spatel, welche fast ebenso gut Celloidin wie erstarrte Gelatine sehneiden, von der es umgebenden überflüssigen Masse und hebt es mit dem Spatel vom Papier ab. Die weitere Bearbeitung kann verschieden ausgeführt werden, je nachdem man das Präparat zu schneiden wünscht: I. a) Wenn man Schnitte in Alkohol herzustellen gedenkt, so bringt man das Präparat auf einen Holzkork, dessen Poren durch eine gut getrocknete Collodiumschicht hermetisch geschlossen sind, lässt ihn einige Minuten an der Luft liegen, damit die das Präparat umgebende Nelkenijl-Celloidin-Masse Zeit hat, sich an den Kork an- zukleben und versenkt ihn auf 24 Stunden in 70- bis 85grädigen Alkohol. Im Verlaufe dieser Zeit wird das Präparat genügend fest und entölt; das Härten beschleunigt man durch Zusatz von 10 bis 30 Procent Chloroform. — b) Ein viel schnelleres Härten des Präpa- rates erfolgt in Chloroform (2 bis 3 Stunden), oder in Chloroform- dämpfen (eine bis 2 Stunden) und zuletzt in 70- bis 85grädigem Alkohol (2 bis 4 Stunden). H. Das Schneiden auf trockenem Wege (analog dem Verfahren nach Lee). Das Holzstückchen mit dem Object wird auf einige Stunden (4 bis 6) mit einer Nadel an den Kork eines P'läschchens befestigt, das etwas Chloroform enthält, wodurch das Präparat Chloro- formdämpfen ausgesetzt ist. Während des Härtungsprocesses scheidet sich an der Präparatoberfläche eine Olschicht ab. (Heftet man dem Objecte einen Streifen Filtrirpapier an, so imbibirt sich das Papier mit dem Oel, und letzteres ist somit nach 10 bis 12 Stunden fast ganz entfernt.) Nach genügender Härtung des Präparates (2 bis 6 Stunden) schneidet mau dasselbe mit trockenem Messer. Die Schnitte kann man direct auf den Objectträger in einen Tropfen Oel übertragen. Die Möglichkeit , auf diese Weise Alkohol und andere Reagentien bei Seite zu lassen , hat in einigen Ausnahme- fällen eine gewisse Bedeutung, besonders wenn eine Färbung nicht nothwendig, oder das Stückchen schon früher in toto tingirt wurde. Auf diese Weise konnte ich je nach dem Härtungsgrade Schnitte von 10, 7'5 und sogar 5 /t erzielen. Selbstverständlich kann man dann das Object auf 3 bis 4 Stunden in 85grädigen Alkohol legen und später auf nassem Wege weiter schneiden. Es ist b e m e r k e n s w e r t h , dass bei dieser Einbettungs- methode das Celloidin ganz durchsichtig wird und bei weiterer 188 Stepanow: Eine neue Einbettungsmethode in Celloidin. XVII, 2. Bearbeitung- aucli so bleibt. Diese interessante Umwandhmg des Celloidins erleicbtert die Orieutirimg des Präparates beim Einstellen in die Klammern. III. Die allerbeste B ear b eitnn gsar t des frisch ein- gebetteten Objects ist die Uebertragnng desselben vom Filter in Benzol. In letzterem wird das Object allmäldicli mid gleichmässig (jedoch nicht vollständig) gehärtet, entölt und kann auf unbestimmte Zeit ohne Schaden aufbewahrt werden. Ein solches Präparat kann später nach allen bekannten Me- thoden geschnitten werden ohne viel Mühe und grossen Zeitverlust beim Uebergang von einer Behandlungsart zur anderen. So lässt das Object sich direct übertragen: 1) in Anethol (und weiter in Anethol-Paraftin, vgl. p. 184). 2) in eine Lösung von Paraffin in Benzol und sodann in flüssiges Paraffin (doppelte Celloidin-Paraffineinbettung). 8) in Cedernöl zum Trockenschneideu , nachdem das Präparat in rhloroformdämpfen vollständig gehärtet wurde (nach Lee ^); wenn nöthig, kommt es nach dem Schneiden, durch Benzol entölt, wiederum in das erstere. 4) in 85grädigem Alkohol für vollkommene Härtung und Schnei- den auf feuchtem Wege. Auf diese Weise kann man , bei Aufbewahrung eines Celloidin- objects in Benzol, nach G bis 8 Stunden Schnitte in Anethol, nach spätestens 24 Stunden eine Celloidin-Paraffineinbettung und Serien- schnitte erhalten. Dieses letztere Verfahren hat nicht nur den Vor- zug der Schnelligkeit, sondern auch den der Einfachheit. Bislang verwandte man diese P^inbettungsmethode nur in exceptionellen Fällen, weil sie viel zu umständlich und zeitraubend war. Nach der neuen Methode ist dieses Verfahren sehr einfach und wird, wenigstens für gewöhnliche, nicht ausnahmsweise schwer durchtränkbare Objecto in zweimal 24 Stunden (die Celloidineinbettung mit eingerechnet) er- ledigt. Selbst das Verfahren nach Lee, das, nach der Beschreibung zu urteilen, ein umständliches ist, wird dabei bedeutend vereinfacht und zugänglicher. Hierbei hat der Untersucher vollständig freien Spielraum , in verhältnissmässig kurzer Zeit auf Grund eigener Erfahrung die für seine Zwecke geeigneteste Methode zu wählen. Ein aus Benzol ge- ^) Lee, A. B., u. Mayer, F., Grundzüge der mikroskopischen Technik 1898, p. lOG. XVII, 2. .StcpiiiKiw : Eine neue Einbettunysmethode in Cello'ulin. 1^9 iiommenes Celloidinpräparat kann mau versuchsweise nach allen Me- tliiuleu der Eeihe nach schneiden: a) aus Benzol in Chloroformdämpfe — zum Trockenschneiden; dann b) Einleg-en in 85grädigen Alkohol — zum Schneiden auf feuchtem Wege; hierauf Entwässern des Präparats in Anilinöl, Ent- ölen und Zurückbrini;en in Benzol (es ist vortheilhafter , wenn die Grösse des Präparats es nur gestattet , von dem Benzolobjecte ein Stückchen für Probe a und b abzutrennen). c) Einschliessen aus Benzol in Anethol und Gefrierverfahren. d) aus Anethol direct in Anethol-Paraffin-Benzol und dann in Anethol-Paraftin, wenn man möglichst feine Schnitte ohne zu starkes Erwärmen erhalten und sie auf deu Objectträger festkleben will. e) nach der unter c und d genannten Bearbeitung kann mau das Object direct in Benzol-Paraffin und reines Paraffin übertragen. Selbstverständlich ist diese Reihenfolge nicht die einzige und kann nach Wunsch eines jeden Untersuchers modificirt werden, Nachdem ich die Ausarbeitung der Grundlagen meiner neuen Einbettungsmethode in Celloidin beendet, theilte ich dieselben Herrn Professor J. F. Ogneff , der ein reges Interesse für dieses neue Verfahren zeigte, und dem ich die Verwendung des Eugenol statt des Nelkenöls so Avie einige literarische Himveise verdanke , mit. Professor Ogxeff schlug mir vor, die Brauchbarkeit dieser neuen Methode an dem schwierigsten Object für Einbettungszwecke, an Axolotl-Eiern zu prüfen. Das soeben geschilderte Einbettungsverfahren schlug aber bei diesem Untersuchungsobject vollständig fehl. Ich suchte nach dem Grund dieses Misslingens imd legte mir die Frage vor, ob es niclit abhängen könnte erstens davon, dass icli an- fangs zu dicke Lösungen genommen und zweitens, dass ich die Objecte direct aus Alkohol in die Mischung gebracht. Ich beschloss daher zu versuchen, ob nicht ein besseres Eiubettungsresultat zu erzielen wäre , wenn ich die entwässerten Objecte zuerst in Aether oder Nelkenöl liegen Hesse. Gleichzeitig prüfte ich auch die Entwässerung mit Anilinöl (Entölen mit Benzol, Uebertragen in Nelkenöl und Aether -Nelkenöl -Celloidin). Nach starker Verdünnung^ der con- centrirteren Nelkenöl - Aether - Celloidinlösung (2- bis omal) und der Ueberführung der Objecte durch Nelkeuöl, erhielt ich eine ganz ^) Entsteht dabei eine milchige Trübung, so muss absoluter Alkohol tropfenweise hinzugefügt und die Lösung so lange kräftig geschüttelt wer- den, bis sie sich ganz klärt. 190 Stcpanow: Eine neue Einbettungsmethode in Celli)idin. XVII, 2. ausgezeichnete Einbettung, namentlich wenn sie aus dem Oel stammten. Beim Schneiden von auf diese Weise bearbeiteten Objecteu in Alkohol gewann ich Schnitte von 5 /t Dicke und liei Anwendung von Anethol selbst von 3 /* Dicke ; diese letzteren , wenngleich nicht ganz heil, erweisen sich als vollkommen tauglich für feinere histologische Studien bei Anwendung starker Linsen. Dieses Einbettungsverfahren währte zwei- bis zweieinhalbmal 24 Stunden , durchaus keine allzu lange Dauer, weun man die exceptiouellen Eigenschaften des genannten Ob- jects in Betracht zieht. Der Versuch mit dem Axolotl-Ei weist auf die Nothwendigkeit hin, bei dem neuen P^inbettungsverfahren der Imbibi- tionsfähigkeit der Objecte besondere Aufmerksamkeit zu schenken : leicht durchträukbare Objecte kann man in Lösungen von Glycerincon- sistenz einbetten, aber je feiner die Schnitte, desto stärker muss die erste Lösung mit Aether und Alkohol verdünnt werden ; auch ist es sehr vortheilhaft (jedoch nicht absolut nothwendig) , die vorher ent- wässerten Objecte mit Nelkenöl bis zum Aufhellen zu durchtränken.^ Einige wenige Versuche habe ich auch mit dem Einbettungsverfahren nach GiLsoN in Celloidin- Nelkenöllösung gemacht; es ergaben mir dieselben , dass man durch Erwärmen in einer Paraffinwanne (bei 55^) im Laufe von 2 Stunden, also langsamer als bei Collodium- verwendung, ein kleines Object mit der neuen Masse durchtränken und seine Aufhellung erreichen kann. Zum Schluss der Arbeit will ich auf die wichtigsten Vorzüge meines neuen Verfahrens hinweisen. 1) Die Manipulationen bei demselben sind ebenso einfach wie bei der gewöhnlichen Methode, jedoch ist die Zahl der ersteren geringer, 2) Die Imbibition vollzieht sich viel schneller (in weniger als 24 Stunden). 3) Die Einbettung ist so vollständig, dass sehr feine Celloidin- schnitte (bis zu 3 /.i) erzielt werden. 4) Die ControUe des Einbettungsganges ist sehr bequem und leicht (das Aufhellen des Präparats). 5) Das nach diesem Verfahren eingebettete Object eignet sich sehr gut für alle möglichen Combinationen der verschiedenen Ein- bettungsmassen und Schneidemethoden. Von besonderem Werthe ist die Leichtigkeit und Schnelligkeit der Einbettung in Celloidin-Paraffin, ^) Das vom Oel durchtränkte Präparat vermindert, besonders wenn es zu gross ist, die Concentration der Nelkenöl-Celloidinlösung, was durcli Zusatz v(:n trockenen Celloidinspälinen l»eseitigt werden kann. XVII, "2. J ( ) r d a n : Anwendung von Celloidin in Mischung mit Cedernholzül. 1 9 ] mitliin ist die Möglichkeit eines viel ausgiebigeren Gcbranches dieser Conibinatiüii, als dies bisher der Fall gewesen, geboten. (■)) Die Möglichkeit, bei der Einbettung (durch Anilinölj Alkohol \()n über 70 bis 80 Grad entbehren zu können, was manchmal wichtig ist, z. B. bei Untersuchung des Nervensystems. 7) Kurzes Verweilen der Objecte in den Einbettungslösungen. Endlich sei noch bemerkt, dass die Aether-Nelkenöl-Celloidin- lösuug auch voraussichtlich das Verfahren für die Celloidin-Corrosions- präparate vereinfachen wird ; Versuche nach dieser Richtung beginne ich in nächster Zeit. — Zum Schluss ist es mir eine angenehme Pflicht, meinen innigsten Dank Herrn Professor Dr. J. F. 0(;neff, sowie auch seinen Mit- arbeitern, den Herren Dr. Gardner und Rudxeff hier auszusprechen, desgleichen Herrn Dr. Genkix, der mir bei Ausfühnmg der Versuche hülfreich zur Seite gestanden. [Eingegangen am 20. Juni 1900.] . [Aus der Zoologischen Station zu Neapel.] Ueber die Anwendung von Celloidin in Misclmng mit Cedernholzöl. Von H. Jordan, stud. phil., zur Zeit in Neapel. Es ist nicht das erstemal, dass ich über eine solche Mischung zu berichten habe ; bereits bei der Beschreibung eines neuen Appa- rates zur Orientirung kleiner mikroskopischer Objecte^ gebe ich eine Mischung von Collodium und Cedernholzöl zur Fixirung des Objectes auf der Orientirungskugel an, und zwar deswegen, weil es mir dar- auf ankam , das betreffende Befestigungsmittel für Paraffin leicht durchdriugbar zu machen. In der That fand ich, dass die ge- 1) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVI, 1899, p. 33. 192 Jordan: Anwcmlimg vonCelloidiniiiMi.scliungiiiit Cedornliolzöl. XVII, "i. wonnenen Häute, in Paraffin eingebettet, sicli ganz vorzüglich schnitten. Als icli nun bei Gelegenheit diese Eigenschaft benutzen wollte, um Streifen darzustellen, die als Zeichen in einen Paraffinblock einge- schlossen werden sollten, fand ich, dass die gewonnene Membran sich im Gegensatz zu einer solchen aus gewöhnlichem Celloidin beim p]introcknen, besonders in der Wärme, nicht krümmte, sondern immer geschmeidig blieb. Da ich glaubte, es mit einem Körper zu thun zu haben , dessen Eigenschaften in mancherlei Weise vortheil- haft für die Mikrotechuik sein könnten, so habe ich versucht, die- selben eingehender zu untersuchen, und erlaube mir im Folgenden meine Resultate mitzutheilen : I. Eine, wenn auch nicht gerade wesentliche Hülfe, kann uns das Cedernholzöl-Celloi'din oder -CoUodium bei einer viel angewandten Methode leisten, nämlich bei brüchigen Objecten vor jedesmaligem Schneiden die Oberfläche des Blockes mit einer feinen Collodiumhaut zu überziehen. Gelingt es nämlich nicht, dieses Häutchen sehr dünn darzustellen, so kann es leicht vorkommen, dass sich dasselbe nach oben krümmt, und so mindestens das Strecken der Schnitte ver- hindert, das auch bei dieser Methode recht nothwendig ist. Nehmen wir statt des einprocentigen reinen Collodiums solches oder Celloidin von ein halb bis ein Procent, dem wir wenige Tropfen Cedernholzöl zusetzen (5 Tropfen auf etwa 1.5 cc), so fällt dieser Uebelstand weg, ohne dass andere Nachtheile dafür in den Kauf zu nehmen wären. Die Anwendung unterscheidet sich durch nichts von der bisherigen. n. Ich legte Stücke von jener, aus unserem Gemisch hergestellten Membran auf einen mit Eiweissglycerin bestrichenen Objectträger und und zwar so, dass sie auf einer Wasserschicht schwammen, liess dann das Wasser in der Wärme verdunsten und fand, dass die Membran am Glase festgeklebt war, ohne sich im geringsten gerollt oder abgeblättert zu haben. Dass diese Thatsache von Werth ist, liegt auf der Hand, denn man kann wohl sagen, eine vollständig befriedigende Methode, Celloidinschnitte aufzukleben, gicbt es bislang nicht. Diejenigen, die ein Lösungsmittel des Celloidins verwenden (besonders Apathy) lassen das Ablösen der Einbettungsmasse nicht zu, was oftmals recht nothwendig ist. Ebensowenig — nach An- gaben des Autors selbst — thut dies diejenige von Argutinski^ o ^) Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. LV, 1900, p. 415; sie (die Präparate) vertragen jede Behandlung und jede Flüssigkeit, sofern diese das Eiweiss (oder das Celloidin) nicht auflösen, resp. angreifen. XVII, 2. Jordan: Anwendung von Celloidin in Mischung mit Cedernholzöl. 19;] (Eiue einfache und zuverlässige Methode, Celloidiuserien mit Wasser und Eiweiss aufzukleben). Ich habe übrigens diese letztere versucht, und zwar mehrere Male, genau nach Vorschrift, und habe ge- funden, dass sich die Schnitte mit grosser Zuverlässigkeit vom Object- träger abgelöst haben. Das Auflösen des Celloidins ist zulässig bei der von mir angegebenen Methode,^ doch ist auch sie keineswegs einwaudsfrei. Vorab ist sie, besonders für Serien, unbequem. Ferner hat sie sich zwar in meinen Händen recht gut bewährt; dagegen habe ich von anderer Seite das Gegentheil gehört. Es wird sich wohl immer darum gehandelt haben, dass die Betreffenden es scheuten, ihre Objecte dem nöthigen Wärmegrade auszusetzen. Ob es nun un- empfindlicher Präparate bedarf — wie der meinigen ^ — ^ denselben auszu- halten, vermag ich nicht anzugeben; wie dem aber sei, eine Methode muss, will sie anders ihren Platz behaupten, jedenfalls auch indivi- duellen Ansprüchen genügen können. Das Verfahren also , welches ich im Folgenden anzugeben gedenke , steht — glaube ich — unseren Methoden zum Aufkleben von Paraffinschnitten nicht wesentlich nach: Die zu behandelnden Stücke werden in hergebrachter Weise mit Celloidin durchtränkt; nur setzt man diesem Medium auf je 4 Th. 1 Th. Cederuholzöl zu. Nimmt man zuletzt Celloidin von hoher Concentration, so verringert man den Oelzusatz (Sprocentiges Celloidin 5 Th., Cedernöl 1 Th.). Man härtet nun nicht in Alkohol, sondern in einem Gemisch von Chloroform etwa 5 Th., Cedernöl 1 Th. Ich verfahre dabei übrigens so : In einer Papierform bringe ich das Object in die angegebene Mischung von Sprocentigen Celloidin 5 Th., Cedernöl 1 Th., dann das Ganze auf kurze Zeit in Chloroformdämpfe, und tauche, nachdem sich eine Haut gebildet hat, in die Härtungsflüssigkeit unter. Diese wird mehrere Male gewechselt, dann warte ich einige Tage, bis der Block hart genug zum Schneiden geworden ist. Will man den Block auf einen Holzklotz aufkitten, so wird die Berührungs- stelle kurz in absoluten Alkohol und Aether getaucht und dann wie bekannt verfahren. Geschnitten wird in herkömmlicher Weise und zwar empfehle ich, das — möglichst schräg gestellte — Messer mit der Erhärtungsflüssigkeit zu befeuchten ; trocken zu schneiden ist möglich , doch meines Erachtens nicht so rationell. Was nun das Aufkleben anbetrifft, so habe ich folgende Wege versucht. 1) Habe ich die Schnitte , reichlich in der Chloroformmischung schwimmend, auf reine Objectträger gebracht und einfach antrocknen lassen ; 1) Diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 50. Zeitschr. f. wiss. Mikroskopie. XVII, 2. 13 194 Jordan: Anwendung von C'elloi'din in Mischung mit Cedernholzöl. XN'II, 2. 2) liabe ich bei im übrigen gleiclicm Verfahren den Objeottriiger mit Eiweiss nach P. Mayer; 3) gleichfalls mit Eiweiss bestrichen und mit Wasser bedeckt. Meist wurde zum Trocknen Wärme zu Hülfe genommen. Alle drei Verfahren haben vorzügliche Resultate geliefert. Am wenigsten zu empfehlen ist das erste, dagegen sind die beiden anderen gleichmässig gut, ich habe dies immt.' wieder be- stätigt gefunden, so unwahrscheinlich es auch klingen mag. Die von mir benutzte Methode ist natürlich die zweite. Auf den bestrichenen Objectträger werden die Schnitte möglichst glatt in Chloroform auf- gelegt (dieses Chloroform enthält besser etwas weniger Oel als das zum Härten verwandte), sie strecken sich auffallend gut und haften nach wenigen Minuten Trocknens sehr fest, besonders in der Wärme. Dann kommen sie in absoluten Alkohol und Aether, wenn man das Celloidin ablösen will, und die Weiterbehandlung bietet nichts Neues. Ich habe nun versucht, gewöhnliches Celloidin nachträglich in Cedern- holzöl zu bringen und ebenso zu behandeln , doch haben sich die Schnitte stets nach oben gekrümmt und sind abgegangen. Dieser Unterschied wirkt um so befremdender, als man durch Ausziehen des Oeles aus unserem Celloidin mit Alkohol oder etwa Xylol dasselbe seiner wesentlichsten Eigenschaften berauben kann. Wir haben uns bis jetzt nur eine Eigenschaft unserer Masse zu Nutzen gemacht, diejenige, beim Trocknen nicht die Form zu ver- ändern. Untersuchen wir nunmehr die Vei'wendbarkeit der zweiten, nämlich der, dass die Masse bei Paraffindurchträukuug nicht zu hart wird. HI. Einbettung des CeUoidins in Paraffin auf her- kömmliche Weise. Eine Erwähnung der Literatur kann ich mir sparen, die Methoden sind hinlänglich bekannt, auch richte ich mich ganz nach den Angaben, nur substituire ich meine Mischung dem reinen Celloidin. Ich verfahre also so : Die Objecte werden mit Celloidin 2- bis Sprocentig 4 Th. und Cedernholzöl 1 Th. durchtränkt, und aus dieser Mischung nach der zur Durchtränknng nothwendigen Zeit in Chloroform (kein anderes Mittel) 4 Th., Cedernöl 1 Th. über- tragen. Dieses wird bis zur Entziehung des Alkohols und Aethers mehrere Male gewechselt. Hieraus kommen die Stücke in eine Mischung von Paraffin und Chloroform oder Benzol mit einigen Tropfen Cedernöl, wo sie bei etwa 30*^ bis zur Durchtränkung bleiben. Nun in reines Paraffin, welches auch mehrmals zu wechseln ist und nicht zu lange einwirken soll. Zeitmaasse anzugeben ist unmöglich, da diese zu sehr von der Grösse der Stücke abhängen. Im übrigen , V , XVII, 2. Jordan: Anwendung von Celloidin in Mischung- mit Cedernholzöl. 195 behandelt man die Objecte wie solclic, die in reines Paraffin einge- bettet werden. Je nach dem Object ist die Methode zu variiren: Die Masse ist weicher, wenn man Celloidin von geringer Concen- tration Avählt (2procentig), das Object (etwa Dotter oder Muskehi) bleibt weicher, wenn man die Paraffindurchtränkung hauptsächlich in der Benzollösung, also bei 30 ^ vor sich gehen, und nur kurze Zeit ■ in reinem Paraffin lässt. Bei grossen Objecten , d. h. solchen, die über etwa 8 mm lang sind, kommt es vor, dass sich beim Schneiden der Paraffinmantel zusammenschiebt, während das Celloidin das nicht thut. Dadurch entstehen Falten, die sich — zum Unterschiede von auderen — auf warmem Wasser nicht strecken können ; solche Objecte bringt man in der unter IL beschriebenen Weise in einen Block, bettet diesen ein und entfernt beim Schneiden den Paraffinmantel oder lässt nur einen schmalen Rand bestehen. Was übrigens das Paraffin betrifft, so sei bemerkt, dass es sich recht schlecht schneidet, wenn es Cedernöl enthält ; man wechsle daher beim Durchtränken dasselbe öfters. Will man Bänder schneiden , so sorge man , dass ein genügender Paraffinmantel vorhanden sei. Ich habe mit dieser Methode grosse Objecte (20 mm) mit Leiclitig- keit in lückenlose Schnittserien zerlegen können , kleinere Objecte bis zu einer Schnittdicke von 2 [i herab, wobei dann der Paraffin- raantel in Stücke ging. Während auf der einen Seite diese Methode vor der Einbettung in reinem Paraffin keinerlei Nachtheile hat (es sei denn, dass sie etwas umständlicher ist), so besteht in erster Linie ihr Vortheil darin, dass die Schnitte viel weniger leicht zerreissen als die aus reinem Paraffin, und dass bei ihnen keinerlei Zusammenschiebung mit ihren imliebsamen Folgen stattfindet. Ans diesen Gründen wende ich sie bei der Anfertigung von Schnittserien durch Selachier-Embryonen stets an: Schnittserien übrigens, die ich in lauter Einzelschnitten als ein- zige Garantie für Lückenlosigkeit darstelle. Dies um keine Miss- verständnisse hervorzurufen. Bei einer Reihe von Objecten wird aber unser Verfahren geradezu zur Nothwendigkeit ; ich habe Dotterstücke von Scyllium , Pristiurus, Mustelus und Torpedo , ferner Embryonen dieser Arten, die in ihrem Darme Dottermasse enthielten, habe Augen- häute und überhaupt bindegewebige und muskelhaltige Organe mit bestem Erfolg geschnitten, während entsprechende Stücke, in reinem Paraffin eingebettet, sich überhaupt nicht schnitten. Auch die analogen Methoden habe ich mit reinem Celloidin versucht und gefun- den , dass sie sich für Stücke, in der von mir gewünschten 13* 1 9 6 J <> 1" t^ =1 n • Anwendung- v( )n Cell* )i(lin in Mischung mit Cedernliolzöl. XYII , 2. Grösse nicht bewährt hat, die Masse war hart und brüchig. Schon bei 7'5 f.i Dicke, wich das Messer bei jedem zweiten Sclinitte ans, dabei macht es keinen Unterschied, wenn wir die Objecte nach der Härtnug des Celloidins in Cedernöl bringen. Mit anderen Worten : es gestattet uns die Nenerimg, die alten, zum Theil wohl bewährten Combinationen der Celloidin- und Paraftineinbettuug auch für grössere Stücke anzuwenden. '^ Objecte, die sehr reich an Bindegewebe oder Mnsculatur sind, werden anch bei diesem Verfahren zum Sclmeiden zu hart, und es würde sich in erster Linie darum handeln, eine combinirte Methode zu finden, bei der die Anwendung hoher Temperatur vermieden wird. — IV. Durchtränkung von Celloidin mit Paraffin ohne Anwendung hoher Wärmegrade. Dass es eine Nothwendig- keit gibt , gar manche Objecte nicht höherer Wärme auszusetzen, beweist, dass man, diese zu umgehen, oftmals gern die Nachtheile der Celloidinmethode in den Kauf nimmt. Diese Nachtheile nun werden nach meiner Ansicht ausser durch die Schwierigkeit, die Schnitte aufzukleben , durch die Consistenz des Mediums bedingt, welche das Anfertigen gleichmässiger, dünner Schnitte be- trächtlich erschwert. In diesem Abschnitt will ich ein Verfahren be- schreiben , welches hoffentlich auch diesem letzteren Uebelstande al)- helfen soll. Die Objecte werden mit unserer Mischung von Celloidin und Cederuholzöl durchtränkt, und wie in Methode II der Block her- gestellt, der nach Entziehung des Alkohols und Aethers in eine mög- lichst concentrirte Lösung von Paraffin von etwa 50^ Schmelz- punkt (doch kann dieser für verschiedene Objecte verschieden sein) in Benzol oder Toluol etc. , der man wenige Tropfen Cederuholzöl zu- setzt, gebracht ; das Ganze setzt man der Maximaltemperatur aus, die man für zulässlich hält ; ich wende 30*^ C. an, eine Temperatur, die im Sommer hier in Neapel normale Zimmertemperatur ist, und die uns doch schon wesentliche Hülfe leistet. Mit dieser Mischung durch- tränkt man das Object möglichst gründlich, nimmt dann den Deckel des Gefässes ab, damit das Benzol, oder was es sonst sei, verdunste ; man kann auch noch einmal die Lösung wechseln, indem man dann das Cedernöl weglässt, doch ist dies Verfahren nur bei Objecten an- zuwenden, die von Natur nicht sehr consistent und hart sind. Ist ^) Die FiELD und ÄL\RTiN'sche Methode (Bull, de la Soc. Zool. de France t. XIX, p. 48), die dies auch erreichen soll, hat F. Mayer schon kritisirt (Lee, A. B. u. Mayer, F., Grundzüge der mikroskopischen Technik p. 108). XVII, 2. Jordan: Anwendung von CelloidininMischun^mitCedernholzöl. 197 die ganze Lösung mm breiartig geworden, so nimmt man den Block heraus, um nun noch den Rest des Lösungsmittels verdunsten zu lassen. Je gründlicher das geschieht , desto besser schneidet sich das Object; mittelgrosse Stücken Hess ich einen Tag offen bei 30", dann 5 Tage bis zu einer Woche in einer Schublade zum Trock- nen liegen, grosse Objecte brauchen meist eine Woche, natürlich nur dann , w^enn sie selber keine besonders feste Consistenz haben, und man dünne Schnitte erzielen Avill (Augen). Schon nach 2 Tagen ist sonst der Block schnittftihig. Diese lange Wartezeit ist natürlich ein üebelstand, der mich veranlasste, die Methode nur zu brauchen, wenn sie wirklich nothwendig war, das Verfahren aber sonst durch vollständige Einbettung in Paraffin abzukürzen. Nach gründlicher Entfernung des Lösungsmittels kann man leicht bei mittelgrossen Ob- jecten Schnitte von 5 //, bei kleinen aber von 3 [jl erzielen (diese Versuche wurden mit reiner Einbettungsmasse und einigen sehr gün- stigen Objecten, wie Selachierdarm, vorgenommen). Zum Schneiden wird der Block mit viel Paraffin aufgeschmolzen (oder natürlich besser der ganze Block eingeklemmt) Messerstellung und Führung ist wie bei reinem Paraffin, nur sind Bandserien ausgeschlossen. Ebenso wie Paraffinschnitte werden die unsrigen aufgelegt, gestreckt und aufgeklebt. Dann wird das Paraffin, und, wenn man will, das Celloi- din abgelöst. Wieder habe ich Versuche gemacht, unserer Mischung reines Celloidin zu substituiren, ein Versuch der keine eigentlich brauchbaren Resultate gab, die Masse war knorpelig und wurde bei längerem Liegen so hart, dass sie nicht mehr geschnitten w^erden konnte. Setzt man nun der Paraffinlösung etwas Cedernöl zu, so wird der Block zwar nicht so hart, doch bleibt er knorpelig, eine Consistenz, die die Anfertigung feiner Schnitte erschwert. Auch dieses eben beschriebene Verfahren habe ich für eine ganze Reihe von Objecten mit grossem Erfolg benutzt ; in erster Linie an einigen Stücken von puerperalem Uterus, die ich der Güte des Herrn Dr. Poso, Assistent an hiesiger Gynäkologischen Klinik, verdanke. Conservirt waren die Stücke theils in doppeltchromsäurem Kali, theils in Formol zu 10, theils zu 4 Procent. Behandelt wurden sie alle gleicherweise. Es wurden Schnitte angefertigt zu 15 ^ (die Objecte waren etwas lange in der Lösung gewesen, und sogar einige Minuten in reinem Paraffin bei 60®). Grösse der Schnitte Länge 39 mm 31 mm 30 mm Breite (3 „ 8-5 „ 9 bis 10 „ zu 10 /^ (normal behandelt) Länge 25 mm Breite 4'5 mm. 198 J'*i'(^^ii- Anwendung von Celloidin in Mischung mit Cedernh(;lzül. Xyil,2. Ich hebe ausdrücklich hervor, dass die Schnitte serienweise ge- schnitten werden, und zwar so, dass Sclmitt für Schnitt gleichmässig dick und brauchbar war. Ferner wurden Versuche mit grossen Dotter- stücken und Augen gemacht, bei jenen und den Häuten von diesen hatte ich immer gute Resultate : Was aber die Augenlinse, besonders jedoch den Linsenkern betrifft, so war wenig Erfolg aufzuweisen. Versucht wurden freilich meistens Linsen, die auch in Celloidin allein Schwierigkeiten machen (besonders Loligo). Ob man auch diesem abhelfen kann, indem man statt des Paraf- fins zur Durchtränkung des Celloidins andere Mittel nimmt, werde ich später untersuchen. [Eingegangen am 4. März 1900.] XVII 2. Referate. 199 Referate. 1. Präparationsmethoden im allgemeinen. Benda, C, Paula Günther's neues Lupen Stativ (Arch. f. Anat. u. Physiol., Pliysiol. Abtheil., 1900, H. 1, 2, p. 179—180). Benda hebt hervor, dass die im Gebrauch befindlichen Lupen- stative einmal zu leicht gebaut sind , so dass sie nicht die nöthige Stabilität besitzen und anderseits nicht hinreichend beweglich sind, um in die nöthigen Stellungen gebracht werden zu können. Auch lässt der nöthige Halt in den Gelenkverbindungen oft bald nach. Diesen Missständen soll das neue Stativ von Paula Günther (D. R. G. M. 118 634) mit einfachen Mitteln abhelfen. Nach der Beschreibung erhebt sich auf einer soliden, ziemlich schweren Metallplatte von etwa 20 cm Länge und 13 cm Breite eine Metallstange von 32 cm Länge. Auf dieser läuft eine nach oben und unten verschiebbare und dreh- bare Röhre , die durch Stellschrauben fixirbar ist. Die Röhre ist mit einem horizontalen Arm von etwa 40 cm Länge fest verbunden, so dass dieser allseitig um die Verticalstange beweglich ist. Der Arm besteht aus 2 etwa gleichlangen Gliedern , die durch ein in der Horizoutalebene bewegliches Charnirgelenk verbunden sind. Auch dieses Charnir ist durch Stellschrauben fixirbar. Das distale Glied ist hohl und nimmt den 20 cm langen Lupenstiel auf, der wieder ausziehbar, drehbar und durch Stellschraube fixirbar ist. Durch diese Anordnung soll die Lupe in jeder Stellung mit Sicherheit fest- zuhalten sein. Die dem Apparat beigegebene einfache Lupe hat 200 Referate. XYII, 2. einen Durchmesser von 9 cm und etwa 10 cm Focus. Sie kann durch jede beliebige, auf gleichem Stiel montirte Lupe ersetzt wer- den. Der Apparat ist zunächst zum Zeichnen bestimmt, kann aber natürlich auch als Präparirlupe und als Beleuchtungslinse dienen. Er wird von der Waagenfabrik von Reimann, Berlin SO., Schmid- strasse 32, für 21 Mk. geliefert. Schiefferdecker {Bonn). Wyhe, J. W. van, A simple and rapid method for pre- p a r i n g neutral P i k r o - c a r m i n e (Koninklyke Akade- mie van Wetenschappen te Amsterdam ; Proceedings of the Meeting of February 24, 1900). Bei der Untersuchung von jungem embryonalem Gewebe, welches nach der durch Osmiumsäure hervorgerufene Schwärzung gebleicht worden war , Hess ein nach einer der üblichen Vorschriften her- gestelltes Pikrocarmin den Verfasser im Stich. Die Kerne tiugirten sich erst nach zwei Wochen, während das Protoplasma die Färbung nur in einer neutralen Lösung annahm. Die nach den bekannten Vorschriften hergestellten Plüssigkeiten zeigten sich alle mehr oder weniger alkalisch. Die Formel des Verfassers, welche obigen Uebel- ständen abhelfen soll, schliesst sich am meisten der HoYEn'schen an. Am besten geht man von einer alten starken Carminlösung (30 g Carmin wird gelöst in einer Flüssigkeit, die aus 2 Th. destil- lirtes Wasser und 1 Th. Ammonia [10 Procent] besteht) aus. Wie bemerkt, soll die Lösung gehörig alt sein. Zwei Jahre ist jedenfalls genügend. Dann ist die Flüssigkeit vollkommen gereift. Statt dessen kann aber auch eine künstlich gereifte Carminlösung verwendet wer- den. Um nämlich diese Reifung in kurzer Zeit herbeizuführen, ge- nügt es künstlich eine Oxydation zu Stande kommen zu lassen. 10 g trockenes Carmin wird mit 10 c M"' Ammonia und 20 c M^ Wasser- stoffsuperoxyd (statt dessen kann eine gleiche Menge einer einprocen- tigen Lösung von Kaliumpermanganat verwendet werden; in diesem Falle jedoch kann die Oxydation leicht zu weit geführt werden) kurze Zeit gekocht. In dieser Weise kann eine gereifte Carmin- lösung in wenigen Minuten bereitet werden. 25 c M"^ der Carmin- lösung werden 100 c M^ eines 96procentigen Alkohols zugesetzt. Nach einer halben Stunde Avird abtiltrirt. Das auf dem Filter be- findliche Präcipitat wird mit 100 c M'^ desselben Alkohols gewaschen und nachher 24 Stunden im Thermostat bei 40 bis 45^ C. getrocknet. Das in der angegebenen Weise erhaltene Ammoniakcarmin soll eine fast schwarze Masse bihlcn, welclie sich leicht zu einem Pulver zer- XVII, 2. Referate. 201 reiben lässt und in Wasser wie ancli in wässerigen Lösungen von Ammoninnipikrat vollständig- löslich ist. Das zu verwendende Animo- uiumpikrat darf keine Spur freier Pikrinsäure enthalten. Das von Grübler bezogene genügte dieser Forderung. Wer sich das Salz selber herstellen will, befolge folgende Vorschrift. 9 g Pikrinsäure wird in 100 c M"^ eines 96procentigen Alkohols gelöst und dieser Lösung wird 15 c M'' Ammonia zugesetzt. Die Lösung wird im Thermostat bei 60*^ C. zum Trocknen abgedampft. Das günstigste Verhältniss zwischen dem Ammoniakcarmin und dem Ammoniumpikrat wird erreicht, wenn man einer einprocentigen Lösung des pikrin- sauren Salzes Y^ Procent des Ammoniakcarmins zusetzt. Die in dieser AVeise erhaltene Flüssigkeit jedoch ist nicht vollkommen neutral, sondern noch immer schwach alkalisch. Wird die Flüssigkeit wäh- rend einer Viertelstunde auf dem Wasserbade gekocht, so erhält man eine Lösung, welche praktisch vollkommen neutral ist. Die ver- loren gegangene Flüssigkeitsmenge wird durch destillirtes Wasser ersetzt. Bei der Abkühlung bildet sich ein ganz winziges Präcipitat, das sicli leicht abiiltriren lässt. Als Antisepticum wird ein Procent Chloral (nach Hoyer) zugesetzt. O. C. ran Walsem {Meereiiherg). Laurent , M. , Über eine neue Färbemethode mit neu- traler E s i n - M e t h y 1 e n b 1 a u m i s c h u n g , anwend- bar auch auf andere neutrale F a r b g e m i s c h e (Centralbl. f. allgem. Pathol. u. f. pathol. Anat., Bd. XI, 1900, p. 86—97). Wenn man sich fragt , worin der Grund liegt , dass die bis- herigen Färbemethoden mit Eosin und Methylenblau so wechselnd im Resultat und so schwierig in der Handhabung sind, so dürfte die Erklärung hierfür wohl in der grossen chemischen Verwandtschaft dieser beiden Farbstofie zu suchen sein. Diese chemische Verwand- schaft zeigt sich besonders, wenn man Lösungen beider Körper zu- sammenbringt. Es fällt dann ein Niederschlag aus , der eben eine Verbindung der beiden Farbstoffe ist. Untersuchungen hierüber sind von Romanowski, ^ Ziemann "^ und Rosin ^ ausgeführt worden. Bei der Färbung von Schnittpräparaten mit den von Rosin angewandten ') KoMANOWSKi, Zur Frage der Parasitologie und Therapie der Malaria. St. Petersburg 1891. -) Vgl. diese Zeitschr. Bd. XV, 1898, p. 45G. "") Vgl. diese Zeitschr. Bd. XVI, 1899, p. 223. 202 Referate. XVII, 2. Lösungen erhielt Verf. keine befriedigende Resultate. Er stellte sich daher die Aufgabe , den neutralen Farbstoff in Wasser löslich zu machen. Bei seinen Versuchen war ihm aufgefallen, dass der fein krystallisirte Niederschlag, der sich bei dem Zusaramengiessen von wässerigen Eosin- und Methylenblaulösungen bildet, beim Aufkochen der Mischung wieder verschwindet. Anschliessend an diese Be- obachtung stellte Verf. eine Anzahl von Versuchen an und erhielt verschiedene neutrale Farblösungen, welche er auf Schnitt- und Trockenpräparate anwendete. Die Färbewirkung der verschiedenen Lösungen war verschieden. Hierfür glaubt Verf. die folgende Er- klärung gefunden zu haben : Die Verbindung der beiden Farbstoöe, des Eosins und des Methylenblaus , ist eine äusserst lockere. Der neutrale Farbstoflt' ist löslich in Alkohol, fast unlöslich in kaltem Wasser; in heissem Wasser löst er sich auf. Hierbei scheinen je- doch beide Körper in den Zustand der Dissociation zu gerathen. Diese Lösung färbt daher blau und roth, weil die beiden Farbstoffe eben neben einander vorhanden sind. Beim Filtriren nimmt das Filter den blauen Farbstoff auf und lässt . den rotheu passiren. Setzt man das Kochen länger fort, so tritt die blaue und rothe Farbe im Präparate immer mehr zurück, um einer diffusen Violettfärbung Platz zu machen. Durch den Einfluss des Kochens vereinigen sich beide Farbstoffe fester mit einander, befinden sich nicht mehr im Zustande des Dissociation, färben also violett. Mit einer bestimmten Färbung (Färbung Nr. 5) erzielte Verf. schliesslich die besten Resultate. Technik dieser Methode: Verf. benutzte das Eosin -Kalium, d. h. das Tetrabromfluorescinkalium (Grübler), als Methylenblau das Methylenblau chemisch rein und chlorzinkfrei fad usum internum) von Merck in Darmstadt. Es ist dies das Chlorhydrat des Methylen- blaus. Die chemische Formel dieser beiden Körper ist für das Eosin-Kalium Cgg Hg K2 Br^ 0- , dies entspricht einem Molecular gewicht von 724. Für das Methylenblau lautet die Formel C'ig H^g N3 S.Cl mit einem Moleculargewicht von 319'4. Ein Molekül Eosin als zweibasische Säure bindet zwei Moleküle Methylenblau, also müssen 724 Theile Eosin-Kalium mit 2x;519-4 = 638-8 Th. Methylen- blau den neutralen Farbstoff liefern. Verf. verwendete Lösungen von 1 : 1000 und goss dieselben nach obigem Verliältuiss zusammen. Nach 24 Stunden hatte sich ein feiner Niederschlag gebildet. Die Mischung konnte als neutral angesehen werden. Bei der Herstellung dieser Mischung kommt es sehr darauf an, ob man das Kalium-, Natrium- oder Ammoniumsalz des Eosins benutzt. Beim Abwägen XVII, 2. Referate. . 203 miiss man äusserst genau verfahren. Mau wäge auf einer möglichst genauen Waage von jedem Farbstoff ein Gramm ab und löse jedes getrennt in einem Liter destillirten Wassers. Es kommen dann auf 1000 CO Eosinlösung 882*3 cc Methylenblaulösung. Man giesst also zu 1000 cc einer P^osiulösung 1 : 1000 882 cc einer Methylenblau- lösung 1 : 1000 und lässt diese Mischung wenigstens 2X24 Stunden stehen. Alsdann ist der neutrale Farbstoff fast vollständig aus- gefallen. Die Mischling stellt also jetzt die Suspension des neutralen Farbstoffes in einer wässerigen Flüssigkeit dar. Diese Suspension hält sich nach den Erfahrungen des Verf. bereits 6 Monate. Ihre Haltbarkeit ist aber wahrscheinlich unbegrenzt, wenn man die Mischung nur möglichst steril herstellt und dieselbe , nachdem der Niederschlag ausgefallen ist , nach gutem Umschütteln in kleine Flaschen abfüllt, die man gut verkorkt und vor Sonnenlicht geschützt aufbewahrt. Die Firma Grübler hat es übernommen , die neutrale Mischung herzustellen und in den Handel zu bringen. Unmittelbar vor dem Färben nimmt man von dieser gut geschüttelten Mischung 1 Th. auf 4 Th. Wasser und bringt diese Verdünnung in einem Reagenzglas über einem Bunsenbrenner möglichst schnell zum Auf- kochen. Gleich nach dem Aufkochen kühle man das Reagenzglas in Wasser etwas ab und bringe die zu färbenden Objecte in die noch warme klare Flüssigkeit, auf der sich bald ein grün schillerndes Sättigungshäutchen zeigt. Zu heisse Lösungen schaden den Präpa- raten, doch lassen solche sich mit Vortheil zur Färbung schwer färb- barer Bacterien verwenden. Nach einer halben Stunde ist die Färbung genügend stark, jedoch kann man das Präparat unbeschadet bis zu 6 Stunden in der Farbflüssigkeit lassen. Das Optimum der Färbewirkung richtet sich innerhalb dieser Grenzen natürlich nach der jeweiligen Beschaffenheit und nach der Zahl der Präparate. Die Zeit hat jedoch keinen wesentlichen Einfluss auf die Qualität, sondern nur auf die Intensität der Färbung. Lässt man die Präpa- rate länger in der Farbflüssigkeit, als diese noch genügend gelöste Farbe enthält, so schadet dies der Färbung. Von jetzt an muss man Trockenpräparate und Schnitte getrennt behandeln. Bei Trocken- präparaten wird das Deckglas , das ganz mit schillerndem Nieder- schlag bedeckt sein kann, ohne es vorher abzuspülen zwischen Fliess- papier getrockuet und in absolutem Alkohol solange hin- und her- bewegt, als P'arbwolken abgehen. Das Entfernen des Niederschlages kann man im Alkohol durch Abwischen mit einem weichen Pinsel beschleunigen. Wasserhaltiger Alkohol ist auf das sorgfältigste zu 204 Referate. XVIT, 2. vermeiden. Dann kommt das Deckglas in reines Xylol und kann in Lack oder noch besser in eingedicktem Cedernliolzöl eingeschlossen werden. Für Schnittpräparate ist die Technik folgende: Wenn die Schnitte ans der Farblösuug kommen , sind sie dunkelblau gefärbt, sie werden in 96procentigem Alkohol kurz abgespült und dann in absoluten Alkohol übertragen. Dieser extrahirt aus den Präparaten nur den Farbstoft", der mit dem Gewebe nicht fest verbunden ist, während wasserhaltiger Alkohol das Methylenblau mehr angreift als das Eosin und so die Qualität der Färbung bedenklich beeinflusst. Hat man eine Reihe von Schnitten in absolutem Alkohol differenzirt, so ist derselbe an der Luft wasserhaltig geworden und kann von jetzt an zum ersten Abspülen der Schnitte verwendet werden, wäh- rend man zur Differenzirung frischen absoluten Alkohol nehmen muss. Diese Differenzirung geht sehr langsam vor sich. Der Schnitt kann Je nach seiner Dicke und der Intensität der Färbung selbst bis zu 6 Stunden in absolutem Alkohol verbleiben, jedoch ist die Diffe- renzirung meist nach 2 bis 10 Minuten beendet. Man thut zuerst gut, den Schnitt probeweise in Xylol zu übertragen und mit schwacher Vergrösserung nachzusehen, ob etwa vorhandenes Bindegewebe nicht mehr violett ist, sondern einen reinen, rothen Farbenton angenommen hat, dann ist die Differenzirung als beendet anzusehen. Anstatt der Alkoholdiffereuzirung kann man eine solche mit Anilinöl-Xylol (Anilin- öl 3, Xylol 1) oder in Anilinöl-Alkohol (Anilin 1, Alkohol 3) an- wenden, jedoch verzichtet man hierbei auf sämmtliche violetten Töne, da das Anilin in erster Linie den violetten neutralen Farbstoff" ex- trahirt. Man erhält also mehr rein rothe neben rein blauen Tönen, während die Zwischenstufen mehr oder weniger verloren gehen. Die Wahl des Differeuzirungsmittels richtet sich also nach dem jedes- maligen Zweck. Verf. zieht die Alkoholdiffereuzirung den anderen vor. Auf eine Modification dieser Methode , sowie auf die Färbe- resultate kann ich hier nicht näher eingehen, ich muss deshalb auf das Original verweisen. — Rosin hat aus dem Umstände, dass das Gewebe den neutralen Farbstoff" in seine Componenten zerlegt, einen Beweis für den chemischen Charakter der Gewebsfärbuug erblickt. Verf. ist dieser Ansicht nicht. Nach seinen Versuchen ist man nicht nur berechtigt, sondern fast gezwungen, den Vorgang der Dissociation zur Erklärung der Färbungserscheinuugeu heranzuziehen. Dann be- darf es aber keines chemischen Processes mehr, damit sich ver- schiedene Gewebstheile verschieden färben. Er führt sodann noch mehrere Thatsachen an, die dem chemischen Charakter der Färbung XVII, 2. Eeferate. 205 widersprechen. Er ist wie Rosin zu dem Resultat gelangt, dass wir in dem eosinsauren Methylenblau sowie in den anderen neutralen Farbstoffen Körper vor uns haben, die für die mikroskopische Tech- nik von der grössten Bedeutung sind , besonders , da es ihm jetzt gehmgen ist, diese schwer löslichen Farbverbindungen in wässeriger Lösung mit dem Gewebe in Berührung zu bringen. Schiefferdeclicr {Bomi) . 2. Präparationsmethoden für besondere Zwecke. Ä, Niedere T hieve, Gailllery, M. , et Mesuil, F., 8ur un mode partic ulier de division nucleaire chez les Gregarines (Arch. d'Anat. Microsc. t. III, fasc. 2,3, 1900, p. 140 — 145 av. 1 piche.). Die Untersuchungen wurden ausgeführt am Seleuidium von Spio martineusis. Es wurde die Methode von Siedlecki-^ angewendet: Fixirung in Sublimat-Essigsäure, starke Färbung mit Alaunhämateiu, Ditferenziruug in angesäuertem Alkohol. Die Verff. erhielten gute Präparate von ganzen Gregariuen und konnten alle Veränderungen des Kerns studiren. Schiefferdecher [Bonn). Child, Ch. M., The e a r 1 y d e v e 1 o p m e n t o f A r e n i c o I a and Sternaspis (Arch. f. Entwicklungsmechan. Bd. IX, H. 4, 1900, p. 587—723 m. 5 Tfln.). Die zum Studium verwendeten Eier wurden der grossen, gallert- ähnHchen Eimasse, welche von dem Wurm abgelegt wird, entnommen. Ein Theil dieser Masse , die eine grosse Anzahl von Eiern ent- hielt, wurde abgeschnitten, schnell in kleinere Stücke zerlegt und dann in eine verhältnissmässig grosse Menge von Pikriu- Essigsäure nacli BovERi gebracht. Letztere durchdrang die Gallerte schnell und fixirte die Eier in durchaus befriedigender Weise. Die Gallerte blieb während der Fixirung vollkommen durchsichtig, die Pikrin-Essigsäure wurde zunächst mit 50proceutigem Alkohol, dann mit 70procentigem ausgewaschen, und schliesslich wnirde das Object in 80procentigem ^) SiEDLECKi, Ann, de l'Instit. Pasteuk t. XII, 1898, p. 799, 206 Referate. XVll, -1. Alkoliol conservirt. Unter der Eimvirkuiig des Alkohols sclirumpft die Gallerte und wird weiss , ähnlich dem Fibrin bei geschlagenem Blute. Bringt man die so gehärtete Gallertmasse wieder durch absteigenden Alkohol in destillirtes Wasser, so Avird sie durch- sichtig und löst sich in Wasser auf, so dass die Eier vollkommen frei werden. In leicht angesäuertem Wasser tritt die Auflösung schneller ein , in alkalischem findet keine Auflösung statt. Verf. untersuchte darauf eine Anzahl weiterer Säuren bezüglich ihrer Ein- wirkung auf die Gallerte , so verdünnte Salpetersäure , Salzsäure, Schwefelsäure , Chromsäure , Ameisensäure , Essigsäure , rein wie in verschiedenen Mischungen. Es ergab sich, dass alle mit Ausnahme der Chromsäure dieselbe Wirkung erzielten , die Gallerte blieb in Wasser löslich. Versuche mit den gallertigen jMassen, in denen die Eier anderer Thiere abgelegt werden, ergaben, dass diese Methode auch umfassendere Bedeutung hat. Verf. kommt daher zu dem Schluss, dass die Gallerte nach Fixirung in einer Säure (ausgenommen Chromsäure) und Härtung in Alkohol in einer sehr verdünnten Säure vollkommen löslich ist. — Nachdem die Eier von der Gallerte be- freit waren, wurden sie in stark verdünntem Hämatoxyliu nach Dela- FiELD unter leichter Ansäuerung mehrere Stunden gefärbt, dann aus- gewaschen und gelangten durch steigenden Alkohol bis zu TOpro- centigem. In diesem wird die Färbvmg mit saurem Alkohol so weit ausgezogen, bis die Eier im zurückgeworfenen Licht sehr hell purpur- roth erscheinen. Dann wird die Säure durch Auswaschen in leicht alkalischem Alkohol entfernt , bis die Eier leicht hell graublau aus- sehen. Sie kommen nun durch 95procentigen und absoluten Alkohol in Nelkenöl , worin sie in der Weise untersucht werden , dass man ein langes Deckglas an einem Ende mittels eines Stückchens Glas- stab stützt und dann die Eier in Nelkenöl unter dieses bringt. Da die Eimembran etwas grösser als das Ei selbst und in Nelkenöl etwas faltig und verzogen ist, so kann man die Eier oft ohne Schaden durch Bewegung des Deckglases rollen. Ist nicht zu viel Nelkenöl unter dem Deckglase , so werden die Eier an die Oberfläche des letzteren anstossen und festliegen und können beliebig gerollt wer- den. Das Deckglas muss dick genug sein, um durch die Capillar- attraction nicht durchgebogen zu Averden. Auch wenn die um die Eier liegende Membran verloren gegangen ist, kann man jene ohne Schaden rollen. Die Eier sind in dem Nelkenöl noch ziemlich opak und körnig, docli kann man die Spindeln erkennen; mit dem Fort- schreiten des Furchimgsprocesses werden sie durchsichtiger. Borax- XVII, -2. Referate. 207 (>;innin anb in den ersten Stadien recht gute Resultate, doch zeigt lläniatoxylin bei weitem nielir Details. Bei der Untersuchung der Furchung besonders der späteren Stadien fand Verf. es vortheilhaft, einen Auerbrenner mit einem dünnen blauen Glasplättchen unter dem Mikroskop zu benutzen, da es auf diese Weise mr)glich war, stärkere Vergrösserungeu anzuwenden. Schiefferdecker (Bo?in). Piercks, F., Etüde comparee des gl and es pygidiennes ches les Carabides et les Dytiscides avec quel- ques remarques sur le classemcnt des Cara- bides (La Cellule, t. XVI, 1899, p. 63—176 av. 5 plches.). Die schnellste Methode, bei der man eine gute Fixirung erhält, besteht darin, das Abdomen des lebenden Tliieres aufzuschneiden, die Seitenränder abzuheben, die Rückenhaut abzuziehen und das Object in der Fixiriingsflüssigkeit zu schütteln. Die Organe trennen sich dann, und die anatomische Untersuchung wird erleichtert. Dar- auf wäscht man aus und exstirpirt die Drüse mit ihrem Reser- voir. Man bringt das Präparat auf den Objectträger und entfernt mit Hülfe von Nadeln oder Borsten den Ausführuugsgang. Es ist nicht leicht, namentlich bei den kleineren Species, das Organ ordentlich auszubreiten ohne es zu verletzen. Man benutzt dazu am besten ein Präparirmikroskop. In Glycerin aufbewahrt wird das Organ körnig, in Balsam bewahrt es seine volle Durchsichtigkeit und kann auch mit Hülfe von starken Objectiven auf seine feinere Structur hin untersucht werden. Natürlich muss es vorher sorgfältig ent- wässert sein. Wegen seines geringen Lichtbrechungsvermögens ist das Formol zu empfehlen und zwar am besten ohne irgend eine Protoplasmafärbung, um den Sammelkanal schnell zu untersuchen. Methylgrün zusammen mit Essigsäure von .30 Procent hat ausge- zeichnete Präparate ergeben, sehr klar, mit sehr electiver Färbung, wobei die wenigen, zerstreuten Kerne der mesodermatischen Peritoneal- hülle, welche die Drüsenlappen und die ausführenden Kanäle be- kleidet, deutlich zu sehen waren. Leider verändern sich diese Prä- parate sehr schnell. Während der ersten Stunden aber zeigen gute Objective viele Details, welche auf den besten Schnitten nur wenig hervortreten. Die 2procentige Kalilauge , welche Leydig empfohlen hat, hat vor dem eben angeführten Reagenz keinen Vortheil. Wie dies lässt sie gut die stark lichtbrechenden Chitinelemente hervor- treten, aber der Rest verschwindet: Protoplasma, Haut und Kerne, und bald ist Alles zerstört. — Für genaue histologische Präparate 208 Referate. XVII, 2. zeigte sich das reine Sublimat nicht brauchbar ; es macht das Prota- plasma körnig und undurchsichtig. Was die verschiedeneu Serum- arten, die Säuren und die alkalischen Lösungen anlaugt, so lassen sie die Zellen sich heftig contrahiren und geben zu Zerreissungen der- selben Veranlassung. Bei Anwendung von Flüssigkeiten, die reich an Essigsäure sind , quellen die Bläschen bis zum Platzen. Die FLEMMiNo'sche Flüssigkeit lässt die Bläschen im Gegentheil sich etwas zusammenziehen. Die besten Resultate wurden erhalten mittels einer Mischung von gleichen Theilen der Sublimatlösung von Gilson und der oprocentigen Salpetersäure von Altmank (spec. Gew. 1"02 ^ o*^ Beaume) unter Zufügung von einem Tropfen 2procentiger Osmiumsäure auf je 5 cc. Die Salpetersäure verdünnt allerdings die Membran, aber sie verhindert eine Schrumpfung der Gewebe. Nachdem die Fixi- rung eine Viertelstunde gedauert hat, werden die Objecto direct mit schwachem Alkohol abgewaschen, isolirt und mittels Chloroform in Paraffin eingebettet. Es ist hierbei von Bedeutung, die Zeit, welche das Object in dem reinen Paraffin verweilt, möglichst abzukürzen, und nicht über 50** C. zu gehen; eine höhere Temperatur zerstört unfehlbar die Bläsclien. Eine hübsche Färbung erhält mau, wenn man die Schnitte mit einer Mischung von starkem Alauncarmin und verdünntem Indigcarmin färbt und sie durch Pikrinsäure in wässeriger Lösung entfärbt. Die rothen Kerne heben sich scharf von dem grünen Protoplasmagrunde ab ; die Bläschen erhalten einen dunkel- gelben Ton. Hebt man sofort in Glycerin, dem Alauncarmin und Indigcarmin zugesetzt sind, auf, so werden das Protaplasma asch- grau und die Kerne lebhaft roth, die Bläschen blassblau und die Cuticula gelbgrün. Wünscht man den Bau des Kerns zu untersuchen, so verwendet man am besten Hämatoxylin nach Delafield mit Con- goroth, Bordeauxroth oder Lidigcarmin als Protaplasmafärbung. Man erhält so viel schärfere Bilder als mit den Carminen. Das Safranin giebt keine scharfe Färbung, ebenso wenig zeigt das Eisenhämat- oxylin eine specifische Electivität. — Zerzupfungspräparate waren in besonderen Fällen von Nutzen. So konnte Verf. am besten die Bläschen beobachten, indem er in dem Canadabalsam auf dem Ob- jectträger das vorher mit Hämatoxylin nach Delafield und Indig- carmin gefärbte Organe zerdrückte. Schiefferdecker (Bonn). Lensseu, J., Systeme digestif et Systeme genital de la Neritina fluviatilis (La Cellule t. XVI, 1899, p. 179 — 232 av. 4 plches.). XVII, 2. Referate. 209 Die Untersnchiing- von Neritina ist schwierig. Bevor man das Messer verwenden kann, mnss man erst die Schale und den Deckel abnelimen, was nicht ganz einfach ist, da die Schale eine bedentende Dicke besitzt und der Deckel mit einem Haken versehen ist, der sich tief in den Fussmuskel einsenkt. Um diese Schwierigkeit zu überwinden, setzte Verf. gewöhnlich der Fixirungsflüssigkeit einige Tropfen Salpetersäure zu. Sollte das Object frisch benutzt werden, so wurde die Schale durch einen Hammerschlag zertrümmert und dann Stück für Stück entfernt. Als Fixirungsflüssigkeit wurde meist Sublimat mit Zufügung von Salpetersäure nach der von Gilson ange- gebenen Formel verwendet. Auch eine lOprocentige Formollösung ergab gute Resultate für histologische Untersuchung. Dieselbe wurde von Stunde zu Stunde mit einem gleichen Volumen von SOprocentigem Alkohol verdünnt, bis man bei reinem Alkohol angelangt war. Chrom- säure ergiebt ungefähr dasselbe wie Formol. Sie wurde in ein- procentiger Lösung verwendet, in welcher das Thier 2 Tage verblieb. Zur Färbung dienten hauptsächlich Hämatoxylin und das Alkohol- carmin von Mayer. Die besten Resultate wurden erhalten, wenn diese Farbstoffe in verdünnter Alkohollösung angewendet wurden. Man mnss zuerst langsam färben und dann langsam entfärben, um den überflüssigen Farbstoff zu entfernen. Die anatomische Zerlegung des Thieres diente dazu, um die Lage der einzelnen Organe zu unter- suchen und mitunter einzelne Details des Baues zu erkennen. Die weichen Organe aber, wie der Magen und der imtere Theil der Generationsorgane der Neritina, lassen sich mit Skalpell und Nadel nicht bearbeiten. Verf. verwendete daher hierfür die Methode der Serienschuitte. Hier zeigte sich auch eine Schwierigkeit in der Radula. Die Präparate wurden oft durch die Zähne zerrissen, welche das Rasirmesser mitgeführt hatte. Es wurde dieser Schwierigkeit ziemlich gut dadurch abgeholfen, dass Verf. die Klinge schief stellte. Schiefferdecker (Botin). P jK. Wirhelthieve. * Broman, J., U e b e r Bau und Entwicklung der Spermien bei Bombinator igneus (Anat. Anz. Bd. XVH, 1900, No. 6, 7, p. 129 — 145 m. 24 Figg.). Zeitschr. f. wiss. Jlikroskopie. XVII, 2. 14 210 Referate. XVII, 2. Fixirt wurde vorzugsweise mit dem Hermann' scheu Osmium- gemiscli, wobei der Gelialt au Osmiumsäure uud die Fixiruugszeit (eine bis 8 Wocheu) vielfach variirt wurden. Ein Tlieil der Hoden wurde nach dem Auswaschen noch in toto mit rohem Holzessig be- handelt. Weiter wurden von Fixirungsflüssigkeiten angewendet: FLEMMiNG'sche , ZENKER'schc Flüssigkcit , Kaliumbichromat- Eisessig, Sublimat, Sublimat-Eisessig, Sublimat- Alkohol- Eisessig, Chloroform- Alkohol-Eisessig. Einbettung in Paraffin; Färbung der 5 bis 10 fx dicken Schnitte hauptsächlich mit Eiseuhämatoxylin nach M. Heiden- hain, ferner mit Safranin -Gentiana- Orange nach Flemming, Safranin- Gentiaua mit nachfolgender Jod-Jodkaliumbehaudlung, Bleu de Lyon- Boraxcarmin, EHULicH-BiONDi'sche Dreifarbenmischung. Schieffei'decker {Bomi). Neumaim, E., Eine Notiz über Trockenpräparate von Spermatozoen (Virchow's Arch., Bd. CLIX, p. 173 — 178 m. 5 Figg.). In einer früheren Arbeit^ hat Verf. gezeigt, dass bei den reifen Samenfäden der Rana temporaria der Kopf aus zwei verschiedenen Stücken von verschiedener Beschaffenheit zusammengesetzt ist, einem dickeren Hauptkörper und einem fein zugespitzten Endstück. Zur Darstellung dieses Structurverhältnisses erwies sich ihm damals eine durch Mischung eines Campecheholzextracts mit Alaun hergestellte Hämatoxylinlösung nützlich. Hierbei färbte sich das Hauptstück blau und verbreiterte sich stark. Da Verf. jetzt Versuche, dieselben Bilder mit dieser Methode zu erhalten, nicht geglückt sind, so ver- muthet er, dass die interessanteste Erscheinung, die starke Aufquel- lung des Hauptstückes des Kopfes, weniger von der benutzten Hämat- oxylinlösung , als von einer zur Verdünnung des Sperma dienenden anderen Zusatzflüssigkeit abhängig war. Verf. hat jetzt ein anderes Verfahren gefunden, durch welches man in einfachster Weise mit grosser Sicherheit denselben Erfolg erzielt. Man bringt auf den Objectträger ein dem Hoden oder dem (im Frühjahr) gefüllten Recep- taculum seminis entnommenes Tröpfchen Sperma mit einer dünnen (physiologischen) Kochsalzlösung, stellt sich von dieser Mischung ein Trockenpräparat, am besten durch Abschleudern des Flüssigkeits- tropfens und Schwenken in der Luft her und lässt sodann unter ein 1) Neumann, E., Untersuchungen über die Entwicklung der Spermato- zoiden (Arch. f. mikrosk. Anat. Bd. XI, 1875). XVU, 2. Referate. 211 trocken aul'yelegtes Deckglas ein wenig Metliylviolettlösung (etwa einprocentig oder auch seliwäclier) vom Rande aus eindringen. Inner- halb einer oder weniger Minuten kann auf diese Weise ein Präparat gewonnen Averden, welches die oben erwähnte, dreifache Gliederung des Samenfadens auf das Deutlichste